腫瘤學(xué)的進(jìn)步：外周血惡性腫瘤細(xì)胞檢測(cè)
人們?cè)谔接憪盒阅[瘤(簡(jiǎn)稱(chēng)腫瘤)綜合治療的今天，越來(lái)越注意到，很多病例雖然根據(jù)目前惡性腫瘤國(guó)際臨床病期分類(lèi)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)判斷預(yù)后良好，但治療后仍發(fā)生復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。這就提示人們，必須尋找更可靠的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)來(lái)預(yù)測(cè)腫瘤的預(yù)后及指導(dǎo)治療。大量證據(jù)表明，原發(fā)腫瘤在早期階段就有腫瘤細(xì)胞脫落到循環(huán)系統(tǒng)，這些脫落的腫瘤細(xì)胞是目前常用的臨床診斷手法所檢測(cè)不到的，它們可導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。外周血循環(huán)中出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞是腫瘤擴(kuò)散的表現(xiàn)之一，對(duì)這些腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)可以幫助人們進(jìn)一步認(rèn)識(shí)腫瘤轉(zhuǎn)移的特征、提高對(duì)腫瘤分期和預(yù)后的判斷，以更好地指導(dǎo)治療及監(jiān)測(cè)治療效果。因此，對(duì)外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)正逐漸被人們所重視。
血循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)方法
免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)：這是一種檢測(cè)外周血中潛伏腫瘤細(xì)胞最普遍、最成熟、最標(biāo)準(zhǔn)的方法。其檢測(cè)的基本原理是抗原抗體結(jié)合反應(yīng)。利用單克隆抗體與特異的腫瘤標(biāo)志物結(jié)合，并通過(guò)酶與底物反應(yīng)顯色來(lái)判斷腫瘤細(xì)胞的存在。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)的主要優(yōu)點(diǎn)是可進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析，而缺點(diǎn)是檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的敏感性范圍小。其主要檢測(cè)的腫瘤標(biāo)志物分為3類(lèi)。一是，上皮細(xì)胞角蛋白，這種細(xì)胞角蛋白是特異性較高的指標(biāo)，已被臨床廣泛應(yīng)用，但有假陽(yáng)性；二是，上皮細(xì)胞膜特異性抗原，如粘蛋白類(lèi)，包括早期膜抗原等；三是，腫瘤相關(guān)糖蛋白。
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轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)：這是一個(gè)敏感的檢測(cè)方法。其檢測(cè)的基本原理是擴(kuò)增出腫瘤細(xì)胞標(biāo)志性基因或靶信使核糖核酸來(lái)證實(shí)腫瘤細(xì)胞的存在，是目前檢測(cè)外周血腫瘤細(xì)胞微轉(zhuǎn)移最有效的方法，較免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)應(yīng)用更廣泛。其主要檢測(cè)的腫瘤標(biāo)志物也分為3類(lèi)。一是，某些基因改變，如基因點(diǎn)的突變、缺失、異構(gòu)、擴(kuò)增；二是，組織特異性標(biāo)志物信使核糖核酸，如雌激素受體等；三是，腫瘤特異性標(biāo)志物信使核糖核酸，如人癌胚抗原等。
定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)、熒光定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)和真時(shí)自動(dòng)免疫酶聯(lián)反應(yīng)儀檢測(cè)：為提高上述轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)的特異性和敏感性，新的方法不斷產(chǎn)生，在其轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)的基礎(chǔ)上又增加了定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)、熒光定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)和真時(shí)自動(dòng)免疫酶聯(lián)反應(yīng)儀檢測(cè)。
