穴位埋線對(duì)哮喘豚鼠氣道病理形態(tài)學(xué)改變和TGF-Β1的影響.PDF
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埋線與膏藥,埋線療法文獻(xiàn)資料,埋線2008
| 第1頁 |
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第 2 7卷 第 4期
2 0 0 8年 8月
安 徽 中 醫(yī) 學(xué) 院 學(xué) 報(bào)
J OURNAL OF ANHUI TCM COLLEGE
VoI I 2 7 No .4
Au g.2 0 08
穴位埋線對(duì)哮喘豚鼠氣道病理
形態(tài)學(xué)改變和 TGF - ~ 1的影響
付明舉 ， 賴火特 ， 唐純志 ， 楊君軍 ， 賴新生
( 廣東省深圳市第二人 民醫(yī)院， 廣東 深圳 5 1 8 0 3 5 )
摘要： 目的： 觀察穴位埋線對(duì)哮喘豚鼠模型病理形態(tài)學(xué)改變和支氣管肺組織 T GF - ~ 蛋白表達(dá)
的影響。方法： 健康 FMMU豚鼠 3 2只 ， 雌雄各半 ， 隨機(jī)分為 4組 ： 空白組， 模型組， 地塞米松 組和
穴位埋線組。處理結(jié)束后 ， 取病理切片經(jīng)蘇木精一 伊 紅染色后在光鏡 下觀察氣道病理結(jié)構(gòu)的改變，并采用免疫組織化學(xué)法檢 測(cè)支氣管肺組織轉(zhuǎn)化生長因子一 p ( TGF - ~ ) 蛋 白表達(dá)。結(jié)果 ： 模型紐豚鼠
小氣道 中W_ A/ P 。 、 平滑肌面積/ Pi 。 、 支氣管壁厚度 d/ Pi均較 空白組 以及 穴位埋線組和地塞米松
組顯著增加 ( P
及穴位埋線組和地塞米松組( P
表達(dá) ， 抑制哮喘豚鼠的嗜酸粒細(xì)胞性炎癥 ， 減輕炎癥對(duì)氣道壁 的損傷 ， 達(dá)到干預(yù)氣道重構(gòu)的效果。
關(guān)鍵詞： 哮喘； 氣道重構(gòu)； 氣道炎癥； 細(xì)胞 因子； 穴位埋線
中圖分類號(hào)： R5 6 2 . 2 +5 ； R 2 4 4 . 8 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào) ： 1 0 0 0 - -2 2 1 9 ( 2 0 0 8 ) 0 4 - -0 0 2 9 —0 5
支氣管哮喘是由嗜酸性粒細(xì)胞( E OS ) 、 肥大細(xì)
胞( Mc ) 、 T淋巴細(xì)胞等多種炎性細(xì)胞參與的氣道
慢性過敏反應(yīng)炎癥性疾病 ( a l l e r g i c a i r wa y i n f l a m—
ma r i o n ，AAI ) ， 屬于 中醫(yī)“ 哮證” 、 “ 喘證” 范疇。 目
前全球約有 3億患者， 我國約有 2千萬哮喘患者。
近 2 O年來 ， 許多國家和地 區(qū)哮喘的患病率和病死率
均呈逐漸上升趨勢(shì) 。世界各 國都把哮喘作為一個(gè)重
點(diǎn)課題來研究 。
本研究采用支氣管肺組織病理鏡檢以及采用免
疫組織化 學(xué)法檢 測(cè)支氣 管肺 組織 T GF - ~ 蛋 白表
達(dá)， 觀察穴位埋線對(duì)哮喘豚鼠模型氣道病理形態(tài)學(xué)
改變和支氣管肺組織 TGF - ~ 蛋 白表達(dá)的影響。
1 材料
1 . 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 健康 F MMU豚 鼠3 2只，雌雄各半 ， 體質(zhì)量 2 5 0 ～3 0 0 g ， 普通級(jí)動(dòng)物， 南 方醫(yī)
科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供， 編號(hào) 0 0 2 9 3 3 5 。將
F MMU豚 鼠 3 2只隨機(jī)分為空白組 、 模型組、 地塞米
松組和穴位埋線組， 每組 8只， 每組 雌雄各半 ， 并將
雌雄分盒飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)在廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中
心( 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施使用證明編號(hào) ： 0 0 2 3 2 0 0 ) 進(jìn)行。
