中草藥化學(xué)成分一般鑒別方法
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《化學(xué)分析概述》
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中草藥化學(xué)成分一般鑒別方法
中草藥主要來(lái)源于植物。植物的化學(xué)成分較復(fù)雜，有些成分是植物所共有的，如纖維素、蛋白質(zhì)、油脂、淀粉、糖類、色素等。有些成分僅是某些植物所特有的，如生物堿類、甙類、揮發(fā)油、有機(jī)酸、鞣質(zhì)等。
各類化學(xué)成分均具有一定的特性，一般可由藥材的外觀、色、嗅、味等作為初步檢查判斷的手段之一。如藥材樣品折斷后，斷面不油點(diǎn)或擠壓后有油跡者，多含油脂或揮發(fā)油；有粉層的多含淀粉、糖類；嗅之有特殊氣味者，大多含有揮發(fā)油、香豆精、內(nèi)酯；有甜奈者多含糖類；味若者大多含生物堿、甙類、苦味質(zhì)；味酸者含有有機(jī)酸；味澀者多含有鞣質(zhì)等等。
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中草藥所含化學(xué)成分均為多類的混合物，分析時(shí)常�；ハ喔蓴_，不易得到正確結(jié)果。因此需根據(jù)中草藥所含各種化學(xué)成分的溶解度、酸堿度、極性等理化性質(zhì)，再用各類成分的鑒別反應(yīng)加以鑒別。
(一)鑒別注意事項(xiàng)
1.根據(jù)各灰成分不同性質(zhì)，選用適宜的溶劑提取，以保證等成分能被提取出來(lái)。
2.檢品提取液的濃度應(yīng)足以達(dá)到各該反應(yīng)的靈敏度。
3.檢品提取液的酸堿度(pH)值應(yīng)不致影響鑒別反應(yīng)中所需要的pH值。相差甚大時(shí)應(yīng)事先調(diào)節(jié)。
4.提取液較深時(shí)，常易影響觀察鑒別反應(yīng)的效果，此時(shí)可適當(dāng)稀釋，或進(jìn)一步提純。
5.鑒別反應(yīng)時(shí)應(yīng)注意防止多類成分的相互干擾，以免出現(xiàn)假陽(yáng)性，或顏色不正等情況。最好在化學(xué)鑒別的同時(shí)，做空白試驗(yàn)和對(duì)照試驗(yàn)(用已知含某類成分的中草藥或純品做陽(yáng)性對(duì)照)。
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6.在鑒別試驗(yàn)中，如果某一類成分的幾個(gè)鑒別反應(yīng)結(jié)果不一致時(shí)(即有的呈陽(yáng)性反應(yīng)，有的呈陰性)則應(yīng)進(jìn)行全面分析。首先應(yīng)注意呈陽(yáng)性反應(yīng)的試驗(yàn)是否屬于該類成分的專一反應(yīng)，否則應(yīng)檢查其他類成分能否產(chǎn)生該反應(yīng)，從多方面加以判斷。但也應(yīng)注意，某些反應(yīng)只能對(duì)某一類成分中的某個(gè)化學(xué)基團(tuán)呈性反應(yīng)，如檢查黃酮類的鹽酸――鎂粉試驗(yàn)，它只對(duì)黃酮類中的羥基黃酮類(黃酮醇類)反應(yīng)明顯，其余類的黃酮類則不甚明顯，但也不能輕易否定不是黃酮類，為了避免孤立和片面的下結(jié)論，一定要全面考慮綜合分析。
中草藥化學(xué)成分一般鑒別試驗(yàn)屯只是一個(gè)初步判斷，最后確證尚需進(jìn)一步提純，以鑒定后才能予以肯定。
(二)鑒別方法
蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸
(1)加熱或礦酸試驗(yàn)：取檢品的水溶液1ml于試管中，加熱至沸或加5%鹽酸，如發(fā)生混濁或有沉淀示含有水溶性蛋白質(zhì)。
