洋地黃生物檢定法
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《儀器分析法概述》
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洋地黃生物檢定法
本法系比較洋地黃標準品(S)與供試品(T)對鴿的最小公斤致死量，以測定供試品的效價。 標準品溶液的配制 迅速精密稱取洋地黃標準品適量，避免吸潮，置玻璃容器內(nèi)，按標示效價計算，每1單位精密加入76%乙醇1ml，密塞，連續(xù)振搖1小時，靜置片刻,用干燥濾器迅速濾過，防止乙醇揮發(fā)，濾液即為每1ml中含1單位的溶液，4～8℃貯存，如無沉淀析出，可在1個月內(nèi)使用。 標準品稀釋液的配制 試驗當日，精密量取標準品溶液適量,用0.9%氯化鈉溶液稀釋，稀釋液濃度(u/ml)應調(diào)節(jié)適當(一般可用1→30),使鴿的平均最小公斤致死量在25～34ml之間。 供試品溶液和稀釋液的配制 供試品如為粉末，精密稱取適量，按標示量或估計效價(A<[T]>)，照標準品溶液及其稀釋液的配制法配制；供試品如為片劑，取20片以上，精密稱重，求出平均片重，迅速研細，再精密稱取不少于20片的粉末，按稱重及標示量(A<[T]>)計算，照標準品溶液及其稀釋液配制法配制。供試品稀釋液和標準品稀釋液的鴿平均最小公斤致死量(ml)應相近。 檢定法 取健康無傷的鴿，試驗前16～24小時移去飼料，但仍給予飲水，臨試驗前準確稱重，選取體重在250～400g的鴿(每次試驗所用鴿的體重相差不得超過100g),分成兩組，每組至少6只，一組為標準品組,一組為供試品組，兩組間鴿的情況應盡可能相近。 將鴿仰縛于適宜的固定板上，在一側(cè)翼靜脈處拔除羽毛少許，露出翼靜脈，插入與最小刻度不大于0.02ml的滴定管相連的注射針頭，緩緩注入標準品稀釋液或供試品稀釋液，開始時，一次注入0.5ml，然后以每分鐘0.2ml的等速連續(xù)注入，至鴿中毒死亡立即停止注入。一般死亡前有強烈顫抖、惡心嘔吐、排便等現(xiàn)象發(fā)生，至瞳孔迅速放大、呼吸停止為終點。記錄注入稀釋液的總量(ml),換算成每1kg體重致死量(ml)中所含單位數(shù)(u/Kg)，取其10倍量的對數(shù)值作為反應值，照生物檢定統(tǒng)計法(附錄Ⅹ Ⅳ)中的直接測定法計算效價及實驗誤差。 本法的可信限率(FL%)不得大于15%。
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肝素生物檢定法
本法系比較肝素標準品(S)與供試品(T)延長新鮮兔血或兔、豬血漿凝結(jié)時間的作用,以測定供試品的效價。 標準品溶液的配制 精密稱取肝素標準品適量,按標示效價加滅菌水溶解使成每1ml中含100單位的溶液，分裝于適宜的容器內(nèi)，4～8℃貯存，如無沉淀析出，可在3個月內(nèi)使用。 標準品稀釋液的配制 試驗當日，精密量取標準品溶液，按高、中、低劑量組(ds<[3]>、ds<[2]>、ds<[1]>)用0.9%氯化鈉溶液配成三種濃度的稀釋液，相鄰兩濃度的比值(r)應相等;調(diào)節(jié)劑量使低劑量組各管的平均凝結(jié)時間較不加肝素對照管組明顯延長。高劑量組各管的平均凝結(jié)時間，用新鮮兔血者，以不超過60分鐘為宜，其稀釋液一般可配成每1ml中含肝素2～5單位，r為1:0.7左右；用血漿者,以不超過30分鐘為宜，其稀釋液一般可配成每1ml中含肝素0.5～1.5單位，r為1∶0.85左右。 供試品溶液與稀釋液的配制 按供試品的標示量或估計效價(A<[T]>)，照標準品溶液與稀釋液的配制法配成高、中、低(dT<[3]>、dT<[2]>、dT<[1]>)三種濃度的稀釋液。相鄰兩濃度之比值(r)應與標準品相等，供試品與標準品各劑量組的凝結(jié)時間應相近。 血漿的制備 迅速收集兔或豬血置預先放有8%枸櫞酸鈉溶液的容器中,枸櫞酸鈉溶液與血液容積之比為1:19，邊收集邊輕輕振搖，混勻，迅速離心約20分鐘(離心力不超過1500×g為宜，g為重力常數(shù))。立即分出血漿，分成若干份分裝于適宜容器內(nèi)，低溫凍結(jié)貯存。臨用時置37±0.5℃水浴中融化,用兩層紗布或快速濾紙過濾，使用過程中在4～8℃放置。 檢定法 (1)新鮮兔血 取管徑均勻(0.8×3.8cm或1.0×7.5cm)、清潔干燥的小試管若干支，每管加入一種濃度的標準品或供試品稀釋液0.1ml,每種濃度不得少于3管,各濃度的試管支數(shù)相等。取剛抽出的兔血適量，分別注入小試管內(nèi)，每管0.9ml,立即混勻,避免產(chǎn)生氣泡，并開始計算時間。將小試管置37±0.5℃恒溫水浴中，從動物采血時起至小試管放入恒溫水浴的時間不得超過3分鐘，注意觀察并記錄各管的凝結(jié)時間。 (2)血漿 取上述規(guī)格的小試管若干支，分別加入血漿一定量，置37±0.5℃恒溫水浴中預熱5～10分鐘后，依次每管加入一種濃度的標準品或供試品稀釋液及1%氯化鈣溶液(每種濃度不得少于3管,各濃度的試管支數(shù)相等)，血漿、肝素稀釋液和氯化鈣溶液的加入量分別為0.5、0.4和0.1ml(或0.8、0.1和0.1ml)，加入氯化鈣溶液后，立即混勻，避免產(chǎn)生氣泡，并開始計算時間，注意觀察并記錄各管凝結(jié)時間。將各管凝結(jié)時間換算成對數(shù)，照生物檢定統(tǒng)計法(附錄Ⅹ Ⅳ)中的量反應平行線測定法計算效價及實驗誤差。 檢定法(1)的可信限率(FL%)不得大于10%。 檢定法(2)的可信限率(FL%)不得大于5%。, http://www.www.srpcoatings.com
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