甘油三酯又稱中性脂肪，由于其甘油骨架上分別結(jié)合了3分子脂肪酸、2分子脂肪酸或1分子脂肪酸，相應(yīng)稱為甘油三酯(TG)、甘油二酯(DG)和甘油一酯(MG)。血清中90%～95%是TG，TG中結(jié)合的脂肪酸分別為油酸(44%)、軟脂酸(26%)、亞油酸(16%)和棕櫚油酸(7%)。
血清TG測定方法一般分為物理化學法、化學法及酶法三大類。
血清中TG的化學組成并不單一，準確求其分子較為困難。因標準不同，測定結(jié)果存在差異�；瘜W法多采用三棕櫚精(軟脂精)(分子量807.3)、三油精(分子量895.4)為標準，按摩爾濃度計算。酶法測定以三油精為標準物進行換算。
1.化學法
化學測定法包括：①TG的抽提分離；②皂化；③甘油糖的氧化；④氧化生成甲掌顯色定量等四個階段。操作較為繁雜，影響測定因素太多，本法準確性差，一般很少用。
2.酶法測定
酶法測定包括：①TG的抽提與皂化；②加水分解生成甘油糖定量等二個階段。目前常規(guī)檢測應(yīng)用的方法有甘油激酶(glycerol kinase,GK)法和甘油氧化酶(glycerol Oxidase,GOD)法。操作簡便，快速準確，并能在自動化生化分析儀上進行批量測定。
一、乙酰丙酮法
1.原理
血清中加入異丙醇抽提取甘油三酯，經(jīng)KOH皂化使甘油三酯水解生成甘油及脂肪酸，甘油在過碘酸作用下氧化成甲醛，在氯離子存在下甲醛與乙酰丙酮縮合生成黃色的3，5二乙酰，1，4二氫甲基吡啶，其顏色的深淺與甘油三酯的含量成正比，420nm測定定量。該法可用于基本功訓練及組織細胞TG的提取測定。
2.試劑組成
| 代號 | 種類 | 濃度 | 組成 | 貯2-8℃ | 有效時間 |
| R1 | 抽提液 | (CH3)CHOH(A.R)重蒸餾 | |||
| R2 | 吸附劑 | 氧化鋁，水洗除去微細顆粒， 110℃烤干3h以上 | 閉封 | 一周 | |
| R3 | 皂化劑 | 5% | KOH 5g+H2O→100ml | ||
| R4 | 醋酸溶液 | 2mol/L | CH3COOH 11.5ml+H2O→100ml | ||
| R5 | 過碘酸鈉 | 0.05mol/L | NaIO4 1.07g+H2O→100ml | ||
| R6 | 氧化劑 | R4 1體積+R51體積 | 一周 | ||
| R7 | 醋酸銨液 | CH3COONH2 15.4g+H2O→100ml | |||
| R8 | 顯色劑 | CH3COCH2COCH30.75ml+R-1 | |||
| 40ml+R-7 100ml+R-4 80ml | |||||
| R9 | 參考液 | 2mg/dl | 三油酸甘油酯 2mg+R-1→100ml(TG100mg/dl) |
3.操作
按圖15-3操作。
圖15-3 血清甘油三酯(乙酯丙酮法)測定操作圖
4.計算
血清TG濃度=ESA/EST×1.13(mmol/L)
二、酶法(GK-GPO-POD比色法)
血清中甘油三酯經(jīng)脂肪酶水解為甘油和脂肪酸，甘油在甘油激酶(GK)及ATP存在下，生成3-磷酸甘油，爾后，在磷酸甘油氧化酶(GPO)作用氧化成磷酸二羥丙酮并生成H2O2，H2O2與底物4-氨基安替比林和ESPAS在過氧化物酶(POD)作用下，生成紅色亞醌化合物(quinoneimine)，比色(500nm)，其顏色深淺與甘油三酯含量成正比。
(一)手工測定法
1.試劑組成
| 代號 | 種類 | 濃度 | 貯存2～8℃ |
| R1 | 磷酸甘油氧化酶 | ≥3.0KU/L | 冷藏 |
| (A液) | 抗壞血酸氧化酶 | ≥1.0KU/L | |
| 甘油激酶 | ≥0.7KU/L | ||
| 4-氨基安替比林 | 80mg/L | ||
| R2 | 脂蛋白脂酶 | ≥2.0KU/L | 冷藏 |
| 過氧化物酶 | ≥10KU/L | ||
| ESPAS | 300mg/L | ||
| R3(參考液) | 甘油酸三脂 | 200mg/dl(2.26mmol/L) | 冷藏 |
*：一般采用商品試劑盒
圖15-4 血清甘油三酯測定法(酶法)操作圖
2.操作
按圖15-4操作。
3.計算
血清TG濃度=ESA/EST×2.26(mmol/L)
(二)生化分析儀檢測
全自動生化分析儀測定操作(以CL-7200型為例)。
1.試劑
A液：GK，GPO，4-AA-P、抗壞血酸氧化酶等。
B液：POD，Lipase,ESPAS等。
標準液：甘油三油酸酯 200mg/dl(2.26mmol/L)。
2.上機參數(shù)
| 名稱 | 參數(shù) |
| 方法 | 終點法 |
| 波長 | 雙波長(540nm 700nm) |
| 試劑A反應(yīng)時間 | 2～3min |
| 試劑B反應(yīng)時間 | 5～6min |
| 反應(yīng)溫度 | 37℃ |
| 樣本用量 | 4μl |
| 試劑A用量 | 200μl |
| 試劑B用量 | 100μl |
| 單位 | mmol/L |
3.操作過程
4.計算
以△A=A2-A1并根據(jù)同樣之標準或質(zhì)控物計算，自動打印結(jié)果。
5.注意事項
①試劑與樣本量可根據(jù)分析儀要求按比例改變。
②試劑在有效期內(nèi)2～8℃避光保存。
③樣本中甘油三酯含量超過11mmol/L需用生理鹽水稀釋后再測。
, 百拇醫(yī)藥百拇醫(yī)藥網(wǎng) http://www.www.srpcoatings.com/html/Dir/2003/04/03/9003.htm