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(2)縮二脲試驗(yàn)：取檢品的水溶液1ml，加10%氧化鈉溶液2滴，充分搖勻，逐漸加入硫酸銅試液，隨加搖勻，注意觀察，如呈現(xiàn)紫色或紫紅色示可能含有蛋白質(zhì)和氨基酸。
凡蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中含有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵(-CONH-)者均有此反應(yīng)，能在堿性溶液中與Cu2+生成仙絡(luò)合物，呈現(xiàn)一系列的顏色反應(yīng)，二肽呈藍(lán)色，三肽呈紫色，加肽以上呈紅色，肽鍵越多顏色越紅。
(3)茚三酮試驗(yàn)，取檢品的水溶液1ml，加入茚三酮試液2-3滴，加熱煮沸4-5分鐘，待其冷卻，呈現(xiàn)紅色棕色或藍(lán)紫色(蛋白質(zhì)、胨類、肽類及氨基酸)。
α氨基酸與茚三酮的水合作物作用，氨其酸氧化成醛、氨和二氧化碳，而茚三酮被還原成仲醇，與所后成的氨及另一分子茚三酮縮合生成有藍(lán)紫色的化合物。
【注】①茚三酮試劑主要是多肽和氨基酸的顯色劑，反應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。試劑溶液pH值以5-7為宜，必要時(shí)可加吡啶數(shù)滴或醋酸鈉調(diào)整。
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②此反應(yīng)非常靈敏，但有個(gè)別氨基酸不能呈紫色，而呈黃色，如脯氨酸。
(4)氨基酸薄層層析檢出反應(yīng)：
①吸附劑：硅膠G。
②展開劑：(1)正丁醇：水(1：1)(2)正丁醇：醋酸：水(4：1：5)
③顯色劑：0.5%茚三酮丙酮溶液，噴霧后于1100烘箱放置5分鐘，顯藍(lán)紫允或紫色。
2.皂甙
(1)泡沫試驗(yàn)：取檢品的水溶液2ml于帶塞試管中，用力振搖3分鐘，即產(chǎn)生持久性蜂窩狀泡沫(維持10分鐘以上)，且泡沫量不少于液體體積的1/3。
【注】常用的增溶劑吐溫、司盤，振搖時(shí)均能產(chǎn)生持久性泡沫，要注意區(qū)別。
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(2)溶血試驗(yàn)：取試管4支，分別加入濾液0.25、0.5、0.75
ml，然后依次分別加入生理鹽水2.25、2.0、1.75、1.5
ml，使每一個(gè)試管中的溶液都成為2.5ml,再將各試管加入2%的血細(xì)胞懸液2.5ml，振搖均勻后，同置于370水浴或25-270的室溫中注意觀察溶血情況，一般觀察3小時(shí)即可，或先滴紅細(xì)胞于顯微鏡下，然后滴加檢液看血細(xì)胞是否消失。如有溶血現(xiàn)象示正反應(yīng)。
【注】①鞣質(zhì)對(duì)血紅細(xì)胞有凝集作用，干擾溶血試驗(yàn)的觀察，應(yīng)事先除去(可用取勝酰胺粉吸附或用明膠沉淀)。
②檢液應(yīng)為中性溶液。
(3)醋酐濃硫酸試驗(yàn)(Liebrmann
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Burchard反應(yīng))取檢品的水溶液置蒸發(fā)皿中，于水浴上蒸干，殘?jiān)尤肷倭勘姿崾谷芙猓偌尤氪佐麧饬蛩?19：1)試液，呈現(xiàn)紅紫色并變成污色綠色(甾類、三萜類成分或皂甙)
(4)區(qū)別甾體皂甙和三萜皂甙：取帶塞試管兩支，各盛檢品的水溶解1
ml，1支加0.1N鹽酸溶液2ml，另一支加0.1N氫氧化鈉溶液2ml用力振搖1分鐘(需左右手交替振搖各半分鐘)，觀察兩管泡沫的多少，若兩管泡沫體積相同或酸管多，示含三萜式皂甙；若加堿管泡沫多于加酸管示含甾示含甾體皂甙。
