幽門螺桿菌感染的診斷方法及臨床評價.pdf
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· 專題報告 ·
幽門螺桿菌感染的診斷方法及臨床評價
張萬岱 徐令民
幽門螺桿M ( H e l i c o b a c t e r p y l o r i , H p ) 的鑒定是研究病因
及致病機(jī)理和臨床治療的關(guān)健。診斷H p 的方法很多， 機(jī)理
各 異 ， 目 的 及 有 效 性 也 不 一 樣 · ?夢 這 些 方 法 的 原 理 和 應(yīng) 用特點(diǎn)作一簡單說明， 并結(jié)合實(shí)際應(yīng)用情況對我國1 9 9 9 年
三 亞 的H p 共 識 意 見 及 診 斷 部 分 作 一 回 顧 和 墨 紅 已 一 _ 一 、 飾診 斷方法的原理、 分類及其特點(diǎn)
( 一 ) 依據(jù)H p 的 典型形態(tài)的 形態(tài)學(xué)檢測
原理依據(jù): l i p 具有典型的形態(tài)特點(diǎn)。在自 然生境的胃
粘膜上一般皇典型的“ S " 彎曲， 可較粗大或細(xì)小， 因觀察角度
不同可呈“ c ’型或“ 海鷗狀” ， 培養(yǎng)時間較短時可呈典型形態(tài)
或桿狀彎曲， 動勺 弱， 電鏡下可觀察到1 根至數(shù)根鞭毛， 多位
于一端。在生存條件不利的情況下， 如抗生素作用、 培養(yǎng)時
間較長菌落過于密集或培養(yǎng)條件差時多呈“ U ' ， 形或大小不
等的球狀， 多個細(xì)小的球形體常有絲狀結(jié)構(gòu)相連。G r a m染
色呈陰性( 紅色)G i e m e e 染色呈紫紅色， 銀染易呈棕褐色。
鑒別: 彎曲狀形態(tài)需與彎曲菌屬細(xì)菌區(qū)別。彎曲菌屬細(xì)
菌形態(tài)彎曲或呈娜旋狀， 也較易發(fā)生球形變， 動力強(qiáng)， 但形態(tài)
及大小不一致， 菌體細(xì)長， 姍旋數(shù)1 至1 0 多個。也需與多種
螺旋菌( 海爾受螺桿菌、 多種動物胃內(nèi)的燎旋菌等) 鑒別， 后
者主要表現(xiàn)為菌體粗、 娜旋多且多致密， 有顯著的差別。也
需與弧菌鑒別， 很少情況下胃內(nèi)H p 部分形態(tài)較典型但部分
可表現(xiàn)為弧形， 經(jīng)鑒定也是H p ， 一般弧菌屬細(xì)菌很少在胃內(nèi)
長期定植。根據(jù)H p 的形態(tài)特點(diǎn)， 建立了多重相應(yīng)的形態(tài)學(xué)
檢測方法， 主要有:
1 . 胃粘膜涂片( 印片) C 啊 染色方法: 活檢一塊胃粘膜
組織， 粘腆面在潔凈的玻片上涂片成約0 . 5 e m ， 自然干澡
G r e e n染色油鏡觀察即可， 方便， 操作時間最短需5 一1 0 m i n ,如果涂片面積不太大， 同一塊組織同時作快速尿素醉試驗(yàn)
( R L T r ) 一般不 影響結(jié)果。 該方法是區(qū) 別H p 及海爾曼螺桿菌
( H h ) 的最好的方法之一。
與涂片染色方法類似， 也可以行胃粘膜壓片暗視野觀察
或相差顯徽鏡觀察. 裕用油鏡觀察( x 1 0 0 0 ) 或超高倍鏡檢
( 放大4 0 0 0 倍以上) 。 在液體環(huán)境有時可觀察到H p 的運(yùn)動。
2組織切片特殊染色: 常規(guī)活檢粘腆包埋切片， 行H E
染色W a r d - S t a r r y 銀染色、 改良G i e } 染色或甲苯胺藍(lán)染
