基因治療冠心病的研究概況
預(yù)防和治療冠狀動脈血管成形術(shù)后再狹窄
局部基因治療的目的在于過度表達(dá)有以下作用的蛋白質(zhì):1)調(diào)節(jié)血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)的細(xì)胞周期;2)抑制VSMC的移行;3)賦予內(nèi)皮細(xì)胞以其血管保護(hù)特性;4)刺激內(nèi)皮的生長和血管生成。另一方面,某些措施傾向于抑制一些蛋白質(zhì)的表達(dá),而這些蛋白質(zhì)被認(rèn)為促進(jìn)VSMC的增殖和移行。
原腫瘤基因在再狹窄的病理生理中起關(guān)鍵的作用。在PTCA操作造成血管壁損傷之后,生長因子附著在細(xì)胞表面的受體上,并激活原腫瘤基因,這一過程反過來刺激細(xì)胞分裂。另一方面,細(xì)胞的分裂還可受細(xì)胞周期抑制因子水平減少的刺激。抑制原腫瘤基因或增強(qiáng)細(xì)胞周期抑制物的作用,可防止細(xì)胞分裂,從而減少再狹窄的發(fā)生率。
可能的基因療法
1、 細(xì)胞分裂的抑制 反義寡核苷酸,如用針對原腫瘤基因,如c-myb和c-myc增殖細(xì)胞核抗原和細(xì)胞周期調(diào)節(jié)基因的反義寡核苷酸,可起到一種誘餌的作用,并抑制細(xì)胞分裂的激活。用反義寡核苷酸的動物實(shí)驗(yàn)研究取得的結(jié)果各異。在人類的研究正在進(jìn)行中。
, 百拇醫(yī)藥
2、 抑制細(xì)胞增殖療法 這種療法是在不使細(xì)胞死亡的情況下抑制細(xì)胞分裂,其主要的目標(biāo)是促進(jìn)抑制細(xì)胞分裂周期基因,如視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因或生長停止同源框(growth arrest homeobox,Gax)基因的表達(dá)。Gax基因是一種只在血管平滑肌和心肌細(xì)胞中才發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞周期抑制物。當(dāng)在動物模型中發(fā)生動脈損傷時,Gax的表達(dá)減少。在一種頸動脈損傷模型,用腺病毒載體轉(zhuǎn)染了Gax基因后,導(dǎo)致了新內(nèi)膜增殖的減少。
3、 視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因(Rb) 此基因在正常情況下抑制細(xì)胞周期。有人已用腺病毒載體轉(zhuǎn)移低磷酸化的Rb基因(高度磷酸化之后便釋放轉(zhuǎn)錄因子即E2F,激活細(xì)胞周期)證實(shí),可減少新內(nèi)膜的增厚。有人用一種寡核苷酸競爭性地結(jié)合E2F,抑制其激活原腫瘤基因如c-myc、c-myb、CdC2以及增殖細(xì)胞核抗原的能力。在大鼠頸動脈模型,這種療法導(dǎo)致了損傷后8周新內(nèi)膜增生的減少。
4、細(xì)胞毒性治療 這種治療是以選擇性方式來破壞正在增殖的平滑肌細(xì)胞。這一措施的原型例子是單純皰疹病毒1型的胸腺嘧啶激酶基因(HSV-tk)。這種基因在用更昔洛韋治療后可被轉(zhuǎn)染到平滑肌細(xì)胞中去。HSV-tk基因可使更昔洛韋磷酸化,創(chuàng)造出一種有毒性的核苷類似物,而這種物質(zhì)能破壞正在增殖的細(xì)胞,對靜止的細(xì)胞則無作用。在再狹窄的動物模型,用HSV-tk基因治療引起了新內(nèi)膜增生的減少。
, 百拇醫(yī)藥
5、血管生成治療 一氧化氮(NO)合酶基因已在人體試驗(yàn)中鑒定,NO是內(nèi)皮來源的松弛因子,其特點(diǎn)是使血管擴(kuò)張和抑制血小板凝聚。初步試驗(yàn)包括:成功的體外該基因在血管平滑肌細(xì)胞中的表達(dá),以及在造成大鼠頸動脈的磨擦傷之后向管腔內(nèi)遞送這種基因。其結(jié)果引起了NO合酶的增多、改善了血管運(yùn)動,并且減少了新內(nèi)膜的增殖。