三萜皂甙為酸性皂甙在酸性水溶液中形成較穩(wěn)定的泡沫；甾體皂甙為中性皂甙在堿笥溶液中能形成較穩(wěn)定的泡沫。
3.糖、多糖或甙類
(1)堿性酒石酸銅試液：取檢品的水溶液1-2ml(如為醇溶液須將醇蒸發(fā)除去)，加入堿笥酒石酸銅試液1ml，于沸水浴上加熱5分鐘，產(chǎn)生棕紅色或磚紅色氧化亞銅沉淀，示有還原糖。
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還原糖能使二價(jià)銅鹽(藍(lán)色)還原成氧化亞銅，醛糖的醛基氧化成羧基：
【注】①如檢液呈酸性，應(yīng)先堿化。
②此反應(yīng)所產(chǎn)生的沉淀由于條件不同，其顏色也不同，質(zhì)點(diǎn)上的呈黃色，質(zhì)點(diǎn)大的呈紅色。有保持性膠體存在時(shí)，也常產(chǎn)生黃色沉淀。
③職樣品中含有其他醛、酮及還原較強(qiáng)的其他成分，或中劃藥制劑中附加的抗氧劑、；葡萄糖等均可顯陽(yáng)性反應(yīng)。
(2)α萘酚試驗(yàn)(Molisch紫環(huán)反應(yīng))：取檢品的水溶液1ml，加5%萘酚試液數(shù)滴振搖后，沿管壁滴入5-6滴濃硫酸，使成兩液層，待2-3分鐘后，兩層液面出現(xiàn)紫紅色環(huán)(糖、多糖或甙類)。
多糖類遇濃硫酸被水解成單糖，單糖被濃硫酸脫水閉環(huán)，形成糠醛類化合物，在濃硫酸存在下與α萘酚發(fā)生酚醛縮合反應(yīng)，生成紫紅色縮合物。
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【注】①甙的分子結(jié)構(gòu)中含有糖基，一般屬于單糖類，如葡萄糖，鼠李糖、半乳糖，但也有含二分子糖(雙糖)或多分子糖(多糖)。在上述反應(yīng)條件下，甙被水解成單糖，因此甙萘酚試驗(yàn)，系分子中糖部分的反應(yīng)。
②由于此反應(yīng)較為靈敏，如有微量濾紙纖維或中草藥粉末存在于溶液中，都能產(chǎn)生上述反應(yīng)。故濾過(guò)時(shí)應(yīng)加注意。
(3)多糖的確證試驗(yàn)：取檢品的水溶液5ml于水蒸發(fā)至干，加入1ml蒸餾水，再加入乙醇5ml，如出現(xiàn)沉淀，濾過(guò)收集后用少量熱乙醇洗滌，再將沉淀物溶于3ml蒸餾水中，做下例試驗(yàn)。
①碘試驗(yàn)：取檢品的不溶液1ml，加碘試液1滴，觀察顏色變化，如呈藍(lán)黑色為地衣糖；紫黑色為糊精；藍(lán)色加熱消失，冷后藍(lán)色再現(xiàn)為淀粉。
②多糖水解：取檢品的水溶液1ml，加入稀鹽酸5滴，置沸水浴中加熱10-15分鐘，然后用10%氫氧化鈉液中和至中性，再加新配制的堿性酒石酸銅試淮4滴，另取檢液1ml，不加酸水解直接加入上述試液4滴，兩管同置水浴上煮沸5-6分鐘。如果水解后生成棕紅色常常物的量比未經(jīng)水解的多，則示有多糖。
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多糖水解后產(chǎn)生單糖，利用單糖的還原性，使銅離子還原成氧化亞銅。
4.鞣質(zhì)及酚類
(1)三氯化鐵試驗(yàn)：取檢品的水溶液1ml，加三氯化鐵試液1-2滴，呈現(xiàn)綠色、污綠色、藍(lán)黑色或暗紫色(可水解鞣質(zhì)顯藍(lán)一藍(lán)黑色，縮合鞣顯綠色一污綠色)。
鞣質(zhì)均是多羥基酚的衍生物，即多元酚，能和三價(jià)鐵離子發(fā)生顏色反應(yīng)生成復(fù)雜的絡(luò)鹽。
【注】此反應(yīng)如遇有礦酸或有機(jī)酸、醋酸鹽等存在，能阻礙顏色的生成。硝基酚類對(duì)三氯化鐵試劑無(wú)明顯反應(yīng)。
(2)明膠試驗(yàn)：取檢品的水溶液1ml，加氯化鈉明溶液2-3滴，即生成白色沉淀物。
鞣質(zhì)有凝固蛋白的性能。