色等在油鏡「 觀察， 根據(jù)典型形態(tài)的H p 進(jìn)行診斷。3 種染
作者單位 5 1 1 1 5 1 5 廣州， 第一軍醫(yī)大學(xué)南方醫(yī)院全軍消化內(nèi)科研
究所
色中以銀染色細(xì)菌與組織及粘液的對比最好， 而以H E最
差， G i e m a e 染色界于兩者之間。銀染色可以介人于組織內(nèi)或
腺腔內(nèi)單個的典型細(xì)菌， 而H E 染色僅能觀寮到大量或成簇
的飾�？梢詤^(qū)別尿素酶試驗(yàn)均為陽性的H p 或H h ， 但不能
確定球形變的H p 。此時可通過原位的免疫組化學(xué)方法進(jìn)行
檢測， 而抗體的特異性和敏感性對結(jié)果有很大的影響。
( 二) 依據(jù)飾的 典型生化反應(yīng)的尿素酶依賴性檢測
l i p 可產(chǎn)生目 前已知活性最強(qiáng)的細(xì)菌尿素酶， 分布于胞
質(zhì)和胞膜表面， 也可分泌至細(xì)胞外， 尿素醉可分解胃液中和
所定植部位的尿素產(chǎn)生二氧化碳與氨， 后者可中和胃酸而有
利于細(xì)菌定植致病。根據(jù)這一生化反應(yīng)原理， 人們設(shè)計(jì)了多
種尿眾酶依賴診斷方法。
原理依據(jù): H p 具有的強(qiáng)尿素酶活性， 遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于目 前已知
的產(chǎn)尿素酶的細(xì)菌， 自 然狀態(tài)下H p 定植量也很大， 因此， 通
過尿素酶活性檢測具有敏感和特異的特點(diǎn)。由于服藥( 抗生
家 及 制 酸 藥) 等因 家, H p 形態(tài) 發(fā)生變 形( 球形變) ， 產(chǎn) 尿素醉
減少， 可能使依賴尿素酶的試驗(yàn)敏感性下降， 因此， 對于服用
抗H p 藥物及P P I 制劑者， 通常要求停藥1 個月以上再進(jìn)行
尿素酶依賴性試驗(yàn)， 這樣才有診斷的價值。但有時也見到數(shù)
月后尿素酶活性才恢復(fù)到可檢測水平的情況。其他的生化
反應(yīng)敏感性、 特異性及實(shí)用性不大， 僅有時在細(xì)菌培養(yǎng)茵株
鑒定時用。
鑒別: 經(jīng)過不規(guī)則治療， 對尿素醉依賴性試驗(yàn)有較大的
影響， 易出現(xiàn)假陰性。如降低診斷悶值， 有時與其他產(chǎn)尿素
酶的細(xì)菌( 包括變形桿菌、 翻萄球菌、 醉母菌等) 鑒別較困難。
但一般都不能通過尿素醉試驗(yàn)區(qū) 別活性均較強(qiáng)的飾和H h ,H h 的尿素醉活性可能較H p 弱很多， 但由于H h 在人胃內(nèi)長
期定植時細(xì)菌t常很少， 尿素醉活性很弱( 可疑或弱陽性) ，與服抗生素后的情況不易區(qū)別; 而在急性感染時細(xì)茵t也很
大， 故不能鑒別。
根據(jù)H p 的代謝特點(diǎn)和途徑， 已建立了多重相應(yīng)的生化
檢測方法用于臨床， 主要有:
1 . 快速尿素酶試驗(yàn)( R U C ) : 通常筋要胃鏡檢查取活檢，通過尿素底物被分解， 檢測其代謝產(chǎn)物的量， 包括產(chǎn)氨引起
的p H 明顯變化或其他代謝產(chǎn)物的量。 通過對H p 在胃內(nèi)的
生境及H p 定植部位的相關(guān)性分析， 幽門及胃竇是H p 最先