動物實(shí)驗(yàn)研究
球囊血管成形術(shù)等治療措施不可避免地?fù)p傷冠狀動脈內(nèi)膜,甚至中層。術(shù)后大多發(fā)生再狹窄。PTCA后再狹窄形成的原因是:由于平滑肌細(xì)胞增殖和由于細(xì)胞外基質(zhì)的合成而致的新內(nèi)膜的增生造成。到目前為止,臨床上已經(jīng)證實(shí)有效的預(yù)防再狹窄的措施只有血管內(nèi)放射治療。但放射治療尚有損傷周圍組織、出現(xiàn)新的狹窄(特別是在放射治療的血管段的兩端,因放射劑量可能不足以抑制細(xì)胞增生而導(dǎo)致狹窄,——根據(jù)King教授的大會報告, 參看《中國醫(yī)學(xué)論壇報》,2000年1月6日)等問題。因此,有人采用不同的抑制增生物質(zhì)的基因,試圖阻止再狹窄。這類物質(zhì)有以下幾種。
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1) 動脈內(nèi)膜的損傷(如PTCA等)可造成再狹窄, 而殺菌肽(cecropin)這類物質(zhì)有抗微生物及抑制增生作用。這種物質(zhì)是某些昆蟲(包括蠶)的體內(nèi)及豬的小腸中存在的具有抗菌及抑制增生作用的肽,是體液免疫的一部分。這些肽及其未成熟型物質(zhì)如前原殺菌肽(pre-pro-cecropins),對哺乳動物細(xì)胞有抑制細(xì)胞分裂周期的作用。用其基因可減少細(xì)胞增殖。
前原殺菌肽抑制細(xì)胞周期已得到充分證實(shí)(如在白血病、淋巴瘤、膀胱癌細(xì)胞等)。其作用機(jī)制可能是使線粒體的呼吸(鏈)中斷、抑制蛋白質(zhì)向線粒體的轉(zhuǎn)運(yùn)、從而減少能量產(chǎn)生、最終抑制細(xì)胞分裂。成熟的殺菌肽的作用方式與前原殺菌肽的不同,前者被帶負(fù)電荷的細(xì)胞膜吸附,導(dǎo)致堿性N端區(qū)的α螺旋構(gòu)型,聚集并通過造成膜孔形成,發(fā)揮細(xì)胞毒性作用。而未成熟型物質(zhì)則無細(xì)胞毒性作用,只有抑制細(xì)胞周期的作用。
Nikol等對豬造成實(shí)驗(yàn)性動脈內(nèi)膜損傷后,用一種帶注射針頭的導(dǎo)管將含有前原殺菌肽 A基因的質(zhì)粒(與脂質(zhì)體相混合)注射到病變血管周圍, 21天后顯著地減少了新內(nèi)膜的形成(P< 0.05)。基因只在動脈壁有表達(dá)(只測定出其mRNA,未測蛋白質(zhì),因尚無抗體)。
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2)在新內(nèi)膜形成過程中,有動脈中層平滑肌細(xì)胞的增生, 而Gax轉(zhuǎn)錄因子(transcription factor)的過度表達(dá)可抑制其增生。以重組Gax基因的腺病毒載體呈遞該基因到大鼠頸動脈后3、7、14天,可見中層平滑肌細(xì)胞數(shù)顯著減少, 增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)被完全阻止;而TUNEL陽性中層血管平滑肌細(xì)胞增多。這表明細(xì)胞增殖停止,并且有大量細(xì)胞發(fā)生凋亡。
3)用視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因(Rb基因)抑制平滑肌的增殖。
4)用HSV-tk基因使正在增殖的細(xì)胞對細(xì)胞毒性物質(zhì)變得敏感, 從而允許使用選擇性化療。
5)用VEGF基因促進(jìn)內(nèi)皮再形成。
