采用PCR技術(shù)快速診斷MRSA感染對(duì)合理治療MRSA感染的意義(3)
在調(diào)節(jié)基因的作用特別強(qiáng)大而誘導(dǎo)劑作用較弱時(shí)，雖然金葡菌含有mecA基因，mecA基因仍處于抑制狀態(tài)，因而體外敏感試驗(yàn)呈敏感結(jié)果，而PCR結(jié)果呈陽(yáng)性。由于這種帶有mecA基因的MSSA一旦接觸到誘導(dǎo)劑即有可能變?yōu)楦叨饶退幍木�，因此在臨床上用體外敏感試驗(yàn)判定為敏感菌后，如果用β-內(nèi)酰胺類治療，則會(huì)導(dǎo)致藥物治療無(wú)效。所以，此類菌株雖然體外敏感試驗(yàn)結(jié)果呈敏感菌，但仍應(yīng)被視為MRSA。用PCR方法診斷此類菌株的感染，不但能早期診斷，并且可避免使用誘導(dǎo)劑，合理選用MRSA有效藥物，提高治療效果。
4.3 簡(jiǎn)便迅速
用體外敏感試驗(yàn)方法檢測(cè)MRSA不僅受多種試驗(yàn)條件的影響，而且檢測(cè)速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)慢于PCR方法。
通常情況下，從病人標(biāo)本中分離培養(yǎng)菌株鑒定及進(jìn)行敏感試驗(yàn)，需要三天甚至更長(zhǎng)時(shí)間。對(duì)于重度感染的病人尤其容易造成延誤，導(dǎo)致治療困難或失敗。同時(shí)，臨床上經(jīng)常能見(jiàn)到病人入院前已經(jīng)進(jìn)行抗菌藥物治療的情況，這給細(xì)菌培養(yǎng)分離造成了更大的困難。
就特異性和敏感性而言，有些研究者建立的通過(guò)用DNA探針雜交檢測(cè)MRSA的方法可與PCR法相比。然而從操作方法及檢測(cè)速度方面與PCR法相比，核酸雜交方法仍不如PCR法簡(jiǎn)便快捷。
一般的PCR方法檢測(cè)MRSA，從樣本DNA的制備到PCR產(chǎn)物電泳檢測(cè)，可在一天內(nèi)完成。而快速制備樣本DNA的方法，使得整個(gè)檢測(cè)過(guò)程只需花費(fèi)約3h(25min制備樣本DNA，2hPCR，30min檢測(cè)PCR產(chǎn)物)，極為簡(jiǎn)便快捷。多數(shù)研究者檢測(cè)MRSA所用標(biāo)本，都是臨床分離標(biāo)本。因此，用PCR方法檢測(cè)MRSA所用時(shí)間實(shí)際上應(yīng)包括細(xì)菌分離培養(yǎng)的時(shí)間。有研究者嘗試從血標(biāo)本中直接制備DNA樣本，也取得了較好的檢測(cè)結(jié)果。
5、存在的問(wèn)題
5.1 假陽(yáng)性
PCR技術(shù)所具有的高度敏感性也給MRSA的檢測(cè)帶來(lái)了不利影響。PCR可在30個(gè)左右的循環(huán)后，將單拷貝模板放大上百萬(wàn)倍。反應(yīng)管中即使是極微量的陽(yáng)性模板污染，也會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。這也是PCR技術(shù)不能單獨(dú)廣泛地應(yīng)用于臨床診斷的主要原因之一。防止擴(kuò)增產(chǎn)物污染的主要方法有光化學(xué)法、酶法和引物水解法。
5.2 敏感性
雖然PCR法檢測(cè)MRSA有很高的敏感性和特異性，但是由于MRSA的耐藥性尚存在少量其它耐藥機(jī)制，因而有少數(shù)MRSA雖然對(duì)甲氧西林等抗菌藥物耐藥，但卻不含mecA基因，因而不能用PCR法檢測(cè)出。所以，在MRSA的檢測(cè)中，應(yīng)該同時(shí)采用體外敏感試驗(yàn)為對(duì)照，以檢出此類MRSA。