, http://www.www.srpcoatings.com (3)溴試驗(yàn)：取檢品的水溶液1ml，加溴試液1-2滴，生成白色或沉淀物，示可能含有酚或兒茶酚鞣質(zhì)。
【注】過(guò)多的溴會(huì)阻礙鞣質(zhì)的沉淀，因此溴水不宜多加。
(4)香草醛一酸試驗(yàn)：取檢品的水溶液點(diǎn)于濾紙片上，干后，噴霧或滴加香草醛一鹽酸試液，呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)(多元酚類物質(zhì))。
(5)鞣質(zhì)、酚類薄層層析檢出反應(yīng)：
①吸附劑：聚酰胺；硅膠；硅膠；石膏：水(5：1：7)調(diào)成狀，涂成薄板，1050烘干45分鐘。
②展開劑：乙醇：醋酸(100：2)；正丁醇：乙酸乙酯：水(5：4：1)；苯：甲醇(95：5)。
③顯色劑：10%三氯化鐵溶液；1%三氯化鐵乙醇溶液與1%鐵氰化鉀水溶液(1：1)顯藍(lán)一紫色斑點(diǎn)。
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5.黃酮及其甙類
(1)鹽酸一鎂(或鋅)粉試驗(yàn)：取檢品的乙醇溶液1ml，加放少量鎂粉(或鋅粉)，然后加濃鹽酸4-5滴，置沸水浴中加熱2-3分鐘，如出現(xiàn)紅色示有游離黃酮類或黃酮甙(以同法不加鎂或粉做一對(duì)照，如兩管都顯紅色則有花色素存在。如繼續(xù)加碳酸試液使成堿笥即變成紫色雙轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色，即證明含花色素)。
黃酮類的乙醇溶液，在鹽酸存在的情況下，能被鎂粉還原，生成花色甙元而呈現(xiàn)紅色或紫色反應(yīng)(個(gè)別為淡黃色、橙色、紫色或藍(lán)色)。這是由于酮類化合物分子中含有一個(gè)堿性氧原子，致能溶于稀酸中被還原成帶四價(jià)的氧原子即鋅鹽。本法是鑒別黃酮類的一個(gè)反應(yīng)。但花色素本身在酸性下(不需加鎂粉)呈紅色，應(yīng)加以區(qū)別。
【注】①此反慶僅在化學(xué)結(jié)構(gòu)中，第三位上帶羥基的酮醇類顯色較明顯，而其它黃酮烷酮類均不甚明顯。因此試驗(yàn)呈陰性反慶是不能做出否定的結(jié)論，尚需結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)再做結(jié)論。
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②試驗(yàn)應(yīng)在醇中進(jìn)行，水分多會(huì)影響顏色的生成。此反慶較慢，有時(shí)需置水浴上加熱，以促使反應(yīng)的進(jìn)行。
(2)熒光試驗(yàn)：
①三氯化鋁試驗(yàn)：取檢品的乙醇溶液點(diǎn)于濾紙片上(干后再點(diǎn)1次，使其濃度庥中)，干后，噴霧1%三氯化鋁乙醇試液，在紫外光燈下觀察，呈現(xiàn)黃色、綠色、橙色等熒光為黃酮類；呈現(xiàn)天藍(lán)色或黃綠色；熒光，則為二氫黃酮類。這是區(qū)別二氫黃酮類化合物的一種鑒別反應(yīng)。
②硼酸丙酮枸櫞酸丙酮試驗(yàn)：取檢品的乙醇溶液1ml，在沸水浴上蒸干加入飽和硼酸丙酮溶液及10%枸櫞酸丙酮溶液各0.5ml，蒸去丙酮后，在紫外光燈下觀察，管內(nèi)呈現(xiàn)強(qiáng)烈的綠色熒光(黃酮或其甙類)。
(3)堿液試驗(yàn)：取檢品的乙醇溶液點(diǎn)于濾紙片上(干后，再點(diǎn)一次，使其溶液集中)，干后，噴1%碳酸鈉溶液或在氨蒸氣中熏幾分鐘，呈現(xiàn)亮黃、綠或橙黃色。如將氨氣熏過(guò)的濾紙露置空氣中，顏色逐漸裉去而變?yōu)樵械念伾?黃酮或其甙類)。, http://www.www.srpcoatings.com
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