磷脂(PL)并非單一的化合物，其分子內(nèi)含有磷酸基的多種脂質(zhì)，磷脂是這一類物質(zhì)的總稱。血中PL包括：①卵磷脂占60%和溶血卵磷脂占2%～10%；②磷脂酰乙醇胺等，占2%；③鞘磷脂，占20%。
血清PL定量方法包括測(cè)定無(wú)機(jī)磷的化學(xué)法和酶法兩大類。
1.化學(xué)測(cè)定法過(guò)程包括：①抽提分離；②灰化；③顯色、比色的三個(gè)階段。
2.酶測(cè)定法
可分別利用磷脂酶A、B、C、D等4種酶作用，加水分解，測(cè)定其產(chǎn)物，對(duì)PL進(jìn)行定量。一般多采用磷脂酶D(PL-D)進(jìn)行定量。PL-D可作用于含有卵磷脂、溶血卵磷脂和鞘磷脂以及含膽堿的磷脂，這三種磷脂約占血清總磷脂的95%。本法快速準(zhǔn)確，便于自動(dòng)生化分析儀器進(jìn)行批量檢測(cè)。
一、化學(xué)法(消化法)
1.原理
以有機(jī)混合試劑(無(wú)水乙醇、乙醇)抽提血清中磷脂，再用濃硫酸和過(guò)氯酸消化抽提液中的脂類和其他有機(jī)化合物，用硝酸鹽與磷反應(yīng)生成有色化合物，比色定量。本法可用組織細(xì)胞磷脂的抽提定量。
2.試劑組成
| 代號(hào) | 種類 | 濃度 | 組成 | 貯2～8℃ | 有效時(shí)間 |
| R-1 | 抽提液 | 無(wú)水乙醇：乙醇=3:1 | |||
| R-2 | 消化液 | 用1L密器，加水約500ml，置冷水中緩緩加濃硫酸280ml到水中，冷卻后加過(guò)氯酸(70%，AR)65ml，混勻，加蒸餾水至1000ml | |||
| R-3 | 顯色劑 | 鉬酸銨(A.R)2.5g+無(wú)水醋酸鈉8.2g，加蒸餾水溶解并稀釋至1L，監(jiān)用時(shí)取此液體9份加新配的VitC液(10%)1份，混合即可 | |||
| R-4 | 參考液(貯存液)1mg/L | 稱干燥KH2PO(A.R)0.4393g,溶于蒸餾水中，轉(zhuǎn)移至100ml的容量中，用蒸餾水加至刻度。 | 冷藏 | ||
| R-5 | 參考應(yīng)用液 | 0.04mg/ml | 取貯存液2ml加至50ml容量中，加水至刻度 | 冷藏 |
3.操作
按圖15-5操作。
4.計(jì)算
血清脂性磷濃度=ESA/EST×10(mg/dl)
血清磷脂(以卵磷脂計(jì))=ESA/EST×10×0.3229(mmol/L)
圖15-5 血清磷脂測(cè)定(消化法)操作圖*采用帶塞玻璃試管
二、酶法
1.原理
磷脂酶D因特異性不高，能水解血清中卵磷脂，溶血卵磷脂和神經(jīng)磷脂(三者占血清總磷脂的95%)，釋放出膽堿，膽堿在膽堿氧化酶作用下生成甜菜堿和H2O2，在過(guò)氧化物酶作用下，H2O2，4-氨基安替比林、酚發(fā)生反應(yīng)生成紅色醌亞胺化合物，其顏色深淺與這三種磷脂的含量成正比，在500nm波長(zhǎng)下比色計(jì)算結(jié)果為：
2.試劑
(1)酶應(yīng)用液(參考配方)：每100ml Tris-His緩沖液(50mmol/L，pH7.8)中含：
| 磷脂酶D | 45U |
| 膽堿氧化酶 | 100U |
| 過(guò)氧化物酶 | 220U |
| 4-氨基安替比林 | 12mg |
| 酚 | 20mg |
| CaCl2·2H2O | 8mg |
| TritonX-100 | 0.2g |
(2)標(biāo)準(zhǔn)液：純卵磷脂，臨用前配制，5mg/2.5ml蒸餾水(含TritonX-1000.5%)
3.操作
(1)標(biāo)本采集：空腹12h抽靜脈血，不抗凝，分離血清或抗凝血分離血漿。
(2)在3.0ml酶應(yīng)用液中加入血清(漿)20μl，標(biāo)準(zhǔn)管加標(biāo)準(zhǔn)液20μl，空白管加水20μl，放置37℃水浴10min后，波長(zhǎng)500nm，比色，空白管液調(diào)零。
4.計(jì)算
血清磷脂(mg/dl)=TA/SA×200
血清磷脂(mmol/L)=血清磷脂(mg/dl)×0.01292
, 百拇醫(yī)藥百拇醫(yī)藥網(wǎng) http://www.www.srpcoatings.com/html/Dir/2003/04/03/9004.htm