除以上方法之外，也有學(xué)者加用免疫磁珠分選富集腫瘤細(xì)胞、激光掃描細(xì)胞計(jì)數(shù)器等來(lái)提高免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)和轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)的敏感性及特異性。
特異性檢測(cè)標(biāo)記物
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膀胱上皮特異性蛋白：是膀胱上皮特有的跨膜蛋白，只存在于膀胱上皮，是很好的移行細(xì)胞癌特異性腫瘤標(biāo)志物候選者之一。國(guó)外研究者為發(fā)現(xiàn)膀胱癌患者外周血的腫瘤細(xì)胞，研究了12例移行細(xì)胞癌患者外周血膀胱上皮特異性蛋白Ⅱ的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在所有移行細(xì)胞癌患者的外周血中發(fā)現(xiàn)了該標(biāo)志物的表達(dá)，而在非移行細(xì)胞癌患者及健康志愿者的外周血中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)其表達(dá)。他們由此得出結(jié)論，膀胱上皮特異性蛋白Ⅱ在外周血中的表達(dá)，可能為診斷和處理移行細(xì)胞癌患者提供了有益的信息。
細(xì)胞角蛋白20：角蛋白屬中間絲細(xì)胞骨架蛋白，是存在于上皮細(xì)胞內(nèi)的一組蛋白質(zhì)。根據(jù)其不同的分子量和等電點(diǎn)，可分為20個(gè)亞型。這些亞型在上皮細(xì)胞中的分布有一定的特異性。角蛋白分為表皮角蛋白和細(xì)胞角蛋白，后者主要存在于內(nèi)臟器官不角化的上皮細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞角蛋白20為其中的一種。國(guó)外研究者采用轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)測(cè)定 細(xì)胞角蛋白20來(lái)發(fā)現(xiàn)泌尿系統(tǒng)腫瘤患者外周血中腫瘤細(xì)胞。應(yīng)用這個(gè)方法，在1 000萬(wàn)個(gè)外周血單核細(xì)胞的標(biāo)本中，只要有10個(gè)膀胱癌細(xì)胞就能被發(fā)現(xiàn)。研究還證實(shí)，細(xì)胞角蛋白20在外周血單核細(xì)胞的標(biāo)本中被發(fā)現(xiàn)與腫瘤分期有關(guān)，在局部浸潤(rùn)的腫瘤患者中陽(yáng)性率為19%，在轉(zhuǎn)移的腫瘤患者中陽(yáng)性率為83%，而在健康志愿者的外周血中未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞角蛋白20。由此可知，細(xì)胞角蛋白20的轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)測(cè)定方法，對(duì)于在外周血中發(fā)現(xiàn)泌尿系統(tǒng)腫瘤是有診斷價(jià)值的。
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表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體信使核糖核酸：表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體是一種糖蛋白，在表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的結(jié)合作用下，被激活而具有酪氨酸激酶的活性，產(chǎn)生自身磷酸化，啟動(dòng)細(xì)胞核內(nèi)的有關(guān)基因，從而促進(jìn)上皮細(xì)胞的分裂增殖。研究者在多種類(lèi)型的腫瘤組織中進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與相應(yīng)的正常組織比較，腫瘤組織有較高水平的表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體表達(dá)，并認(rèn)為它的高表達(dá)是腫瘤預(yù)后不良的指征。國(guó)外學(xué)者對(duì)照研究了表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體信使核糖核酸在膀胱癌患者外周血中的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在對(duì)照組，所有膀胱炎患者表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體信使核糖核酸的表達(dá)均為陰性；而在觀察組，74%的膀胱癌患者中，其表達(dá)為陽(yáng)性。由此顯示，在外周血中表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體信使核糖核酸可能是膀胱癌的有用標(biāo)志物。此外，表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體在乳腺癌、肺癌、大腸癌患者中的表達(dá)也可達(dá)50%～70%。由此，國(guó)外研究者推測(cè)，外周血表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體信使核糖核酸的檢測(cè)，是一個(gè)測(cè)定腫瘤患者血循環(huán)中腫瘤細(xì)胞特異性和敏感性相當(dāng)高的方法。
