胰島素生物檢定法
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《儀器分析法概述》
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胰島素生物檢定法
本法系比較胰島素標(biāo)準(zhǔn)品(S)與供試品(T)引起小鼠血糖下降的作用，以測(cè)定供試品的效價(jià)。
標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制
精密稱取胰島素標(biāo)準(zhǔn)品適量,按標(biāo)示效價(jià)，加入每100ml中含有苯酚0.2g并用鹽酸調(diào)節(jié)pH值為2.5的0.9%氯化鈉溶液，使溶解成每1ml中含20單位的溶液，分裝于適宜的容器內(nèi)，4～8℃貯存，如無(wú)沉淀析出，可在3個(gè)月內(nèi)使用。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的配制
試驗(yàn)當(dāng)日，精密量取標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，按高低劑量組(ds<[2]>、ds<[1]>)加0.9%氯化鈉溶液(pH2.5)配成兩種濃度的稀釋液,高低劑量的比值(r)不得大于1:0.5。高濃度稀釋液一般可配成每1ml中含0.06～0.12單位，調(diào)節(jié)劑量使低劑量能引起血糖明顯下降，高劑量不致引起血糖過(guò)度降低，高低劑量間引起的血糖下降有明顯差別。
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供試品溶液與稀釋液的配制
按供試品的標(biāo)示量或估計(jì)效價(jià)(A<[T]>)，照標(biāo)準(zhǔn)品溶液與其稀釋液的配制法配成高、低兩種濃度的稀釋液，其比值(r)應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)品相等,供試品和標(biāo)準(zhǔn)品高低劑量所致的反應(yīng)平均值應(yīng)相近。
檢定法
取健康無(wú)傷、同一來(lái)源、同一性別、出生日期相近的成年小鼠，體重相差不得超過(guò)3g，按體重隨機(jī)分成4組，每組不少于10只,逐只編號(hào),各組小鼠分別自皮下注入一種濃度的標(biāo)準(zhǔn)品或供試品稀釋液，每鼠0.2～0.3ml，但各鼠的注射體積(ml)應(yīng)相等。注射后40分鐘，按給藥順序分別自眼靜脈叢采血，用適宜的方法，如葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化酶法測(cè)定血糖值。第一次給藥后間隔至少3小時(shí),按雙交叉設(shè)計(jì)，對(duì)每組的各鼠進(jìn)行第二次給藥，并測(cè)定給藥后40分鐘的血糖值。照生物檢定統(tǒng)計(jì)法(附錄Ⅹ
Ⅳ)中量反應(yīng)平行線測(cè)定雙交叉設(shè)計(jì)法計(jì)算效價(jià)及實(shí)驗(yàn)誤差。
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本法的可信限率(FL%)不得大于25%。
絨促性素生物檢定法
本法系比較絨促性素標(biāo)準(zhǔn)品(S)與供試品(T)對(duì)幼小鼠子宮增重的作用，以測(cè)定供試品的效價(jià)。
標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制 試驗(yàn)當(dāng)日,按絨促性素標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)示效價(jià)加0.9%氯化鈉溶液配成每1ml中含10單位的溶液，充分溶解后，再用0.5%羧甲基纖維素鈉溶液按高、中、低劑量組(ds<[3]>、ds<[2]>、ds<[1]>)配成三種濃度的稀釋液，相鄰兩濃度之比值(r)應(yīng)相等，且不得大于1∶0.5。
一般高濃度稀釋液可配成每1ml中含0.3～0.8單位。調(diào)節(jié)劑量使低劑量組子宮較正常子宮明顯增重,高劑量組子宮增重不致達(dá)到極限。稀釋液置4～8℃貯存，可供3日使用。
供試品溶液的配制
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按供試品的標(biāo)示量或估計(jì)效價(jià)(A<[T]>)，照標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制法配成高、中、低(dT<[3]>、dT<[2]>、dT<[1]>)三種濃度的稀釋液,相鄰兩濃度之比值(r)應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)品相等，供試品與標(biāo)準(zhǔn)品各劑量組所致反應(yīng)平均值應(yīng)相近。
檢定法 取健康無(wú)傷、出生17～23日、體重9～13g、同一來(lái)源的雌性幼小鼠，一次實(shí)驗(yàn)所用幼小鼠的出生日數(shù)相差不得超過(guò)3日，體重相差不得超過(guò)3g；按體重隨機(jī)分成6組，每組不少于15只。每日于大致相同的時(shí)間分別給每鼠皮下注入一種濃度的標(biāo)準(zhǔn)品或供試品稀釋液0.2ml，每日一次，連續(xù)注入3次，于最后一次注入24小時(shí)后,將動(dòng)物處死,稱體重，解剖，于陰道和子宮交接處剪斷，摘出子宮，剝離附著的組織，去掉卵巢，壓干子宮內(nèi)液，直接稱重(精密至0.5mg)并換算成每10g體重的子宮重,照生物檢定統(tǒng)計(jì)法(附錄Ⅹ Ⅳ)中的量反應(yīng)平行線測(cè)定法計(jì)算效價(jià)及實(shí)驗(yàn)誤差。
本法的可信限率(FL%)不得大于25%。, 百拇醫(yī)藥
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