6)針對血管損傷后平滑肌增生,有人用細(xì)胞周期特異性蛋白質(zhì)P21, delta Rb和HSV-tk進(jìn)行基因治療的實(shí)驗(yàn)。這類研究的結(jié)果表明,在數(shù)個種屬動物正在繁殖的平滑肌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞在體內(nèi)均受抑制。
, 百拇醫(yī)藥
有研究者將針對細(xì)胞周期蛋白(cyclin)B1的磷酸氰氫酸(phosphorothionate)反義寡核苷酸和為CDC2-激酶編碼的基因轉(zhuǎn)移至用球囊損傷了的大鼠頸動脈內(nèi),作為實(shí)驗(yàn)性再狹窄的一種潛在的療法。轉(zhuǎn)染后2周,針對CDC2激酶或細(xì)胞周期蛋白B1的這種反義寡核苷酸治療引起了部分的但是顯著的對新內(nèi)膜形成的抑制。相反,無論是順義寡核苷酸或是混合的對照寡核苷酸都無效。有趣的是,與其中任何一種基因靶單獨(dú)阻滯相比,將針對CDC2激酶和細(xì)胞周期蛋白B的反義寡核苷酸協(xié)同轉(zhuǎn)染,引起了新內(nèi)膜形成的進(jìn)一步的抑制。這些結(jié)果證實(shí):HVJ-脂質(zhì)體介導(dǎo)的針對CDC2激酶和細(xì)胞周期蛋白B1的反義寡核苷酸的使用,引起對球囊損傷后新內(nèi)膜形成的持久的抑制。
7)直接將NO合酶轉(zhuǎn)移到血管壁使NO產(chǎn)生增多,可能代表對血管增生性疾病的一種強(qiáng)有力的療法。此研究使豬的冠狀動脈段在37℃暴露于編碼牛內(nèi)皮細(xì)胞NO合酶的復(fù)制缺陷型腺病毒或?qū)φ?小時。然后用針對NO合酶的單抗以免疫組化方法測定動脈組織中該酶(內(nèi)皮和外層中顯著增多)、測定局部產(chǎn)生的NO量(顯著增多)、以及測定經(jīng)前列腺素F2α處理后血管張力的變化(顯著減低,P=0.05)。預(yù)先將血管在NG-單甲基-L-精氨酸孵育,可消除這一效果。結(jié)論是,用該方法可成功地轉(zhuǎn)移NO合酶,得到了免疫組化和其他測定的證實(shí)。
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8)原腫瘤基因(proto-oncogene)在冠狀動脈再狹窄中可能起重要的作用。用反義寡核苷酸抑制原腫瘤基因的表達(dá),有可能防止再狹窄。另外,用分子誘餌(decoy)或藥理治療阻斷細(xì)胞周期進(jìn)展所需要的特異步驟,以及轉(zhuǎn)移腫瘤抑制基因,也有可能防止再狹窄。在動物模型中已經(jīng)顯示了這類策略的明顯成功。這些分子療法在預(yù)防球囊血管成形術(shù)和血管支架置入后的內(nèi)膜增殖和再狹窄中的作用是有價值的。
9)已有人用腺病毒及其他載體證實(shí),編碼細(xì)胞溶解性(胸腺嘧啶激酶)或細(xì)胞抑制(低磷酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白、內(nèi)皮NO合酶、Gax等)產(chǎn)物的治療性基因,成功地抑制了平滑肌細(xì)胞的增殖和相關(guān)的內(nèi)膜增生。
有人試圖改變動脈壁細(xì)胞基因的表達(dá),以抑制血栓形成和平滑肌的激活。Flugelman等用了遺傳上修飾了的內(nèi)皮細(xì)胞以播種血管內(nèi)假體(prosthesis),并在體外和體內(nèi)測試了細(xì)胞對假體的黏附。他們試圖在動物實(shí)驗(yàn)中證實(shí):1離體基因轉(zhuǎn)移(在體外對血管平滑肌細(xì)胞進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染,然后將這些細(xì)胞“種植”于支架表面);2體內(nèi)血管內(nèi)病毒載體直接轉(zhuǎn)移(用前后式雙球囊封閉一段血管腔,然后高壓轉(zhuǎn)移30分鐘)的效果。
