近10年來我國血液病學(xué)的研究進展 .doc
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參見附件(53kb)。
近10年來我國血液病學(xué)的研究進展
建國50年來我國血液病學(xué)的臨床和實驗研究，取得了迅猛的發(fā)展和顯著的成績。尤其是近10年來，細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、分子免疫學(xué)等先進技術(shù)的應(yīng)用，大大提高了血液病學(xué)臨床和實驗研究的水平�，F(xiàn)就我國血液病學(xué)若干領(lǐng)域的主要研究成果作一介紹。
基礎(chǔ)研究
一、白血病的研究
上海血研所發(fā)現(xiàn)急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)的t(15∶17)的結(jié)果是維甲酸受體α(RARα)基因與PML基因的融合，還發(fā)現(xiàn)PML-RARα融合基因轉(zhuǎn)錄本存在長(L)、短(S)型及變異型三種異構(gòu)體。而且在一小部分APL病人中克隆出了早幼粒細(xì)胞白血病鋅指(PLZF)與RARα的融合基因，對PML-RARα的異構(gòu)體及PLZF-RARα與臨床關(guān)系進行了深入研究。此外，還應(yīng)用差異顯示技術(shù)克隆了一組受維甲酸調(diào)控的新基因，如 RIG-E和RIG-G。新近又發(fā)現(xiàn)三氧化二砷(As2O3)能選擇性誘導(dǎo)APL 細(xì)胞凋亡和部分分化，認(rèn)為As2O3所誘導(dǎo)的凋亡可能與bcl-2表達(dá)下調(diào)及PML-RAR α蛋白降解有關(guān)。我國多個單位開展了白血病多藥耐藥(MDR)的研究， 醫(yī)科院血研所提出mdr-1基因表達(dá)可作為急性粒細(xì)胞白血病(AML)預(yù)后不良的預(yù)測指標(biāo)之一，廣州南方醫(yī)院發(fā)現(xiàn)α-IFN可逆轉(zhuǎn)白血病細(xì)胞的MDR。南開大學(xué)應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法對TCR基因及Ig基因重排方式進行分析，有助白血病基因分型。福建省血研所發(fā)現(xiàn)白血病存在多種正調(diào)控細(xì)胞因子自分泌及負(fù)調(diào)控因子TGFβ1質(zhì)與量的異常，認(rèn)為這是急性白血病細(xì)胞凋亡被阻遏的原因之一。軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院發(fā)現(xiàn)胎肝中低分子天然抑瘤物對白血病細(xì)胞有選擇性抑制作用，可用于體外骨髓凈化。醫(yī)科院血研所報告了環(huán)磷酰胺(CTX)加交替半身照射清除大鼠體內(nèi)殘留白血病的實驗結(jié)果。此外，醫(yī)科院血研所繼建立白血病細(xì)胞系J6-1、J6-2后，又建立了巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞系(HIMeg)， 為白血病基礎(chǔ)研究提供了有用工具。
二、造血干細(xì)胞的研究
軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院在分析細(xì)胞增殖分化性能后提出CD+34、 CD+38細(xì)胞顯示造血祖細(xì)胞特性，而CD+34、CD-38細(xì)胞則接近造血干細(xì)胞,并發(fā)現(xiàn)不同來源的這些細(xì)胞群造血性能的不均一性。多單位對CD+34細(xì)胞的體外擴增體系進行研究,軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院提出SCF+IL-3+IL-6+粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)+促紅細(xì)胞生成素(EPO)組合對臍血CD+34細(xì)胞擴增效率最高。湖北醫(yī)大研究了臍血長期凍存及其冷凍損傷的可恢復(fù)性。軍科院放射所從人胎肝中克隆了TPO基因，并與重組人粒巨噬細(xì)胞集落刺激因子(rhGM-CSF)基因相融合，在原核細(xì)胞中得到表達(dá)，這種融合蛋白rhTPO/GM-CSF具有刺激骨髓紅系、粒系及巨核系造血活性。