癌胚抗原信使核糖核酸：癌胚抗原是一組存在于胚胎胃腸粘膜上皮與一些惡性組織細(xì)胞表面的酸性糖蛋白；是一種由胚胎表達(dá)，而正常成人不表達(dá)，但伴隨腫瘤發(fā)生可重新表達(dá)的抗原。乳腺癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、非小細(xì)胞性肺癌等均可見(jiàn)癌胚抗原的表達(dá)。癌胚抗原信使核糖核酸轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)被用來(lái)檢測(cè)多種消化道腫瘤和乳腺癌的微轉(zhuǎn)移。國(guó)外研究者進(jìn)行了胃腸道腫瘤患者外周血癌胚抗原信使核糖核酸表達(dá)的研究。研究對(duì)象為35例胃癌、24例腸癌、4例食道癌、4例膽管癌和9例健康志愿者。癌胚抗原信使核糖核酸表達(dá)，在健康志愿者中均為陰性，在轉(zhuǎn)移性腫瘤患者中100%為陽(yáng)性，在早期胃癌患者中33.3%為陽(yáng)性，在可切除胃癌患者中18.8%為陽(yáng)性，在轉(zhuǎn)移性大腸癌中55.6%為陽(yáng)性。反之，癌胚抗原信使核糖核酸表達(dá)，一個(gè)開(kāi)始為陰性的Ⅲ期胃癌患者會(huì)在以后的隨訪中轉(zhuǎn)為陽(yáng)性，一個(gè)月后即可發(fā)現(xiàn)患者有多處骨轉(zhuǎn)移。由此提示，使用癌胚抗原信使核糖核酸鑒定胃腸道腫瘤患者的外周血腫瘤細(xì)胞，對(duì)于早期發(fā)現(xiàn)胃腸道腫瘤微轉(zhuǎn)移可能是一個(gè)有希望的方法，特別是在治愈后的患者隨訪中有一定意義。
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端粒酶：是癌的標(biāo)志，在正常上皮細(xì)胞中是不存在的。國(guó)外學(xué)者利用端粒酶的活力作為分子標(biāo)志物來(lái)測(cè)定患者外周血循環(huán)中的腫瘤細(xì)胞，有25例Ⅳ期乳腺癌患者和9例健康志愿者的血標(biāo)本經(jīng)處理后被測(cè)定，結(jié)果為84%的乳腺癌患者端粒酶活力為陽(yáng)性，而志愿者全部為陰
性。由此提示了該方法的敏感性和特異性。其在化療期間監(jiān)測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖可能是有效的。
除此之外，研究較多的還有檢測(cè)肝癌的甲胎蛋白信使核糖核酸、黑色素瘤的酪氨酸酶信使核糖核酸、前列腺癌的前列腺特異抗原信使核糖核酸及前列腺特異性膜抗原信使核糖核酸等。基因檢測(cè)方面有上皮細(xì)胞糖蛋白基因等。
標(biāo)記物表達(dá)的臨床意義
乳腺癌：乳腺癌是最常見(jiàn)的伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的惡性腫瘤之一，臨床上常�？梢�(jiàn)分期很早、術(shù)后也進(jìn)行了正規(guī)化療的病例，但仍有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生。為了尋找更好的檢查方法，國(guó)外有研究者應(yīng)用免疫磁珠分選和免疫細(xì)胞化學(xué)方法研究能手術(shù)的和轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者外周血中的腫瘤細(xì)胞。其研究結(jié)果提示：外周血微轉(zhuǎn)移在早期能手術(shù)的乳腺癌患者中是罕見(jiàn)的，但在轉(zhuǎn)移性乳腺癌的患者中很多。由此可知，當(dāng)我們?cè)谕庵苎邪l(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞時(shí)即提示轉(zhuǎn)移的存在。國(guó)外研究者為決定早期及晚期乳腺癌患者帶有循環(huán)腫瘤細(xì)胞的百分比，采用了免疫磁珠分選和流式細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)的方法進(jìn)行了研究。其結(jié)果為，在早期乳腺癌患者每20ml血中平均有16個(gè)腫瘤細(xì)胞，而在轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者血中則平均有122個(gè)腫瘤細(xì)胞。這是通過(guò)細(xì)胞形
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態(tài)及免疫染色確定的。由此可見(jiàn)，這個(gè)方法能夠確定血循環(huán)中的乳腺癌細(xì)胞，且明確了轉(zhuǎn)移性乳腺癌比早期乳腺癌有更多的循環(huán)癌細(xì)胞。因此，用這方法能夠篩選高�；颊�、決定是否需要輔助治療及隨訪、早期發(fā)現(xiàn)乳腺癌的復(fù)發(fā)。同時(shí)，應(yīng)用轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)技術(shù)測(cè)定不同分期的，根治術(shù)前、術(shù)后乳腺癌患者外周血癌胚抗原信使核糖核酸的表達(dá)提示：術(shù)前外周血癌胚抗原信使核糖核酸表達(dá)顯示疾病的預(yù)后，特別是與臨床分期無(wú)關(guān)的血液轉(zhuǎn)移情況；術(shù)后外周血癌胚抗原信使核糖核酸表達(dá)陽(yáng)性可能是疾病殘留的證據(jù)，要考慮給予增加綜合治療。