基金項(xiàng)目： 廣東省中醫(yī)藥管理局項(xiàng) 目( 1 0 5 0 1 4 7 )
作者簡(jiǎn)介： 付明舉( 1 9 6 3 一) ， 女 ， 主任醫(yī)師
通訊作者 ： 賴新生， T e l ：0 2 0 - 3 6 5 8 5 5 7 8 E - ma i l ： l a i 1 0 2 3 @1 6 3 . e o m
1 廣州醫(yī)學(xué)院港灣醫(yī)院
2 廣州中醫(yī)藥大學(xué)
1 . 2 主要儀器和試劑 粵華牌 wH一 2 0 0 0型超聲
霧化噴霧器 ， 由粵華 醫(yī)療器械廠有 限公司生產(chǎn) ； S a r —
t o r i u s電子天平 B S l l 0 S， 德國產(chǎn) ； Le i c a DMRA顯微
鏡； D C 2 0 0掃描儀； L e i c a Qwi n 5 5 0圖像分析系統(tǒng)；
光學(xué)顯微鏡 ( Ol y mp u s B X5 0生物組織顯微鏡 ) ； 徠
卡 2 2 4 5型半 自動(dòng)石蠟切片機(jī) ； 徠卡 E G1 】 4 O型石蠟
包埋機(jī) ； 徠卡 T P 1 0 2 0型生物組織脫水機(jī)( 德 國) ； 徠
卡 RM2 2 5 5型全 自動(dòng)石蠟切片機(jī)( 德國) ； 徠卡 5 O 1 O
型石蠟切片染 色機(jī) ( 德 國) ； 恒溫水浴箱( 型號(hào) 7 O 0 ，中國) ； 攤烘片機(jī)( 型號(hào) Z MN2 0 0 ， 中國) 。
卵白蛋 白 ( O VA， Gr a d e 1 I) ， 由美 國 S i g ma公
司生產(chǎn)； “ 4 - 0 ” 號(hào)醫(yī)用羊腸線 ， 上海浦東金環(huán)醫(yī)療用
品有限公司生產(chǎn) ； 水溶性封片劑 ( 批號(hào) 0 9 5 0 7 2 ， 中國
廣州晶美公司生產(chǎn)) ， TGF - ~ 羊抗兔免疫組化試劑
盒( 批號(hào) B A0 4 1 9 ， 中國武漢波士德) 等 。
2 方法
2 . 1 模型復(fù)制 健康 F MMU豚鼠， 觀： 察 1 周， 無
異常情況出現(xiàn)則開始復(fù)制模型。模型組 、 地塞米松
組 、 穴位埋線組模型復(fù)制方法均相 同： 第 1天， 每只
豚鼠采用卵蛋 白致敏 ， 先腹腔注射 1 0 0 g / L卵蛋白一
9 . 0 g / L氯化鈉注射液( NS ) 1 ml ， 兩周后隔天用 1 O
g / L卵蛋白一 NS超聲噴霧， 每次 1 mi n ， 至哮喘發(fā)作
( 出現(xiàn)煩躁、 嗆咳、 抓鼻 、 打噴嚏 ， 呼吸頻率加快 、 幅度
加大， 腹式呼吸明顯和點(diǎn)頭狀呼吸 ， 嚴(yán)重者呼吸減慢
或節(jié)律不整， 輕度紫紺， 行動(dòng)遲滯或俯伏不動(dòng)， 反應(yīng)
遲鈍等癥狀) 。隔天激發(fā) 1 次 ， 連續(xù) 6 周 。在實(shí)驗(yàn)過
29
維普資訊 http://www.cqvip.com 程 中因哮喘激發(fā)過度等 因素造成 豚鼠死亡 8只， 最
后每組剩下 6只。
2 . 2 治療方法
2 . 2 . 1 穴位埋線具體操作方法 ： 先將羊腸線置于無
菌彎盤中， 倒入 NS沖洗 ， 并剪成 0 . 2 ～0 。 4 c I n小段
若干。將腸線從無菌 8號(hào)注射針針尖穿入， 再將預(yù)
先剪去針尖的毫針從注射針針尾部穿入 ， 腸線穿入
注射針后保持水平， 以免滑落。埋線時(shí)每穴 l 針 ， 定
位取穴 ， 無菌操作 皮膚 ， 持針刺入穴位 ， 到達(dá)預(yù)定深
度 ， 先稍稍后退針， 然后將右手拇指抵住毫針針尾作
注射狀 ， 緩慢將腸線擠入穴內(nèi)， 感覺注射針 內(nèi)有突然
空虛感時(shí)即可出針 ， 并確認(rèn)腸線已埋入皮下或肌層 ，無菌棉簽按壓針孔處止血。
2 . 2 。 2 各組治療方法 ： 空白組 ： 不作任何處理。模
型組 ： 模型復(fù)制后不給予任何治療。地塞米松組 ： 于
每次用 1 0 g / L卵蛋白一 NS超聲噴霧前 3 0 mi n腹腔
注射地塞米松 1 . 5 mg / k g 。穴位埋線組 ： 模 型豚鼠
哮喘發(fā)作后第 2天進(jìn)行穴位埋線治療 ， 每周 1次， 在
用 1 0 g / L卵蛋 白一 NS超聲噴霧前 3 0 mi n ......