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結(jié)果表明,支架表面種植的細(xì)胞在支架展開并經(jīng)2小時的液流實(shí)驗(yàn)后,支架表面仍有80%的細(xì)胞,且有增殖能力及典型形態(tài),并且在59%±39%的表面積上可測定出轉(zhuǎn)染基因(所用的基因是表達(dá)人tPA的基因和新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因)。
體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果表明,雙球囊高壓轉(zhuǎn)移,無論在完好的動脈或在球囊損傷動脈,雙囊之間69%~98%的動脈段內(nèi)膜上有轉(zhuǎn)移物質(zhì)(以熒光素及墨汁染色顆粒為指標(biāo)),外膜的19%~55%段亦有顆粒。中層則很少(0~5%)。(所研究的是來自18根動脈的227張切片。)腺病毒溶液經(jīng)雙囊注入后,在高壓(5個大氣壓)轉(zhuǎn)移后,中層有受轉(zhuǎn)染細(xì)胞,但有多處細(xì)胞壞死及內(nèi)皮細(xì)胞完全喪失。這證明了如果不使內(nèi)皮細(xì)胞裸露, 并作高壓注射的話,病毒顆粒不能穿透內(nèi)皮層。不穩(wěn)定型心絞痛病人冠脈平滑肌細(xì)胞中證實(shí)有酸性和堿性FGF表達(dá)。
(未完待續(xù))
(映月) , http://www.www.srpcoatings.com
局部基因治療的目的在于過度表達(dá)有以下作用的蛋白質(zhì):1)調(diào)節(jié)血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)的細(xì)胞周期;2)抑制VSMC的移行;3)賦予內(nèi)皮細(xì)胞以其血管保護(hù)特性;4)刺激內(nèi)皮的生長和血管生成。另一方面,某些措施傾向于抑制一些蛋白質(zhì)的表達(dá),而這些蛋白質(zhì)被認(rèn)為促進(jìn)VSMC的增殖和移行。
原腫瘤基因在再狹窄的病理生理中起關(guān)鍵的作用。在PTCA操作造成血管壁損傷之后,生長因子附著在細(xì)胞表面的受體上,并激活原腫瘤基因,這一過程反過來刺激細(xì)胞分裂。另一方面,細(xì)胞的分裂還可受細(xì)胞周期抑制因子水平減少的刺激。抑制原腫瘤基因或增強(qiáng)細(xì)胞周期抑制物的作用,可防止細(xì)胞分裂,從而減少再狹窄的發(fā)生率。
可能的基因療法
1、 細(xì)胞分裂的抑制 反義寡核苷酸,如用針對原腫瘤基因,如c-myb和c-myc增殖細(xì)胞核抗原和細(xì)胞周期調(diào)節(jié)基因的反義寡核苷酸,可起到一種誘餌的作用,并抑制細(xì)胞分裂的激活。用反義寡核苷酸的動物實(shí)驗(yàn)研究取得的結(jié)果各異。在人類的研究正在進(jìn)行中。
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2、 抑制細(xì)胞增殖療法 這種療法是在不使細(xì)胞死亡的情況下抑制細(xì)胞分裂,其主要的目標(biāo)是促進(jìn)抑制細(xì)胞分裂周期基因,如視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因或生長停止同源框(growth arrest homeobox,Gax)基因的表達(dá)。Gax基因是一種只在血管平滑肌和心肌細(xì)胞中才發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞周期抑制物。當(dāng)在動物模型中發(fā)生動脈損傷時,Gax的表達(dá)減少。在一種頸動脈損傷模型,用腺病毒載體轉(zhuǎn)染了Gax基因后,導(dǎo)致了新內(nèi)膜增殖的減少。
