病毒檢測謹防誤診
自世界衛(wèi)生組織(WHO)宣布，SARS病原體為一種新型冠狀病毒后，參與全球合作的一些實驗室，開始研制各類可用于SARS病毒感染診斷的方法，其中主要有免疫測定法、分子診斷法和病毒培養(yǎng)法等，但目前尚不成熟。因此，如何正確應用并正確解釋所獲得的結(jié)果，對于臨床正確診斷SARS，避免誤用誤診極為重要。
免疫測定方法主要有免疫熒光試驗(IFA)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)，均被用于患者血清中特異抗體的檢測。要測定血清中的特異抗體，首先要有特異抗原，SARS病毒的基因序列盡管已知，但對其抗原結(jié)構(gòu)仍在緊張的研究之中，目前尚無法采用基因工程表達的特異抗原來建立特異抗體測定的免疫學方法，但由于SARS病毒的培養(yǎng)已不成問題，故在這兩個方法中，均應該使用培養(yǎng)的病毒顆粒(用于建立IFA)或其裂解后的成分作為抗原。
免疫熒光試驗測定的特異性強，但測定的靈敏度較低，可測到出現(xiàn)癥狀十多天的SARS病人血清中的特異抗體IgG。它需要使用固定的S ARS病毒顆粒、熒光顯微鏡和有經(jīng)驗的實驗技術(shù)人員。抗體陽性表示病人感染了SARS病毒。
, 百拇醫(yī)藥
用ELISA方法從出現(xiàn)癥狀和體征十多天起，檢測SARS病人血清中的抗體是可靠的。目前也有報道可以測定特異的抗體IgM。IgM抗體的出現(xiàn)要早于IgG，可使感染檢測提前數(shù)天。但要注意，由于目前ELISA 方法使用的抗原，是裂解的病毒顆粒成分，而該病毒是否與已知冠狀病毒科病毒有共同成分或同源性有多大，還是未知數(shù)，故很有可能會出現(xiàn)假陽性，并且很可能是這種方法的致命弱點。
分子診斷方法由于SARS病毒的核酸序列已經(jīng)明確，WHO也公布了非常關(guān)鍵的相應的病毒核酸擴增檢測的七對引物，這些引物已被世界上很多國家采用，因此國內(nèi)外迅速建立了SARS病毒的反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測方法，可以檢測患者或疑似患者不同標本(血液、糞便、呼吸道分泌物或身體組織)中的SARS病毒。通常病毒感染后，在感染者體液中最先會有病毒顆粒的存在，血循環(huán)中特異抗體的出現(xiàn)會晚很多天，故RT-PCR方法可用于病毒感染的早期診斷及疑似感染者的確診。現(xiàn)在已經(jīng)有了可以直接使用的含有引物、陰性質(zhì)控和陽性質(zhì)控的檢測試劑盒。國內(nèi)也有了SARS病毒檢測的熒光RT-PCR試劑盒�，F(xiàn)有的RT-PCR檢測非常特，但靈敏度仍不是太高。
, 百拇醫(yī)藥
再則，目前已有的RT-PCR方法所擴增的核酸片段，不一定為所有SARS病毒所共有，這意味著RT-PCR診斷實驗的陰性結(jié)果并不能說明沒有SARS病毒，也不能排除病人攜帶SARS病毒的可能性。
進行上述有關(guān)SARS病毒感染的實驗室檢測，必須有質(zhì)量控制措施，與其他實驗室的結(jié)果進行比較。對于陽性結(jié)果必須按照一個嚴格的程序進行確認，尤其是在低感染流行地區(qū)，因為其陽性預示值較低。RT -PCR檢測在每次均要包括適當?shù)年栃院完幮再|(zhì)控物，并同時對每一份患者標本做一份平行樣本檢測。如果RT-PCR檢測為陽性，則應該進行下述實驗確認：(1)對同一份原始標本進行重復實驗，(2)擴增病毒的第二個基因組區(qū)域，或在另一個實驗室對同一份標本進行檢測。
病毒培養(yǎng)在普通的臨床實驗室難以進行，但它是惟一能證實活病毒存在的方法。陽性檢測結(jié)果：為SARS病人或最近感染過SARS病毒。但要注意假陽性問題。
陰性檢測結(jié)果：一個陰性的SARS病毒檢測結(jié)果并不意味著病人沒有感染SARS。陰性結(jié)果的解釋是：(1)病人并未感染SARS病毒，該疾病由其他傳染源(病毒、細菌、真菌)或非感染源引起。(2)假陰性。因為方法的檢測靈敏度不夠，或是病毒基因型的差異，或PCR 引物的局限性。(3)標本沒有在病毒或核酸物質(zhì)可能存在的時間內(nèi)采集(特指PCR和細胞培養(yǎng))。(4)標本在疾病的早期采集并且在抗體產(chǎn)生之前(特指ELISA和免疫熒光測定)。
WHO建議用于檢測的SARS病人標本的收集和儲存應是連續(xù)的，這樣可以使診斷性檢測變得直接而有效。這對于沒有報道SARS的國家或地區(qū)首位病人的識別尤其重要。
