精確誘導(dǎo)表達(dá)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)
Part a shows heat shock inducible
expression of EGFP throughout a living zebrafish embryo. Parts b and c
show single-cell induction of EGFP in the developing ear. (Images supplied by John Kuwada.)
以往利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)在動(dòng)物體內(nèi)的特定位置特定時(shí)間表達(dá)已不是難事。傳統(tǒng)的技術(shù)讓基因處于細(xì)胞或組織特異性啟動(dòng)子的控制之下,但找到理想的控制子卻頗費(fèi)周折。另有一種讓hsp啟動(dòng)子來調(diào)節(jié)基因表達(dá),它可以讓基因在受熱條件下表達(dá),但同時(shí)幾乎所有地方的hsp啟動(dòng)子都會(huì)使受控基因表達(dá)。
僅僅在一個(gè)細(xì)胞內(nèi)表達(dá)特定基因是多么奢侈的想法啊!
Halloran et al.聲稱已經(jīng)做到了。他們將激光對(duì)準(zhǔn)斑馬魚活體的單個(gè)細(xì)胞就可以隨心所欲地讓目標(biāo)基因表達(dá)了。
Halloran et al.首先克隆了人hsp70啟動(dòng)子的斑馬魚同源片段,將其融合到EGFP上游,當(dāng)此融合基因的斑馬魚轉(zhuǎn)基因胚胎在37℃下培養(yǎng)1h后,EGFP在整個(gè)機(jī)體內(nèi)部都被誘導(dǎo)表達(dá)。接下來,當(dāng)他們把亞致死量的激光對(duì)準(zhǔn)單個(gè)細(xì)胞時(shí),EGFP融合蛋白在此細(xì)胞里表達(dá),并維持2小時(shí)以上。斑馬魚的發(fā)育可以不受熒光蛋白的影響,照舊進(jìn)行。
這個(gè)聰明的主意將會(huì)有廣泛的應(yīng)用,一方面,EGFP可以標(biāo)志受控基因的表達(dá),另一方面激光誘導(dǎo)基因的表達(dá)帶來的高度特異性,也能盡量摒除動(dòng)物體內(nèi)遺傳背景的差異。但有一點(diǎn)很重要,斑馬魚之所以被選作實(shí)驗(yàn)材料是因?yàn)樗陌l(fā)育的大部分階段都是全身透明的。正因?yàn)橥该鞑艜?huì)讓激光可以隨意使用,如果對(duì)不透明的生物體進(jìn)行這個(gè)實(shí)驗(yàn)會(huì)怎么樣呢?
相關(guān)文章:
Original research paper
Halloran, M.C. et al. Laser-induced gene expression in
specific cells of transgenic zebrafish. Development 127, 1953-1960 (2000).
Further reading
Stringham, E.G. & Candido, E.P. Targeted
single-cell induction of gene products in Caenorhabditis elegans: a
new tool for developmental studies. J. Exp. Zool. 266, 227-233 (1993).
Harris, J. et al. Neuronal cell migration in C. elegans:
regulation of Hox gene expression and cell position. Development 122,3117-3131(1996).
Haflon M. S. et al. Targeted gene expression without a
tissue-specific promoter: creating mosaic embryos using laser-induced
single-cell heat shock. Proc. Natl Acad. Sci. USA 94, 6255-6260 (1997)., http://www.www.srpcoatings.com
expression of EGFP throughout a living zebrafish embryo. Parts b and c
show single-cell induction of EGFP in the developing ear. (Images supplied by John Kuwada.)
以往利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)在動(dòng)物體內(nèi)的特定位置特定時(shí)間表達(dá)已不是難事。傳統(tǒng)的技術(shù)讓基因處于細(xì)胞或組織特異性啟動(dòng)子的控制之下,但找到理想的控制子卻頗費(fèi)周折。另有一種讓hsp啟動(dòng)子來調(diào)節(jié)基因表達(dá),它可以讓基因在受熱條件下表達(dá),但同時(shí)幾乎所有地方的hsp啟動(dòng)子都會(huì)使受控基因表達(dá)。
僅僅在一個(gè)細(xì)胞內(nèi)表達(dá)特定基因是多么奢侈的想法啊!
Halloran et al.聲稱已經(jīng)做到了。他們將激光對(duì)準(zhǔn)斑馬魚活體的單個(gè)細(xì)胞就可以隨心所欲地讓目標(biāo)基因表達(dá)了。
Halloran et al.首先克隆了人hsp70啟動(dòng)子的斑馬魚同源片段,將其融合到EGFP上游,當(dāng)此融合基因的斑馬魚轉(zhuǎn)基因胚胎在37℃下培養(yǎng)1h后,EGFP在整個(gè)機(jī)體內(nèi)部都被誘導(dǎo)表達(dá)。接下來,當(dāng)他們把亞致死量的激光對(duì)準(zhǔn)單個(gè)細(xì)胞時(shí),EGFP融合蛋白在此細(xì)胞里表達(dá),并維持2小時(shí)以上。斑馬魚的發(fā)育可以不受熒光蛋白的影響,照舊進(jìn)行。
這個(gè)聰明的主意將會(huì)有廣泛的應(yīng)用,一方面,EGFP可以標(biāo)志受控基因的表達(dá),另一方面激光誘導(dǎo)基因的表達(dá)帶來的高度特異性,也能盡量摒除動(dòng)物體內(nèi)遺傳背景的差異。但有一點(diǎn)很重要,斑馬魚之所以被選作實(shí)驗(yàn)材料是因?yàn)樗陌l(fā)育的大部分階段都是全身透明的。正因?yàn)橥该鞑艜?huì)讓激光可以隨意使用,如果對(duì)不透明的生物體進(jìn)行這個(gè)實(shí)驗(yàn)會(huì)怎么樣呢?
相關(guān)文章:
Original research paper
Halloran, M.C. et al. Laser-induced gene expression in
specific cells of transgenic zebrafish. Development 127, 1953-1960 (2000).
Further reading
Stringham, E.G. & Candido, E.P. Targeted
single-cell induction of gene products in Caenorhabditis elegans: a
new tool for developmental studies. J. Exp. Zool. 266, 227-233 (1993).
Harris, J. et al. Neuronal cell migration in C. elegans:
regulation of Hox gene expression and cell position. Development 122,3117-3131(1996).
Haflon M. S. et al. Targeted gene expression without a
tissue-specific promoter: creating mosaic embryos using laser-induced
single-cell heat shock. Proc. Natl Acad. Sci. USA 94, 6255-6260 (1997)., http://www.www.srpcoatings.com
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百拇醫(yī)藥網(wǎng) http://www.www.srpcoatings.com/Html/Info/News/67/06703.htm