3、 視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因(Rb) 此基因在正常情況下抑制細(xì)胞周期。有人已用腺病毒載體轉(zhuǎn)移低磷酸化的Rb基因(高度磷酸化之后便釋放轉(zhuǎn)錄因子即E2F,激活細(xì)胞周期)證實(shí),可減少新內(nèi)膜的增厚。有人用一種寡核苷酸競爭性地結(jié)合E2F,抑制其激活原腫瘤基因如c-myc、c-myb、CdC2以及增殖細(xì)胞核抗原的能力。在大鼠頸動脈模型,這種療法導(dǎo)致了損傷后8周新內(nèi)膜增生的減少。
4、細(xì)胞毒性治療 這種治療是以選擇性方式來破壞正在增殖的平滑肌細(xì)胞。這一措施的原型例子是單純皰疹病毒1型的胸腺嘧啶激酶基因(HSV-tk)。這種基因在用更昔洛韋治療后可被轉(zhuǎn)染到平滑肌細(xì)胞中去。HSV-tk基因可使更昔洛韋磷酸化,創(chuàng)造出一種有毒性的核苷類似物,而這種物質(zhì)能破壞正在增殖的細(xì)胞,對靜止的細(xì)胞則無作用。在再狹窄的動物模型,用HSV-tk基因治療引起了新內(nèi)膜增生的減少。
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5、血管生成治療 一氧化氮(NO)合酶基因已在人體試驗(yàn)中鑒定,NO是內(nèi)皮來源的松弛因子,其特點(diǎn)是使血管擴(kuò)張和抑制血小板凝聚。初步試驗(yàn)包括:成功的體外該基因在血管平滑肌細(xì)胞中的表達(dá),以及在造成大鼠頸動脈的磨擦傷之后向管腔內(nèi)遞送這種基因。其結(jié)果引起了NO合酶的增多、改善了血管運(yùn)動,并且減少了新內(nèi)膜的增殖。
動物實(shí)驗(yàn)研究
球囊血管成形術(shù)等治療措施不可避免地?fù)p傷冠狀動脈內(nèi)膜,甚至中層。術(shù)后大多發(fā)生再狹窄。PTCA后再狹窄形成的原因是:由于平滑肌細(xì)胞增殖和由于細(xì)胞外基質(zhì)的合成而致的新內(nèi)膜的增生造成。到目前為止,臨床上已經(jīng)證實(shí)有效的預(yù)防再狹窄的措施只有血管內(nèi)放射治療。但放射治療尚有損傷周圍組織、出現(xiàn)新的狹窄(特別是在放射治療的血管段的兩端,因放射劑量可能不足以抑制細(xì)胞增生而導(dǎo)致狹窄,——根據(jù)King教授的大會報告, 參看《中國醫(yī)學(xué)論壇報》,2000年1月6日)等問題。因此,有人采用不同的抑制增生物質(zhì)的基因,試圖阻止再狹窄。這類物質(zhì)有以下幾種。
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1) 動脈內(nèi)膜的損傷(如PTCA等)可造成再狹窄, 而殺菌肽(cecropin)這類物質(zhì)有抗微生物及抑制增生作用。這種物質(zhì)是某些昆蟲(包括蠶)的體內(nèi)及豬的小腸中存在的具有抗菌及抑制增生作用的肽,是體液免疫的一部分。這些肽及其未成熟型物質(zhì)如前原殺菌肽(pre-pro-cecropins),對哺乳動物細(xì)胞有抑制細(xì)胞分裂周期的作用。用其基因可減少細(xì)胞增殖。