三、紅細(xì)胞疾病
陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿(PNH)患者紅細(xì)胞膜自身限制因子(HRF)的研究表明HRF有限制末端補體溶血功能而純PNH Ⅲ型細(xì)胞上缺乏HRF。 華西醫(yī)大開展了缺鐵病人血清可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(STfR)的檢測，有助于了解紅細(xì)胞生成狀況。
四、出血性疾病
上海血研所發(fā)現(xiàn)內(nèi)含子22倒位引起重型血友病甲的發(fā)生率在國人中較高。江蘇血研所在中國首例2N型血管性假血友病中發(fā)現(xiàn)一種新分子缺陷，即vWF蛋白N端因子Ⅷ結(jié)合區(qū)域的22位氨基酸Gly→Glu，該所還發(fā)現(xiàn)血小板無力癥GP-Ⅱb基因的無義突變。此外，北醫(yī)大、中科院生化所、軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院等單位先后克隆了全長TPO基因、凝血因子Ⅷ基因、G-CSF基因等，為我國利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)這些因子打下了基礎(chǔ)。
紅細(xì)胞疾病
一、營養(yǎng)性貧血
缺鐵性貧血(IDA) 仍是我國最常見的營養(yǎng)性貧血，在兒童、婦女及老年人中患病率高達(dá)9.2%～48.3%，血清鐵蛋白及血液鋅原卟啉聯(lián)合診斷鐵缺乏癥較靈敏。近20年來，國內(nèi)對缺鐵狀態(tài) (IDC)及IDA 的非血液學(xué)方面影響的研究較多，北京協(xié)和醫(yī)院發(fā)現(xiàn)IDA 患者外周血中性粒細(xì)胞(PMN) 呼吸爆發(fā)過程中活性氧的產(chǎn)生減少，髓過氧化物酶(MPO)亦較常人為低，經(jīng)過鐵劑治療均可恢復(fù)。上海二軍大發(fā)現(xiàn)IDA患者淋巴細(xì)胞中鐵蛋白與骨髓鐵含量相關(guān)，北醫(yī)一附院及湖南醫(yī)大二附院發(fā)現(xiàn)IDA 患者，血漿維生素E水平、 紅細(xì)胞谷胱甘肽過氧化酶及過氧化氫酶均低于正常人，這些改變可促使IDA紅細(xì)胞壽命縮短。在治療方面，口服鐵劑優(yōu)于肌注鐵劑且以硫酸亞鐵緩釋片最佳；應(yīng)用含鐵強化食品有助于預(yù)防缺鐵。巨幼細(xì)胞性貧血多發(fā)于山西、陜西等北方地區(qū)( 占同期貧血病例的50%～60%)。北京協(xié)和醫(yī)院采用原位末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT) 法和流式細(xì)胞術(shù)以及細(xì)胞核形態(tài)檢查證實葉酸缺乏條件下巨幼貧造血細(xì)胞有過度凋亡現(xiàn)象。
二、再生障礙性貧血(AA)
北京通縣地區(qū)和寧夏自治區(qū)銀川市的流行病學(xué)調(diào)查顯示AA年平均發(fā)病率9.20～9.69/106，標(biāo)化率9.06～9.07/106，其中急性再障(AAA)年發(fā)病率為1.5/106，男∶女＝1.3∶1；慢性AA(CAA)年發(fā)病率8.19/106，20～40歲發(fā)病率較高，占55%。在繼發(fā)性AA中氯霉素仍占重要位置。苯中毒相關(guān)性AA有增加趨勢。在我國，丙型肝炎病毒與病毒性肝炎相關(guān)性AA已從分子生物學(xué)水平得到證實。也驗證了微小病毒B19感染可致急性造血功能停滯。