肺癌：肺癌也為易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的惡性腫瘤之一，特別是Ⅲa期術(shù)后的病例。國(guó)外研究者進(jìn)行了一項(xiàng)研究。他們通過(guò)轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)測(cè)定了103例根治性肺葉切除的非小細(xì)胞肺癌患者以及對(duì)照了15例肺間質(zhì)纖維化患者、32例健康志愿者外周血中的癌胚抗原信使核糖核酸。結(jié)果顯示，對(duì)照組中沒(méi)有癌胚抗原信使核糖核酸陽(yáng)性者，而在103例非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)前血標(biāo)本中，有62例為癌胚抗原信使核糖核酸陽(yáng)性，其中又有44%術(shù)后仍持續(xù)陽(yáng)性。癌胚抗原信使核糖核酸的陽(yáng)性率，在很大程度上與術(shù)前、術(shù)后的疾病分期有關(guān)。許多能手術(shù)的非小細(xì)胞肺癌患者，但在術(shù)后外周血中發(fā)現(xiàn)了癌胚抗原信使核糖核酸陽(yáng)性，這些患者的復(fù)發(fā)幾率可能很高。
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胃癌：胃癌患者死亡的主要原因之一是肝轉(zhuǎn)移。為了探討手術(shù)時(shí)血循環(huán)中的癌細(xì)胞與肝轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系，國(guó)外研究者以癌胚抗原信使核糖核酸為靶基因，檢測(cè)了57例胃癌患者手術(shù)前后門(mén)靜脈、外周動(dòng)脈、上腔靜脈的血標(biāo)本。其結(jié)果為，在57例患者中21例陽(yáng)性，由健康者和胃良性疾病患者組成的對(duì)照組全部為陰性，陽(yáng)性率在各個(gè)不同部位標(biāo)本中沒(méi)有差異。由于循環(huán)癌細(xì)胞的出現(xiàn)與外科手術(shù)有關(guān)，由此研究者認(rèn)為，外科手術(shù)是一個(gè)血液轉(zhuǎn)移的因素，術(shù)后癌胚抗原信使核糖核酸陽(yáng)性的病例復(fù)發(fā)率高。
前列腺癌：首先用于前列腺癌細(xì)胞檢測(cè)的標(biāo)志基因，是前列腺特異抗原信使核糖核酸；其后為前列腺特異性膜抗原，即表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體信使核糖核酸。國(guó)外學(xué)者在研究中，應(yīng)用轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)技術(shù)測(cè)定前列腺癌患者外周血中表達(dá)前列腺特異性抗體2
和前列腺特異性抗體3的癌細(xì)胞。其結(jié)果為，前列腺特異性抗體2信使核糖核酸表達(dá)在33.3%的前列腺癌患者中呈陽(yáng)性，前列腺特異性抗體3信使核糖核酸表達(dá)在81%的前列腺癌D期患者中呈陽(yáng)性，相反所有良性前列腺疾病患者及健康志愿者均陰性。
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綜上所述，外周血中腫瘤細(xì)胞檢測(cè)對(duì)于腫瘤診治具有非常重要的意義，已成為當(dāng)前醫(yī)學(xué)研究的一個(gè)熱點(diǎn)。其檢測(cè)的主要方法是免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)及轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)，為提高檢測(cè)的敏感性和特異性，可以通過(guò)其他手段如免疫磁珠分選富集腫瘤細(xì)胞、定量免疫酶聯(lián)反應(yīng)等，并選擇腫瘤特異性的標(biāo)志物作為研究目標(biāo)，從而觀察其臨床意義。腫瘤的微轉(zhuǎn)移應(yīng)該是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo)，這樣才能夠解釋為什么一些常規(guī)檢查淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為陰性的腫瘤患者仍有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生，而微轉(zhuǎn)移病灶的存在又是決定復(fù)發(fā)率和生存率的關(guān)鍵因素。眾多的研究提示，有微轉(zhuǎn)移者的預(yù)后明顯差于無(wú)轉(zhuǎn)移者。因此，早期、準(zhǔn)確地檢測(cè)外周血腫瘤細(xì)胞對(duì)及時(shí)、合理地進(jìn)行綜合治療很重要，微轉(zhuǎn)移檢測(cè)陽(yáng)性者可作為加強(qiáng)輔助化療的選擇性指標(biāo)，有助于建立個(gè)體化的治療方案，有利于提高患者生存率、降低腫瘤復(fù)發(fā)率。