定植和最多定植的部位， 其次是胃的小彎側(cè)( 主要是胃角) ，然后是責(zé)門、 胃 底和胃 體。 通過對胃 多 點(diǎn)取材的H p 檢查， 發(fā)
現(xiàn)月賓雖然不能完全代表H p 在胃內(nèi)檢側(cè)出， 但也沒有顯著中 華 K ' k. l t 2 0 0 2 生 魚 旦 A % 8 2業(yè){ I 1 N a t l M 絲 止 C h i n e A u m , e t 里 2 0 0 2 V o l 8 2 S l p p l e m a i l
性差異， 只要胃竇沒有太嚴(yán)重且彌漫的病變， 胃竇粘膜活檢
的快速尿家降試驗(yàn)有足夠的代表性。需注意一般在距幽門
約2 一 5。有胃竇尤其小彎側(cè)鉗取， 盡量避免在糜爛和潰瘍
中央及腫物的部位活檢。至于反應(yīng)時間控制方面， 國外傾向
士檢測時間為2 0一 6 0 m i n ， 但不適應(yīng)我國的臨床工作特點(diǎn)
我國胃鏡檢查一般3 一 5 m i n 做一例， 于5 一1 0 n u n 完成報告，故 一 般要求1 一 3 m i n 即能得出陽性結(jié)果， 3 一1 0 m i n 得出弱
陽性結(jié)果， 對陰性病例的確定一般要求超過1 0 m i n ， 不規(guī)則
服藥的病例可適當(dāng)延長。故可根據(jù)出現(xiàn)陽性反應(yīng)的時間及
強(qiáng)度半定量胃粘膜中H p 的細(xì)菌量。同時需要注意， 尿素在
液體狀態(tài)下易緩慢分解( 假陽性) ， 因劑型而異， 不能觀察太
長的時1 1 4 ; 在受潮和半固體狀態(tài)下也易緩慢潮解。而保質(zhì)的
方法多采用中和潮解產(chǎn)生的氨， 不可避免也會降低試劑的敏
感性
為f 了 解H p 在活體胃內(nèi)的分布 ......
· 專題報告 ·
幽門螺桿菌感染的診斷方法及臨床評價
張萬岱 徐令民
幽門螺桿M ( H e l i c o b a c t e r p y l o r i , H p ) 的鑒定是研究病因
及致病機(jī)理和臨床治療的關(guān)健。診斷H p 的方法很多， 機(jī)理
各 異 ， 目 的 及 有 效 性 也 不 一 樣 · ?夢 這 些 方 法 的 原 理 和 應(yīng) 用特點(diǎn)作一簡單說明， 并結(jié)合實(shí)際應(yīng)用情況對我國1 9 9 9 年
三 亞 的H p 共 識 意 見 及 診 斷 部 分 作 一 回 顧 和 墨 紅 已 一 _ 一 、 飾診 斷方法的原理、 分類及其特點(diǎn)
( 一 ) 依據(jù)H p 的 典型形態(tài)的 形態(tài)學(xué)檢測
原理依據(jù): l i p 具有典型的形態(tài)特點(diǎn)。在自 然生境的胃
粘膜上一般皇典型的“ S " 彎曲， 可較粗大或細(xì)小， 因觀察角度
不同可呈“ c ’型或“ 海鷗狀” ， 培養(yǎng)時間較短時可呈典型形態(tài)
或桿狀彎曲， 動勺 弱， 電鏡下可觀察到1 根至數(shù)根鞭毛， 多位
于一端。在生存條件不利的情況下， 如抗生素作用、 培養(yǎng)時
間較長菌落過于密集或培養(yǎng)條件差時多呈“ U ' ， 形或大小不
等的球狀， 多個細(xì)小的球形體常有絲狀結(jié)構(gòu)相連。G r a m染
色呈陰性( 紅色)G i e m e e 染色呈紫紅色， 銀染易呈棕褐色。
鑒別: 彎曲狀形態(tài)需與彎曲菌屬細(xì)菌區(qū)別。彎曲菌屬細(xì)