2 0 0 8年 8月
安 徽 中 醫(yī) 學(xué) 院 學(xué) 報(bào)
J OURNAL OF ANHUI TCM COLLEGE
VoI I 2 7 No .4
Au g.2 0 08
穴位埋線對(duì)哮喘豚鼠氣道病理
形態(tài)學(xué)改變和 TGF - ~ 1的影響
付明舉 ， 賴火特 ， 唐純志 ， 楊君軍 ， 賴新生
( 廣東省深圳市第二人 民醫(yī)院， 廣東 深圳 5 1 8 0 3 5 )
摘要： 目的： 觀察穴位埋線對(duì)哮喘豚鼠模型病理形態(tài)學(xué)改變和支氣管肺組織 T GF - ~ 蛋白表達(dá)
的影響。方法： 健康 FMMU豚鼠 3 2只 ， 雌雄各半 ， 隨機(jī)分為 4組 ： 空白組， 模型組， 地塞米松 組和
穴位埋線組。處理結(jié)束后 ， 取病理切片經(jīng)蘇木精一 伊 紅染色后在光鏡 下觀察氣道病理結(jié)構(gòu)的改變，并采用免疫組織化學(xué)法檢 測(cè)支氣管肺組織轉(zhuǎn)化生長因子一 p ( TGF - ~ ) 蛋 白表達(dá)。結(jié)果 ： 模型紐豚鼠
小氣道 中W_ A/ P 。 、 平滑肌面積/ Pi 。 、 支氣管壁厚度 d/ Pi均較 空白組 以及 穴位埋線組和地塞米松
組顯著增加 ( P
及穴位埋線組和地塞米松組( P
表達(dá) ， 抑制哮喘豚鼠的嗜酸粒細(xì)胞性炎癥 ， 減輕炎癥對(duì)氣道壁 的損傷 ， 達(dá)到干預(yù)氣道重構(gòu)的效果。
關(guān)鍵詞： 哮喘； 氣道重構(gòu)； 氣道炎癥； 細(xì)胞 因子； 穴位埋線
中圖分類號(hào)： R5 6 2 . 2 +5 ； R 2 4 4 . 8 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào) ： 1 0 0 0 - -2 2 1 9 ( 2 0 0 8 ) 0 4 - -0 0 2 9 —0 5
支氣管哮喘是由嗜酸性粒細(xì)胞( E OS ) 、 肥大細(xì)
胞( Mc ) 、 T淋巴細(xì)胞等多種炎性細(xì)胞參與的氣道
慢性過敏反應(yīng)炎癥性疾病 ( a l l e r g i c a i r wa y i n f l a m—
ma r i o n ，AAI ) ， 屬于 中醫(yī)“ 哮證” 、 “ 喘證” 范疇。 目
前全球約有 3億患者， 我國約有 2千萬哮喘患者。
近 2 O年來 ， 許多國家和地 區(qū)哮喘的患病率和病死率
均呈逐漸上升趨勢(shì) 。世界各 國都把哮喘作為一個(gè)重
點(diǎn)課題來研究 。
本研究采用支氣管肺組織病理鏡檢以及采用免
疫組織化 學(xué)法檢 測(cè)支氣 管肺 組織 T GF - ~ 蛋 白表
達(dá)， 觀察穴位埋線對(duì)哮喘豚鼠模型氣道病理形態(tài)學(xué)
改變和支氣管肺組織 TGF - ~ 蛋 白表達(dá)的影響。
1 材料
1 . 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 健康 F MMU豚 鼠3 2只，雌雄各半 ， 體質(zhì)量 2 5 0 ～3 0 0 g ， 普通級(jí)動(dòng)物， 南 方醫(yī)
科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供， 編號(hào) 0 0 2 9 3 3 5 。將
F MMU豚 鼠 3 2只隨機(jī)分為空白組 、 模型組、 地塞米
松組和穴位埋線組， 每組 8只， 每組 雌雄各半 ， 并將
雌雄分盒飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)在廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中
心( 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施使用證明編號(hào) ： 0 0 2 3 2 0 0 ) 進(jìn)行。
基金項(xiàng)目： 廣東省中醫(yī)藥管理局項(xiàng) 目( 1 0 5 0 1 4 7 )
作者簡(jiǎn)介： 付明舉( 1 9 6 3 一) ， 女 ， 主任醫(yī)師