微轉(zhuǎn)移檢測(cè)還可以作為腫瘤療效評(píng)估指標(biāo)，從而指導(dǎo)治療，既可避免患者遭受不必要的化療毒性，又可防止失去治療時(shí)機(jī)。目前的主要問(wèn)題是檢測(cè)手段的可靠性，因?yàn)闊o(wú)論免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)還是轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)都存在著一定的局限性，不能排除有假陰性和假陽(yáng)性的可能，當(dāng)然也有癌細(xì)胞異質(zhì)性的因素參與。因此，進(jìn)一步提高檢測(cè)手段的敏感性和特異性，仍是今后研究的方向。, 百拇醫(yī)藥(樓谷音)
血循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)方法
免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)：這是一種檢測(cè)外周血中潛伏腫瘤細(xì)胞最普遍、最成熟、最標(biāo)準(zhǔn)的方法。其檢測(cè)的基本原理是抗原抗體結(jié)合反應(yīng)。利用單克隆抗體與特異的腫瘤標(biāo)志物結(jié)合，并通過(guò)酶與底物反應(yīng)顯色來(lái)判斷腫瘤細(xì)胞的存在。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)的主要優(yōu)點(diǎn)是可進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析，而缺點(diǎn)是檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的敏感性范圍小。其主要檢測(cè)的腫瘤標(biāo)志物分為3類(lèi)。一是，上皮細(xì)胞角蛋白，這種細(xì)胞角蛋白是特異性較高的指標(biāo)，已被臨床廣泛應(yīng)用，但有假陽(yáng)性；二是，上皮細(xì)胞膜特異性抗原，如粘蛋白類(lèi)，包括早期膜抗原等；三是，腫瘤相關(guān)糖蛋白。
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轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)：這是一個(gè)敏感的檢測(cè)方法。其檢測(cè)的基本原理是擴(kuò)增出腫瘤細(xì)胞標(biāo)志性基因或靶信使核糖核酸來(lái)證實(shí)腫瘤細(xì)胞的存在，是目前檢測(cè)外周血腫瘤細(xì)胞微轉(zhuǎn)移最有效的方法，較免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)應(yīng)用更廣泛。其主要檢測(cè)的腫瘤標(biāo)志物也分為3類(lèi)。一是，某些基因改變，如基因點(diǎn)的突變、缺失、異構(gòu)、擴(kuò)增；二是，組織特異性標(biāo)志物信使核糖核酸，如雌激素受體等；三是，腫瘤特異性標(biāo)志物信使核糖核酸，如人癌胚抗原等。
定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)、熒光定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)和真時(shí)自動(dòng)免疫酶聯(lián)反應(yīng)儀檢測(cè)：為提高上述轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)的特異性和敏感性，新的方法不斷產(chǎn)生，在其轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)的基礎(chǔ)上又增加了定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)、熒光定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)和真時(shí)自動(dòng)免疫酶聯(lián)反應(yīng)儀檢測(cè)。
除以上方法之外，也有學(xué)者加用免疫磁珠分選富集腫瘤細(xì)胞、激光掃描細(xì)胞計(jì)數(shù)器等來(lái)提高免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)和轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)的敏感性及特異性。
特異性檢測(cè)標(biāo)記物
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膀胱上皮特異性蛋白：是膀胱上皮特有的跨膜蛋白，只存在于膀胱上皮，是很好的移行細(xì)胞癌特異性腫瘤標(biāo)志物候選者之一。國(guó)外研究者為發(fā)現(xiàn)膀胱癌患者外周血的腫瘤細(xì)胞，研究了12例移行細(xì)胞癌患者外周血膀胱上皮特異性蛋白Ⅱ的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在所有移行細(xì)胞癌患者的外周血中發(fā)現(xiàn)了該標(biāo)志物的表達(dá)，而在非移行細(xì)胞癌患者及健康志愿者的外周血中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)其表達(dá)。他們由此得出結(jié)論，膀胱上皮特異性蛋白Ⅱ在外周血中的表達(dá)，可能為診斷和處理移行細(xì)胞癌患者提供了有益的信息。