關(guān)注非典專題, 百拇醫(yī)藥
免疫測定方法主要有免疫熒光試驗(IFA)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)，均被用于患者血清中特異抗體的檢測。要測定血清中的特異抗體，首先要有特異抗原，SARS病毒的基因序列盡管已知，但對其抗原結(jié)構(gòu)仍在緊張的研究之中，目前尚無法采用基因工程表達的特異抗原來建立特異抗體測定的免疫學方法，但由于SARS病毒的培養(yǎng)已不成問題，故在這兩個方法中，均應該使用培養(yǎng)的病毒顆粒(用于建立IFA)或其裂解后的成分作為抗原。
免疫熒光試驗測定的特異性強，但測定的靈敏度較低，可測到出現(xiàn)癥狀十多天的SARS病人血清中的特異抗體IgG。它需要使用固定的S ARS病毒顆粒、熒光顯微鏡和有經(jīng)驗的實驗技術(shù)人員。抗體陽性表示病人感染了SARS病毒。
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用ELISA方法從出現(xiàn)癥狀和體征十多天起，檢測SARS病人血清中的抗體是可靠的。目前也有報道可以測定特異的抗體IgM。IgM抗體的出現(xiàn)要早于IgG，可使感染檢測提前數(shù)天。但要注意，由于目前ELISA 方法使用的抗原，是裂解的病毒顆粒成分，而該病毒是否與已知冠狀病毒科病毒有共同成分或同源性有多大，還是未知數(shù)，故很有可能會出現(xiàn)假陽性，并且很可能是這種方法的致命弱點。
分子診斷方法由于SARS病毒的核酸序列已經(jīng)明確，WHO也公布了非常關(guān)鍵的相應的病毒核酸擴增檢測的七對引物，這些引物已被世界上很多國家采用，因此國內(nèi)外迅速建立了SARS病毒的反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測方法，可以檢測患者或疑似患者不同標本(血液、糞便、呼吸道分泌物或身體組織)中的SARS病毒。通常病毒感染后，在感染者體液中最先會有病毒顆粒的存在，血循環(huán)中特異抗體的出現(xiàn)會晚很多天，故RT-PCR方法可用于病毒感染的早期診斷及疑似感染者的確診。現(xiàn)在已經(jīng)有了可以直接使用的含有引物、陰性質(zhì)控和陽性質(zhì)控的檢測試劑盒。國內(nèi)也有了SARS病毒檢測的熒光RT-PCR試劑盒�，F(xiàn)有的RT-PCR檢測非常特，但靈敏度仍不是太高。
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再則，目前已有的RT-PCR方法所擴增的核酸片段，不一定為所有SARS病毒所共有，這意味著RT-PCR診斷實驗的陰性結(jié)果并不能說明沒有SARS病毒，也不能排除病人攜帶SARS病毒的可能性。
進行上述有關(guān)SARS病毒感染的實驗室檢測，必須有質(zhì)量控制措施，與其他實驗室的結(jié)果進行比較。對于陽性結(jié)果必須按照一個嚴格的程序進行確認，尤其是在低感染流行地區(qū)，因為其陽性預示值較低。RT -PCR檢測在每次均要包括適當?shù)年栃院完幮再|(zhì)控物，并同時對每一份患者標本做一份平行樣本檢測。如果RT-PCR檢測為陽性，則應該進行下述實驗確認：(1)對同一份原始標本進行重復實驗，(2)擴增病毒的第二個基因組區(qū)域，或在另一個實驗室對同一份標本進行檢測。
病毒培養(yǎng)在普通的臨床實驗室難以進行，但它是惟一能證實活病毒存在的方法。陽性檢測結(jié)果：為SARS病人或最近感染過SARS病毒。但要注意假陽性問題。
陰性檢測結(jié)果：一個陰性的SARS病毒檢測結(jié)果并不意味著病人沒有感染SARS。陰性結(jié)果的解釋是：(1)病人并未感染SARS病毒，該疾病由其他傳染源(病毒、細菌、真菌)或非感染源引起。(2)假陰性。因為方法的檢測靈敏度不夠，或是病毒基因型的差異，或PCR 引物的局限性。(3)標本沒有在病毒或核酸物質(zhì)可能存在的時間內(nèi)采集(特指PCR和細胞培養(yǎng))。(4)標本在疾病的早期采集并且在抗體產(chǎn)生之前(特指ELISA和免疫熒光測定)。
WHO建議用于檢測的SARS病人標本的收集和儲存應是連續(xù)的，這樣可以使診斷性檢測變得直接而有效。這對于沒有報道SARS的國家或地區(qū)首位病人的識別尤其重要。
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