通訊作者 ： 賴新生， T e l ：0 2 0 - 3 6 5 8 5 5 7 8 E - ma i l ： l a i 1 0 2 3 @1 6 3 . e o m
1 廣州醫(yī)學(xué)院港灣醫(yī)院
2 廣州中醫(yī)藥大學(xué)
1 . 2 主要儀器和試劑 粵華牌 wH一 2 0 0 0型超聲
霧化噴霧器 ， 由粵華 醫(yī)療器械廠有 限公司生產(chǎn) ； S a r —
t o r i u s電子天平 B S l l 0 S， 德國產(chǎn) ； Le i c a DMRA顯微
鏡； D C 2 0 0掃描儀； L e i c a Qwi n 5 5 0圖像分析系統(tǒng)；
光學(xué)顯微鏡 ( Ol y mp u s B X5 0生物組織顯微鏡 ) ； 徠
卡 2 2 4 5型半 自動(dòng)石蠟切片機(jī) ； 徠卡 E G1 】 4 O型石蠟
包埋機(jī) ； 徠卡 T P 1 0 2 0型生物組織脫水機(jī)( 德 國) ； 徠
卡 RM2 2 5 5型全 自動(dòng)石蠟切片機(jī)( 德國) ； 徠卡 5 O 1 O
型石蠟切片染 色機(jī) ( 德 國) ； 恒溫水浴箱( 型號(hào) 7 O 0 ，中國) ； 攤烘片機(jī)( 型號(hào) Z MN2 0 0 ， 中國) 。
卵白蛋 白 ( O VA， Gr a d e 1 I) ， 由美 國 S i g ma公
司生產(chǎn)； “ 4 - 0 ” 號(hào)醫(yī)用羊腸線 ， 上海浦東金環(huán)醫(yī)療用
品有限公司生產(chǎn) ； 水溶性封片劑 ( 批號(hào) 0 9 5 0 7 2 ， 中國
廣州晶美公司生產(chǎn)) ， TGF - ~ 羊抗兔免疫組化試劑
盒( 批號(hào) B A0 4 1 9 ， 中國武漢波士德) 等 。
2 方法
2 . 1 模型復(fù)制 健康 F MMU豚鼠， 觀： 察 1 周， 無
異常情況出現(xiàn)則開始復(fù)制模型。模型組 、 地塞米松
組 、 穴位埋線組模型復(fù)制方法均相 同： 第 1天， 每只
豚鼠采用卵蛋 白致敏 ， 先腹腔注射 1 0 0 g / L卵蛋白一
9 . 0 g / L氯化鈉注射液( NS ) 1 ml ， 兩周后隔天用 1 O
g / L卵蛋白一 NS超聲噴霧， 每次 1 mi n ， 至哮喘發(fā)作
( 出現(xiàn)煩躁、 嗆咳、 抓鼻 、 打噴嚏 ， 呼吸頻率加快 、 幅度
加大， 腹式呼吸明顯和點(diǎn)頭狀呼吸 ， 嚴(yán)重者呼吸減慢
或節(jié)律不整， 輕度紫紺， 行動(dòng)遲滯或俯伏不動(dòng)， 反應(yīng)
遲鈍等癥狀) 。隔天激發(fā) 1 次 ， 連續(xù) 6 周 。在實(shí)驗(yàn)過
29
維普資訊 http://www.cqvip.com 程 中因哮喘激發(fā)過度等 因素造成 豚鼠死亡 8只， 最
后每組剩下 6只。
2 . 2 治療方法
2 . 2 . 1 穴位埋線具體操作方法 ： 先將羊腸線置于無
菌彎盤中， 倒入 NS沖洗 ， 并剪成 0 . 2 ～0 。 4 c I n小段
若干。將腸線從無菌 8號(hào)注射針針尖穿入， 再將預(yù)
先剪去針尖的毫針從注射針針尾部穿入 ， 腸線穿入
注射針后保持水平， 以免滑落。埋線時(shí)每穴 l 針 ， 定
位取穴 ， 無菌操作 皮膚 ， 持針刺入穴位 ， 到達(dá)預(yù)定深
度 ， 先稍稍后退針， 然后將右手拇指抵住毫針針尾作
注射狀 ， 緩慢將腸線擠入穴內(nèi)， 感覺注射針 內(nèi)有突然
空虛感時(shí)即可出針 ， 并確認(rèn)腸線已埋入皮下或肌層 ，無菌棉簽按壓針孔處止血。
2 . 2 。 2 各組治療方法 ： 空白組 ： 不作任何處理。模
型組 ： 模型復(fù)制后不給予任何治療。地塞米松組 ： 于
每次用 1 0 g / L卵蛋白一 NS超聲噴霧前 3 0 mi n腹腔
注射地塞米松 1 . 5 mg / k g 。穴位埋線組 ： 模 型豚鼠
哮喘發(fā)作后第 2天進(jìn)行穴位埋線治療 ， 每周 1次， 在
用 1 0 g / L卵蛋 白一 NS超聲噴霧前 3 0 mi n ......
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