AA發(fā)病機制的研究發(fā)現(xiàn)：原發(fā)性或繼發(fā)性造血干/ 祖細(xì)胞的量和(或)質(zhì)的異常是AA尤其是重型AA(SAA)的主要發(fā)病環(huán)節(jié)。某些重型AA-Ⅰ型患者血清中存在促進CD+34細(xì)胞過度凋亡的造血抑制物IgG，甲基潑尼松龍對這類患者療效顯著。部分CAA患者因造血微環(huán)境內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞受損，內(nèi)源性G-CSF未能代償性增加。 AA 患者體內(nèi)Ts細(xì)胞數(shù)量增多，異常激活及其自分泌某些造血抑制因子 (如TNF-α、IL-2、sIL-2R等)水平增高，使造血祖細(xì)胞集落形成受抑。然而，祖細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞、免疫三方面異常在AA發(fā)病中的作用不是平行的，因此，AA治療的必需個體化。有研究表明AA患者有顯著升高的HLA-B13、DQ2，而HLA-D3降低，提示前者可能是AA的易感等位基因，而后者為一拮抗基因。
雄激素仍然是目前治療AA，尤其是CAA的主要藥物。 長效丙酸睪丸酮療效好、 副作用少，單用CAA有效率60%。環(huán)孢素A(CSA) 聯(lián)合雄激素治療CAA有效率83%�？沽馨图�(xì)胞球蛋白/抗胸腺細(xì)胞球蛋白(ALG/ATG)已作為SAA的一線藥物，有效率為30 %～70%，CSA對ALG/ATG無效患者仍可獲得效果。ALG/ATG聯(lián)合CSA和(或)造血生長因子(HPGF)、雄激素治療SAA，可使SAA療效明顯提高。大劑量甲基潑尼松龍(HD-Mepr)、大劑量免疫球蛋白(HDIg)、大劑量環(huán)磷酰胺 (HD-CTX)等單獨或聯(lián)合治療SAA，均有成功的報道。 異基因骨髓移植治療SAA也獲成功。
三、溶血性貧血
1.PNH是我國較常見的后天獲得性溶血病。研究表明PNH 血細(xì)胞是由于細(xì)胞表面缺失MIRL(CD59)等補體調(diào)節(jié)蛋白才易遭受補體損傷。PIG-A基因缺陷是導(dǎo)致PNH的關(guān)鍵。北京協(xié)和醫(yī)院利用逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)和HA/SSCP 技術(shù)對中國人PIG-A基因突變進行了觀察 ......
近10年來我國血液病學(xué)的研究進展
建國50年來我國血液病學(xué)的臨床和實驗研究，取得了迅猛的發(fā)展和顯著的成績。尤其是近10年來，細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、分子免疫學(xué)等先進技術(shù)的應(yīng)用，大大提高了血液病學(xué)臨床和實驗研究的水平�，F(xiàn)就我國血液病學(xué)若干領(lǐng)域的主要研究成果作一介紹。
基礎(chǔ)研究
一、白血病的研究
上海血研所發(fā)現(xiàn)急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)的t(15∶17)的結(jié)果是維甲酸受體α(RARα)基因與PML基因的融合，還發(fā)現(xiàn)PML-RARα融合基因轉(zhuǎn)錄本存在長(L)、短(S)型及變異型三種異構(gòu)體。而且在一小部分APL病人中克隆出了早幼粒細(xì)胞白血病鋅指(PLZF)與RARα的融合基因，對PML-RARα的異構(gòu)體及PLZF-RARα與臨床關(guān)系進行了深入研究。此外，還應(yīng)用差異顯示技術(shù)克隆了一組受維甲酸調(diào)控的新基因，如 RIG-E和RIG-G。新近又發(fā)現(xiàn)三氧化二砷(As2O3)能選擇性誘導(dǎo)APL 細(xì)胞凋亡和部分分化，認(rèn)為As2O3所誘導(dǎo)的凋亡可能與bcl-2表達(dá)下調(diào)及PML-RAR α蛋白降解有關(guān)。我國多個單位開展了白血病多藥耐藥(MDR)的研究， 醫(yī)科院血研所提出mdr-1基因表達(dá)可作為急性粒細(xì)胞白血病(AML)預(yù)后不良的預(yù)測指標(biāo)之一，廣州南方醫(yī)院發(fā)現(xiàn)α-IFN可逆轉(zhuǎn)白血病細(xì)胞的MDR。南開大學(xué)應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法對TCR基因及Ig基因重排方式進行分析，有助白血病基因分型。