細(xì)胞角蛋白20：角蛋白屬中間絲細(xì)胞骨架蛋白，是存在于上皮細(xì)胞內(nèi)的一組蛋白質(zhì)。根據(jù)其不同的分子量和等電點(diǎn)，可分為20個(gè)亞型。這些亞型在上皮細(xì)胞中的分布有一定的特異性。角蛋白分為表皮角蛋白和細(xì)胞角蛋白，后者主要存在于內(nèi)臟器官不角化的上皮細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞角蛋白20為其中的一種。國(guó)外研究者采用轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)測(cè)定 細(xì)胞角蛋白20來(lái)發(fā)現(xiàn)泌尿系統(tǒng)腫瘤患者外周血中腫瘤細(xì)胞。應(yīng)用這個(gè)方法，在1 000萬(wàn)個(gè)外周血單核細(xì)胞的標(biāo)本中，只要有10個(gè)膀胱癌細(xì)胞就能被發(fā)現(xiàn)。研究還證實(shí)，細(xì)胞角蛋白20在外周血單核細(xì)胞的標(biāo)本中被發(fā)現(xiàn)與腫瘤分期有關(guān)，在局部浸潤(rùn)的腫瘤患者中陽(yáng)性率為19%，在轉(zhuǎn)移的腫瘤患者中陽(yáng)性率為83%，而在健康志愿者的外周血中未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞角蛋白20。由此可知，細(xì)胞角蛋白20的轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)測(cè)定方法，對(duì)于在外周血中發(fā)現(xiàn)泌尿系統(tǒng)腫瘤是有診斷價(jià)值的。
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表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體信使核糖核酸：表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體是一種糖蛋白，在表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的結(jié)合作用下，被激活而具有酪氨酸激酶的活性，產(chǎn)生自身磷酸化，啟動(dòng)細(xì)胞核內(nèi)的有關(guān)基因，從而促進(jìn)上皮細(xì)胞的分裂增殖。研究者在多種類(lèi)型的腫瘤組織中進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與相應(yīng)的正常組織比較，腫瘤組織有較高水平的表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體表達(dá)，并認(rèn)為它的高表達(dá)是腫瘤預(yù)后不良的指征。國(guó)外學(xué)者對(duì)照研究了表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體信使核糖核酸在膀胱癌患者外周血中的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在對(duì)照組，所有膀胱炎患者表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體信使核糖核酸的表達(dá)均為陰性；而在觀察組，74%的膀胱癌患者中，其表達(dá)為陽(yáng)性。由此顯示，在外周血中表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體信使核糖核酸可能是膀胱癌的有用標(biāo)志物。此外，表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體在乳腺癌、肺癌、大腸癌患者中的表達(dá)也可達(dá)50%～70%。由此，國(guó)外研究者推測(cè)，外周血表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體信使核糖核酸的檢測(cè)，是一個(gè)測(cè)定腫瘤患者血循環(huán)中腫瘤細(xì)胞特異性和敏感性相當(dāng)高的方法。