菌形態(tài)彎曲或呈娜旋狀， 也較易發(fā)生球形變， 動力強(qiáng)， 但形態(tài)
及大小不一致， 菌體細(xì)長， 姍旋數(shù)1 至1 0 多個。也需與多種
螺旋菌( 海爾受螺桿菌、 多種動物胃內(nèi)的燎旋菌等) 鑒別， 后
者主要表現(xiàn)為菌體粗、 娜旋多且多致密， 有顯著的差別。也
需與弧菌鑒別， 很少情況下胃內(nèi)H p 部分形態(tài)較典型但部分
可表現(xiàn)為弧形， 經(jīng)鑒定也是H p ， 一般弧菌屬細(xì)菌很少在胃內(nèi)
長期定植。根據(jù)H p 的形態(tài)特點(diǎn)， 建立了多重相應(yīng)的形態(tài)學(xué)
檢測方法， 主要有:
1 . 胃粘膜涂片( 印片) C 啊 染色方法: 活檢一塊胃粘膜
組織， 粘腆面在潔凈的玻片上涂片成約0 . 5 e m ， 自然干澡
G r e e n染色油鏡觀察即可， 方便， 操作時間最短需5 一1 0 m i n ,如果涂片面積不太大， 同一塊組織同時作快速尿素醉試驗(yàn)
( R L T r ) 一般不 影響結(jié)果。 該方法是區(qū) 別H p 及海爾曼螺桿菌
( H h ) 的最好的方法之一。
與涂片染色方法類似， 也可以行胃粘膜壓片暗視野觀察
或相差顯徽鏡觀察. 裕用油鏡觀察( x 1 0 0 0 ) 或超高倍鏡檢
( 放大4 0 0 0 倍以上) 。 在液體環(huán)境有時可觀察到H p 的運(yùn)動。
2組織切片特殊染色: 常規(guī)活檢粘腆包埋切片， 行H E
染色W a r d - S t a r r y 銀染色、 改良G i e } 染色或甲苯胺藍(lán)染
色等在油鏡「 觀察， 根據(jù)典型形態(tài)的H p 進(jìn)行診斷。3 種染
作者單位 5 1 1 1 5 1 5 廣州， 第一軍醫(yī)大學(xué)南方醫(yī)院全軍消化內(nèi)科研
究所
色中以銀染色細(xì)菌與組織及粘液的對比最好， 而以H E最
差， G i e m a e 染色界于兩者之間。銀染色可以介人于組織內(nèi)或
腺腔內(nèi)單個的典型細(xì)菌， 而H E 染色僅能觀寮到大量或成簇
的飾�？梢詤^(qū)別尿素酶試驗(yàn)均為陽性的H p 或H h ， 但不能
確定球形變的H p 。此時可通過原位的免疫組化學(xué)方法進(jìn)行
檢測， 而抗體的特異性和敏感性對結(jié)果有很大的影響。
( 二) 依據(jù)飾的 典型生化反應(yīng)的尿素酶依賴性檢測
l i p 可產(chǎn)生目 前已知活性最強(qiáng)的細(xì)菌尿素酶， 分布于胞
質(zhì)和胞膜表面， 也可分泌至細(xì)胞外， 尿素醉可分解胃液中和
所定植部位的尿素產(chǎn)生二氧化碳與氨， 后者可中和胃酸而有
利于細(xì)菌定植致病。根據(jù)這一生化反應(yīng)原理， 人們設(shè)計(jì)了多
種尿眾酶依賴診斷方法。
原理依據(jù): H p 具有的強(qiáng)尿素酶活性， 遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于目 前已知
的產(chǎn)尿素酶的細(xì)菌， 自 然狀態(tài)下H p 定植量也很大， 因此， 通
過尿素酶活性檢測具有敏感和特異的特點(diǎn)。由于服藥( 抗生
家 及 制 酸 藥) 等因 家, H p 形態(tài) 發(fā)生變 形( 球形變) ， 產(chǎn) 尿素醉
減少， 可能使依賴尿素酶的試驗(yàn)敏感性下降， 因此， 對于服用