福建省血研所發(fā)現(xiàn)白血病存在多種正調(diào)控細(xì)胞因子自分泌及負(fù)調(diào)控因子TGFβ1質(zhì)與量的異常，認(rèn)為這是急性白血病細(xì)胞凋亡被阻遏的原因之一。軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院發(fā)現(xiàn)胎肝中低分子天然抑瘤物對白血病細(xì)胞有選擇性抑制作用，可用于體外骨髓凈化。醫(yī)科院血研所報告了環(huán)磷酰胺(CTX)加交替半身照射清除大鼠體內(nèi)殘留白血病的實驗結(jié)果。此外，醫(yī)科院血研所繼建立白血病細(xì)胞系J6-1、J6-2后，又建立了巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞系(HIMeg)， 為白血病基礎(chǔ)研究提供了有用工具。
二、造血干細(xì)胞的研究
軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院在分析細(xì)胞增殖分化性能后提出CD+34、 CD+38細(xì)胞顯示造血祖細(xì)胞特性，而CD+34、CD-38細(xì)胞則接近造血干細(xì)胞,并發(fā)現(xiàn)不同來源的這些細(xì)胞群造血性能的不均一性。多單位對CD+34細(xì)胞的體外擴增體系進行研究,軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院提出SCF+IL-3+IL-6+粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)+促紅細(xì)胞生成素(EPO)組合對臍血CD+34細(xì)胞擴增效率最高。湖北醫(yī)大研究了臍血長期凍存及其冷凍損傷的可恢復(fù)性。軍科院放射所從人胎肝中克隆了TPO基因，并與重組人粒巨噬細(xì)胞集落刺激因子(rhGM-CSF)基因相融合，在原核細(xì)胞中得到表達(dá)，這種融合蛋白rhTPO/GM-CSF具有刺激骨髓紅系、粒系及巨核系造血活性。
三、紅細(xì)胞疾病
陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿(PNH)患者紅細(xì)胞膜自身限制因子(HRF)的研究表明HRF有限制末端補體溶血功能而純PNH Ⅲ型細(xì)胞上缺乏HRF。 華西醫(yī)大開展了缺鐵病人血清可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(STfR)的檢測，有助于了解紅細(xì)胞生成狀況。
四、出血性疾病
上海血研所發(fā)現(xiàn)內(nèi)含子22倒位引起重型血友病甲的發(fā)生率在國人中較高。江蘇血研所在中國首例2N型血管性假血友病中發(fā)現(xiàn)一種新分子缺陷，即vWF蛋白N端因子Ⅷ結(jié)合區(qū)域的22位氨基酸Gly→Glu，該所還發(fā)現(xiàn)血小板無力癥GP-Ⅱb基因的無義突變。此外，北醫(yī)大、中科院生化所、軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院等單位先后克隆了全長TPO基因、凝血因子Ⅷ基因、G-CSF基因等，為我國利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)這些因子打下了基礎(chǔ)。
紅細(xì)胞疾病
一、營養(yǎng)性貧血