癌胚抗原信使核糖核酸：癌胚抗原是一組存在于胚胎胃腸粘膜上皮與一些惡性組織細(xì)胞表面的酸性糖蛋白；是一種由胚胎表達(dá)，而正常成人不表達(dá)，但伴隨腫瘤發(fā)生可重新表達(dá)的抗原。乳腺癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、非小細(xì)胞性肺癌等均可見(jiàn)癌胚抗原的表達(dá)。癌胚抗原信使核糖核酸轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)被用來(lái)檢測(cè)多種消化道腫瘤和乳腺癌的微轉(zhuǎn)移。國(guó)外研究者進(jìn)行了胃腸道腫瘤患者外周血癌胚抗原信使核糖核酸表達(dá)的研究。研究對(duì)象為35例胃癌、24例腸癌、4例食道癌、4例膽管癌和9例健康志愿者。癌胚抗原信使核糖核酸表達(dá)，在健康志愿者中均為陰性，在轉(zhuǎn)移性腫瘤患者中100%為陽(yáng)性，在早期胃癌患者中33.3%為陽(yáng)性，在可切除胃癌患者中18.8%為陽(yáng)性，在轉(zhuǎn)移性大腸癌中55.6%為陽(yáng)性。反之，癌胚抗原信使核糖核酸表達(dá)，一個(gè)開(kāi)始為陰性的Ⅲ期胃癌患者會(huì)在以后的隨訪中轉(zhuǎn)為陽(yáng)性，一個(gè)月后即可發(fā)現(xiàn)患者有多處骨轉(zhuǎn)移。由此提示，使用癌胚抗原信使核糖核酸鑒定胃腸道腫瘤患者的外周血腫瘤細(xì)胞，對(duì)于早期發(fā)現(xiàn)胃腸道腫瘤微轉(zhuǎn)移可能是一個(gè)有希望的方法，特別是在治愈后的患者隨訪中有一定意義。
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端粒酶：是癌的標(biāo)志，在正常上皮細(xì)胞中是不存在的。國(guó)外學(xué)者利用端粒酶的活力作為分子標(biāo)志物來(lái)測(cè)定患者外周血循環(huán)中的腫瘤細(xì)胞，有25例Ⅳ期乳腺癌患者和9例健康志愿者的血標(biāo)本經(jīng)處理后被測(cè)定，結(jié)果為84%的乳腺癌患者端粒酶活力為陽(yáng)性，而志愿者全部為陰
性。由此提示了該方法的敏感性和特異性。其在化療期間監(jiān)測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖可能是有效的。
除此之外，研究較多的還有檢測(cè)肝癌的甲胎蛋白信使核糖核酸、黑色素瘤的酪氨酸酶信使核糖核酸、前列腺癌的前列腺特異抗原信使核糖核酸及前列腺特異性膜抗原信使核糖核酸等。基因檢測(cè)方面有上皮細(xì)胞糖蛋白基因等。
標(biāo)記物表達(dá)的臨床意義
乳腺癌：乳腺癌是最常見(jiàn)的伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的惡性腫瘤之一，臨床上常�？梢�(jiàn)分期很早、術(shù)后也進(jìn)行了正規(guī)化療的病例，但仍有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生。為了尋找更好的檢查方法，國(guó)外有研究者應(yīng)用免疫磁珠分選和免疫細(xì)胞化學(xué)方法研究能手術(shù)的和轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者外周血中的腫瘤細(xì)胞。其研究結(jié)果提示：外周血微轉(zhuǎn)移在早期能手術(shù)的乳腺癌患者中是罕見(jiàn)的，但在轉(zhuǎn)移性乳腺癌的患者中很多。由此可知，當(dāng)我們?cè)谕庵苎邪l(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞時(shí)即提示轉(zhuǎn)移的存在。國(guó)外研究者為決定早期及晚期乳腺癌患者帶有循環(huán)腫瘤細(xì)胞的百分比，采用了免疫磁珠分選和流式細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)的方法進(jìn)行了研究。其結(jié)果為，在早期乳腺癌患者每20ml血中平均有16個(gè)腫瘤細(xì)胞，而在轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者血中則平均有122個(gè)腫瘤細(xì)胞。這是通過(guò)細(xì)胞形
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態(tài)及免疫染色確定的。由此可見(jiàn)，這個(gè)方法能夠確定血循環(huán)中的乳腺癌細(xì)胞，且明確了轉(zhuǎn)移性乳腺癌比早期乳腺癌有更多的循環(huán)癌細(xì)胞。因此，用這方法能夠篩選高�；颊�、決定是否需要輔助治療及隨訪、早期發(fā)現(xiàn)乳腺癌的復(fù)發(fā)。同時(shí)，應(yīng)用轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)技術(shù)測(cè)定不同分期的，根治術(shù)前、術(shù)后乳腺癌患者外周血癌胚抗原信使核糖核酸的表達(dá)提示：術(shù)前外周血癌胚抗原信使核糖核酸表達(dá)顯示疾病的預(yù)后，特別是與臨床分期無(wú)關(guān)的血液轉(zhuǎn)移情況；術(shù)后外周血癌胚抗原信使核糖核酸表達(dá)陽(yáng)性可能是疾病殘留的證據(jù)，要考慮給予增加綜合治療。
肺癌：肺癌也為易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的惡性腫瘤之一，特別是Ⅲa期術(shù)后的病例。國(guó)外研究者進(jìn)行了一項(xiàng)研究。他們通過(guò)轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)測(cè)定了103例根治性肺葉切除的非小細(xì)胞肺癌患者以及對(duì)照了15例肺間質(zhì)纖維化患者、32例健康志愿者外周血中的癌胚抗原信使核糖核酸。結(jié)果顯示，對(duì)照組中沒(méi)有癌胚抗原信使核糖核酸陽(yáng)性者，而在103例非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)前血標(biāo)本中，有62例為癌胚抗原信使核糖核酸陽(yáng)性，其中又有44%術(shù)后仍持續(xù)陽(yáng)性。癌胚抗原信使核糖核酸的陽(yáng)性率，在很大程度上與術(shù)前、術(shù)后的疾病分期有關(guān)。許多能手術(shù)的非小細(xì)胞肺癌患者，但在術(shù)后外周血中發(fā)現(xiàn)了癌胚抗原信使核糖核酸陽(yáng)性，這些患者的復(fù)發(fā)幾率可能很高。