前原殺菌肽抑制細(xì)胞周期已得到充分證實(shí)(如在白血病、淋巴瘤、膀胱癌細(xì)胞等)。其作用機(jī)制可能是使線粒體的呼吸(鏈)中斷、抑制蛋白質(zhì)向線粒體的轉(zhuǎn)運(yùn)、從而減少能量產(chǎn)生、最終抑制細(xì)胞分裂。成熟的殺菌肽的作用方式與前原殺菌肽的不同,前者被帶負(fù)電荷的細(xì)胞膜吸附,導(dǎo)致堿性N端區(qū)的α螺旋構(gòu)型,聚集并通過造成膜孔形成,發(fā)揮細(xì)胞毒性作用。而未成熟型物質(zhì)則無細(xì)胞毒性作用,只有抑制細(xì)胞周期的作用。
Nikol等對豬造成實(shí)驗(yàn)性動脈內(nèi)膜損傷后,用一種帶注射針頭的導(dǎo)管將含有前原殺菌肽 A基因的質(zhì)粒(與脂質(zhì)體相混合)注射到病變血管周圍, 21天后顯著地減少了新內(nèi)膜的形成(P< 0.05)。基因只在動脈壁有表達(dá)(只測定出其mRNA,未測蛋白質(zhì),因尚無抗體)。
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2)在新內(nèi)膜形成過程中,有動脈中層平滑肌細(xì)胞的增生, 而Gax轉(zhuǎn)錄因子(transcription factor)的過度表達(dá)可抑制其增生。以重組Gax基因的腺病毒載體呈遞該基因到大鼠頸動脈后3、7、14天,可見中層平滑肌細(xì)胞數(shù)顯著減少, 增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)被完全阻止;而TUNEL陽性中層血管平滑肌細(xì)胞增多。這表明細(xì)胞增殖停止,并且有大量細(xì)胞發(fā)生凋亡。
3)用視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因(Rb基因)抑制平滑肌的增殖。
4)用HSV-tk基因使正在增殖的細(xì)胞對細(xì)胞毒性物質(zhì)變得敏感, 從而允許使用選擇性化療。
5)用VEGF基因促進(jìn)內(nèi)皮再形成。
6)針對血管損傷后平滑肌增生,有人用細(xì)胞周期特異性蛋白質(zhì)P21, delta Rb和HSV-tk進(jìn)行基因治療的實(shí)驗(yàn)。這類研究的結(jié)果表明,在數(shù)個種屬動物正在繁殖的平滑肌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞在體內(nèi)均受抑制。
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有研究者將針對細(xì)胞周期蛋白(cyclin)B1的磷酸氰氫酸(phosphorothionate)反義寡核苷酸和為CDC2-激酶編碼的基因轉(zhuǎn)移至用球囊損傷了的大鼠頸動脈內(nèi),作為實(shí)驗(yàn)性再狹窄的一種潛在的療法。轉(zhuǎn)染后2周,針對CDC2激酶或細(xì)胞周期蛋白B1的這種反義寡核苷酸治療引起了部分的但是顯著的對新內(nèi)膜形成的抑制。相反,無論是順義寡核苷酸或是混合的對照寡核苷酸都無效。有趣的是,與其中任何一種基因靶單獨(dú)阻滯相比,將針對CDC2激酶和細(xì)胞周期蛋白B的反義寡核苷酸協(xié)同轉(zhuǎn)染,引起了新內(nèi)膜形成的進(jìn)一步的抑制。這些結(jié)果證實(shí):HVJ-脂質(zhì)體介導(dǎo)的針對CDC2激酶和細(xì)胞周期蛋白B1的反義寡核苷酸的使用,引起對球囊損傷后新內(nèi)膜形成的持久的抑制。
7)直接將NO合酶轉(zhuǎn)移到血管壁使NO產(chǎn)生增多,可能代表對血管增生性疾病的一種強(qiáng)有力的療法。此研究使豬的冠狀動脈段在37℃暴露于編碼牛內(nèi)皮細(xì)胞NO合酶的復(fù)制缺陷型腺病毒或?qū)φ?小時。然后用針對NO合酶的單抗以免疫組化方法測定動脈組織中該酶(內(nèi)皮和外層中顯著增多)、測定局部產(chǎn)生的NO量(顯著增多)、以及測定經(jīng)前列腺素F2α處理后血管張力的變化(顯著減低,P=0.05)。預(yù)先將血管在NG-單甲基-L-精氨酸孵育,可消除這一效果。結(jié)論是,用該方法可成功地轉(zhuǎn)移NO合酶,得到了免疫組化和其他測定的證實(shí)。