抗H p 藥物及P P I 制劑者， 通常要求停藥1 個月以上再進(jìn)行
尿素酶依賴性試驗(yàn)， 這樣才有診斷的價值。但有時也見到數(shù)
月后尿素酶活性才恢復(fù)到可檢測水平的情況。其他的生化
反應(yīng)敏感性、 特異性及實(shí)用性不大， 僅有時在細(xì)菌培養(yǎng)茵株
鑒定時用。
鑒別: 經(jīng)過不規(guī)則治療， 對尿素醉依賴性試驗(yàn)有較大的
影響， 易出現(xiàn)假陰性。如降低診斷悶值， 有時與其他產(chǎn)尿素
酶的細(xì)菌( 包括變形桿菌、 翻萄球菌、 醉母菌等) 鑒別較困難。
但一般都不能通過尿素醉試驗(yàn)區(qū) 別活性均較強(qiáng)的飾和H h ,H h 的尿素醉活性可能較H p 弱很多， 但由于H h 在人胃內(nèi)長
期定植時細(xì)菌t常很少， 尿素醉活性很弱( 可疑或弱陽性) ，與服抗生素后的情況不易區(qū)別; 而在急性感染時細(xì)茵t也很
大， 故不能鑒別。
根據(jù)H p 的代謝特點(diǎn)和途徑， 已建立了多重相應(yīng)的生化
檢測方法用于臨床， 主要有:
1 . 快速尿素酶試驗(yàn)( R U C ) : 通常筋要胃鏡檢查取活檢，通過尿素底物被分解， 檢測其代謝產(chǎn)物的量， 包括產(chǎn)氨引起
的p H 明顯變化或其他代謝產(chǎn)物的量。 通過對H p 在胃內(nèi)的
生境及H p 定植部位的相關(guān)性分析， 幽門及胃竇是H p 最先
定植和最多定植的部位， 其次是胃的小彎側(cè)( 主要是胃角) ，然后是責(zé)門、 胃 底和胃 體。 通過對胃 多 點(diǎn)取材的H p 檢查， 發(fā)
現(xiàn)月賓雖然不能完全代表H p 在胃內(nèi)檢側(cè)出， 但也沒有顯著中 華 K ' k. l t 2 0 0 2 生 魚 旦 A % 8 2業(yè){ I 1 N a t l M 絲 止 C h i n e A u m , e t 里 2 0 0 2 V o l 8 2 S l p p l e m a i l
性差異， 只要胃竇沒有太嚴(yán)重且彌漫的病變， 胃竇粘膜活檢
的快速尿家降試驗(yàn)有足夠的代表性。需注意一般在距幽門
約2 一 5。有胃竇尤其小彎側(cè)鉗取， 盡量避免在糜爛和潰瘍
中央及腫物的部位活檢。至于反應(yīng)時間控制方面， 國外傾向
士檢測時間為2 0一 6 0 m i n ， 但不適應(yīng)我國的臨床工作特點(diǎn)
我國胃鏡檢查一般3 一 5 m i n 做一例， 于5 一1 0 n u n 完成報告，故 一 般要求1 一 3 m i n 即能得出陽性結(jié)果， 3 一1 0 m i n 得出弱
陽性結(jié)果， 對陰性病例的確定一般要求超過1 0 m i n ， 不規(guī)則
服藥的病例可適當(dāng)延長。故可根據(jù)出現(xiàn)陽性反應(yīng)的時間及
強(qiáng)度半定量胃粘膜中H p 的細(xì)菌量。同時需要注意， 尿素在
液體狀態(tài)下易緩慢分解( 假陽性) ， 因劑型而異， 不能觀察太
長的時1 1 4 ; 在受潮和半固體狀態(tài)下也易緩慢潮解。而保質(zhì)的
方法多采用中和潮解產(chǎn)生的氨， 不可避免也會降低試劑的敏
感性
為f 了 解H p 在活體胃內(nèi)的分布 ......
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