缺鐵性貧血(IDA) 仍是我國最常見的營養(yǎng)性貧血，在兒童、婦女及老年人中患病率高達(dá)9.2%～48.3%，血清鐵蛋白及血液鋅原卟啉聯(lián)合診斷鐵缺乏癥較靈敏。近20年來，國內(nèi)對缺鐵狀態(tài) (IDC)及IDA 的非血液學(xué)方面影響的研究較多，北京協(xié)和醫(yī)院發(fā)現(xiàn)IDA 患者外周血中性粒細(xì)胞(PMN) 呼吸爆發(fā)過程中活性氧的產(chǎn)生減少，髓過氧化物酶(MPO)亦較常人為低，經(jīng)過鐵劑治療均可恢復(fù)。上海二軍大發(fā)現(xiàn)IDA患者淋巴細(xì)胞中鐵蛋白與骨髓鐵含量相關(guān)，北醫(yī)一附院及湖南醫(yī)大二附院發(fā)現(xiàn)IDA 患者，血漿維生素E水平、 紅細(xì)胞谷胱甘肽過氧化酶及過氧化氫酶均低于正常人，這些改變可促使IDA紅細(xì)胞壽命縮短。在治療方面，口服鐵劑優(yōu)于肌注鐵劑且以硫酸亞鐵緩釋片最佳；應(yīng)用含鐵強化食品有助于預(yù)防缺鐵。巨幼細(xì)胞性貧血多發(fā)于山西、陜西等北方地區(qū)( 占同期貧血病例的50%～60%)。北京協(xié)和醫(yī)院采用原位末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT) 法和流式細(xì)胞術(shù)以及細(xì)胞核形態(tài)檢查證實葉酸缺乏條件下巨幼貧造血細(xì)胞有過度凋亡現(xiàn)象。
二、再生障礙性貧血(AA)
北京通縣地區(qū)和寧夏自治區(qū)銀川市的流行病學(xué)調(diào)查顯示AA年平均發(fā)病率9.20～9.69/106，標(biāo)化率9.06～9.07/106，其中急性再障(AAA)年發(fā)病率為1.5/106，男∶女＝1.3∶1；慢性AA(CAA)年發(fā)病率8.19/106，20～40歲發(fā)病率較高，占55%。在繼發(fā)性AA中氯霉素仍占重要位置。苯中毒相關(guān)性AA有增加趨勢。在我國，丙型肝炎病毒與病毒性肝炎相關(guān)性AA已從分子生物學(xué)水平得到證實。也驗證了微小病毒B19感染可致急性造血功能停滯。
AA發(fā)病機制的研究發(fā)現(xiàn)：原發(fā)性或繼發(fā)性造血干/ 祖細(xì)胞的量和(或)質(zhì)的異常是AA尤其是重型AA(SAA)的主要發(fā)病環(huán)節(jié)。某些重型AA-Ⅰ型患者血清中存在促進CD+34細(xì)胞過度凋亡的造血抑制物IgG，甲基潑尼松龍對這類患者療效顯著。部分CAA患者因造血微環(huán)境內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞受損，內(nèi)源性G-CSF未能代償性增加。 AA 患者體內(nèi)Ts細(xì)胞數(shù)量增多，異常激活及其自分泌某些造血抑制因子 (如TNF-α、IL-2、sIL-2R等)水平增高，使造血祖細(xì)胞集落形成受抑。然而，祖細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞、免疫三方面異常在AA發(fā)病中的作用不是平行的，因此，AA治療的必需個體化。有研究表明AA患者有顯著升高的HLA-B13、DQ2，而HLA-D3降低，提示前者可能是AA的易感等位基因，而后者為一拮抗基因。
雄激素仍然是目前治療AA，尤其是CAA的主要藥物。 長效丙酸睪丸酮療效好、 副作用少，單用CAA有效率60%。環(huán)孢素A(CSA) 聯(lián)合雄激素治療CAA有效率83%�？沽馨图�(xì)胞球蛋白/抗胸腺細(xì)胞球蛋白(ALG/ATG)已作為SAA的一線藥物，有效率為30 %～70%，CSA對ALG/ATG無效患者仍可獲得效果。ALG/ATG聯(lián)合CSA和(或)造血生長因子(HPGF)、雄激素治療SAA，可使SAA療效明顯提高。大劑量甲基潑尼松龍(HD-Mepr)、大劑量免疫球蛋白(HDIg)、大劑量環(huán)磷酰胺 (HD-CTX)等單獨或聯(lián)合治療SAA，均有成功的報道。 異基因骨髓移植治療SAA也獲成功。
三、溶血性貧血
1.PNH是我國較常見的后天獲得性溶血病。研究表明PNH 血細(xì)胞是由于細(xì)胞表面缺失MIRL(CD59)等補體調(diào)節(jié)蛋白才易遭受補體損傷。PIG-A基因缺陷是導(dǎo)致PNH的關(guān)鍵。北京協(xié)和醫(yī)院利用逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)和HA/SSCP 技術(shù)對中國人PIG-A基因突變進行了觀察 ......
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