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8)原腫瘤基因(proto-oncogene)在冠狀動脈再狹窄中可能起重要的作用。用反義寡核苷酸抑制原腫瘤基因的表達(dá),有可能防止再狹窄。另外,用分子誘餌(decoy)或藥理治療阻斷細(xì)胞周期進(jìn)展所需要的特異步驟,以及轉(zhuǎn)移腫瘤抑制基因,也有可能防止再狹窄。在動物模型中已經(jīng)顯示了這類策略的明顯成功。這些分子療法在預(yù)防球囊血管成形術(shù)和血管支架置入后的內(nèi)膜增殖和再狹窄中的作用是有價值的。
9)已有人用腺病毒及其他載體證實(shí),編碼細(xì)胞溶解性(胸腺嘧啶激酶)或細(xì)胞抑制(低磷酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白、內(nèi)皮NO合酶、Gax等)產(chǎn)物的治療性基因,成功地抑制了平滑肌細(xì)胞的增殖和相關(guān)的內(nèi)膜增生。
有人試圖改變動脈壁細(xì)胞基因的表達(dá),以抑制血栓形成和平滑肌的激活。Flugelman等用了遺傳上修飾了的內(nèi)皮細(xì)胞以播種血管內(nèi)假體(prosthesis),并在體外和體內(nèi)測試了細(xì)胞對假體的黏附。他們試圖在動物實(shí)驗(yàn)中證實(shí):1離體基因轉(zhuǎn)移(在體外對血管平滑肌細(xì)胞進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染,然后將這些細(xì)胞“種植”于支架表面);2體內(nèi)血管內(nèi)病毒載體直接轉(zhuǎn)移(用前后式雙球囊封閉一段血管腔,然后高壓轉(zhuǎn)移30分鐘)的效果。
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結(jié)果表明,支架表面種植的細(xì)胞在支架展開并經(jīng)2小時的液流實(shí)驗(yàn)后,支架表面仍有80%的細(xì)胞,且有增殖能力及典型形態(tài),并且在59%±39%的表面積上可測定出轉(zhuǎn)染基因(所用的基因是表達(dá)人tPA的基因和新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因)。
體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果表明,雙球囊高壓轉(zhuǎn)移,無論在完好的動脈或在球囊損傷動脈,雙囊之間69%~98%的動脈段內(nèi)膜上有轉(zhuǎn)移物質(zhì)(以熒光素及墨汁染色顆粒為指標(biāo)),外膜的19%~55%段亦有顆粒。中層則很少(0~5%)。(所研究的是來自18根動脈的227張切片。)腺病毒溶液經(jīng)雙囊注入后,在高壓(5個大氣壓)轉(zhuǎn)移后,中層有受轉(zhuǎn)染細(xì)胞,但有多處細(xì)胞壞死及內(nèi)皮細(xì)胞完全喪失。這證明了如果不使內(nèi)皮細(xì)胞裸露, 并作高壓注射的話,病毒顆粒不能穿透內(nèi)皮層。不穩(wěn)定型心絞痛病人冠脈平滑肌細(xì)胞中證實(shí)有酸性和堿性FGF表達(dá)。
(未完待續(xù))
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