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胃癌：胃癌患者死亡的主要原因之一是肝轉(zhuǎn)移。為了探討手術(shù)時(shí)血循環(huán)中的癌細(xì)胞與肝轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系，國(guó)外研究者以癌胚抗原信使核糖核酸為靶基因，檢測(cè)了57例胃癌患者手術(shù)前后門(mén)靜脈、外周動(dòng)脈、上腔靜脈的血標(biāo)本。其結(jié)果為，在57例患者中21例陽(yáng)性，由健康者和胃良性疾病患者組成的對(duì)照組全部為陰性，陽(yáng)性率在各個(gè)不同部位標(biāo)本中沒(méi)有差異。由于循環(huán)癌細(xì)胞的出現(xiàn)與外科手術(shù)有關(guān)，由此研究者認(rèn)為，外科手術(shù)是一個(gè)血液轉(zhuǎn)移的因素，術(shù)后癌胚抗原信使核糖核酸陽(yáng)性的病例復(fù)發(fā)率高。
前列腺癌：首先用于前列腺癌細(xì)胞檢測(cè)的標(biāo)志基因，是前列腺特異抗原信使核糖核酸；其后為前列腺特異性膜抗原，即表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體信使核糖核酸。國(guó)外學(xué)者在研究中，應(yīng)用轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)技術(shù)測(cè)定前列腺癌患者外周血中表達(dá)前列腺特異性抗體2
和前列腺特異性抗體3的癌細(xì)胞。其結(jié)果為，前列腺特異性抗體2信使核糖核酸表達(dá)在33.3%的前列腺癌患者中呈陽(yáng)性，前列腺特異性抗體3信使核糖核酸表達(dá)在81%的前列腺癌D期患者中呈陽(yáng)性，相反所有良性前列腺疾病患者及健康志愿者均陰性。
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綜上所述，外周血中腫瘤細(xì)胞檢測(cè)對(duì)于腫瘤診治具有非常重要的意義，已成為當(dāng)前醫(yī)學(xué)研究的一個(gè)熱點(diǎn)。其檢測(cè)的主要方法是免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)及轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)，為提高檢測(cè)的敏感性和特異性，可以通過(guò)其他手段如免疫磁珠分選富集腫瘤細(xì)胞、定量免疫酶聯(lián)反應(yīng)等，并選擇腫瘤特異性的標(biāo)志物作為研究目標(biāo)，從而觀察其臨床意義。腫瘤的微轉(zhuǎn)移應(yīng)該是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo)，這樣才能夠解釋為什么一些常規(guī)檢查淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為陰性的腫瘤患者仍有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生，而微轉(zhuǎn)移病灶的存在又是決定復(fù)發(fā)率和生存率的關(guān)鍵因素。眾多的研究提示，有微轉(zhuǎn)移者的預(yù)后明顯差于無(wú)轉(zhuǎn)移者。因此，早期、準(zhǔn)確地檢測(cè)外周血腫瘤細(xì)胞對(duì)及時(shí)、合理地進(jìn)行綜合治療很重要，微轉(zhuǎn)移檢測(cè)陽(yáng)性者可作為加強(qiáng)輔助化療的選擇性指標(biāo)，有助于建立個(gè)體化的治療方案，有利于提高患者生存率、降低腫瘤復(fù)發(fā)率。微轉(zhuǎn)移檢測(cè)還可以作為腫瘤療效評(píng)估指標(biāo)，從而指導(dǎo)治療，既可避免患者遭受不必要的化療毒性，又可防止失去治療時(shí)機(jī)。目前的主要問(wèn)題是檢測(cè)手段的可靠性，因?yàn)闊o(wú)論免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)還是轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)都存在著一定的局限性，不能排除有假陰性和假陽(yáng)性的可能，當(dāng)然也有癌細(xì)胞異質(zhì)性的因素參與。因此，進(jìn)一步提高檢測(cè)手段的敏感性和特異性，仍是今后研究的方向。, 百拇醫(yī)藥(樓谷音)
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