綜上所述，PCR法檢測(cè)MRSA有其它檢測(cè)方法所不能取代的優(yōu)點(diǎn)，是一個(gè)有價(jià)值的檢測(cè)手段。盡管尚存在一些不足，但隨著技術(shù)水平的不斷改進(jìn)，可以預(yù)料，PCR技術(shù)將會(huì)成為具有廣泛發(fā)展前景的技術(shù)。, http://www.www.srpcoatings.com(李耘)
4.3 簡(jiǎn)便迅速
用體外敏感試驗(yàn)方法檢測(cè)MRSA不僅受多種試驗(yàn)條件的影響，而且檢測(cè)速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)慢于PCR方法。
通常情況下，從病人標(biāo)本中分離培養(yǎng)菌株鑒定及進(jìn)行敏感試驗(yàn)，需要三天甚至更長(zhǎng)時(shí)間。對(duì)于重度感染的病人尤其容易造成延誤，導(dǎo)致治療困難或失敗。同時(shí)，臨床上經(jīng)常能見(jiàn)到病人入院前已經(jīng)進(jìn)行抗菌藥物治療的情況，這給細(xì)菌培養(yǎng)分離造成了更大的困難。
就特異性和敏感性而言，有些研究者建立的通過(guò)用DNA探針雜交檢測(cè)MRSA的方法可與PCR法相比。然而從操作方法及檢測(cè)速度方面與PCR法相比，核酸雜交方法仍不如PCR法簡(jiǎn)便快捷。
一般的PCR方法檢測(cè)MRSA，從樣本DNA的制備到PCR產(chǎn)物電泳檢測(cè)，可在一天內(nèi)完成。而快速制備樣本DNA的方法，使得整個(gè)檢測(cè)過(guò)程只需花費(fèi)約3h(25min制備樣本DNA，2hPCR，30min檢測(cè)PCR產(chǎn)物)，極為簡(jiǎn)便快捷。多數(shù)研究者檢測(cè)MRSA所用標(biāo)本，都是臨床分離標(biāo)本。因此，用PCR方法檢測(cè)MRSA所用時(shí)間實(shí)際上應(yīng)包括細(xì)菌分離培養(yǎng)的時(shí)間。有研究者嘗試從血標(biāo)本中直接制備DNA樣本，也取得了較好的檢測(cè)結(jié)果。
5、存在的問(wèn)題
5.1 假陽(yáng)性
PCR技術(shù)所具有的高度敏感性也給MRSA的檢測(cè)帶來(lái)了不利影響。PCR可在30個(gè)左右的循環(huán)后，將單拷貝模板放大上百萬(wàn)倍。反應(yīng)管中即使是極微量的陽(yáng)性模板污染，也會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。這也是PCR技術(shù)不能單獨(dú)廣泛地應(yīng)用于臨床診斷的主要原因之一。防止擴(kuò)增產(chǎn)物污染的主要方法有光化學(xué)法、酶法和引物水解法。
5.2 敏感性
雖然PCR法檢測(cè)MRSA有很高的敏感性和特異性，但是由于MRSA的耐藥性尚存在少量其它耐藥機(jī)制，因而有少數(shù)MRSA雖然對(duì)甲氧西林等抗菌藥物耐藥，但卻不含mecA基因，因而不能用PCR法檢測(cè)出。所以，在MRSA的檢測(cè)中，應(yīng)該同時(shí)采用體外敏感試驗(yàn)為對(duì)照，以檢出此類MRSA。
綜上所述，PCR法檢測(cè)MRSA有其它檢測(cè)方法所不能取代的優(yōu)點(diǎn)，是一個(gè)有價(jià)值的檢測(cè)手段。盡管尚存在一些不足，但隨著技術(shù)水平的不斷改進(jìn)，可以預(yù)料，PCR技術(shù)將會(huì)成為具有廣泛發(fā)展前景的技術(shù)。, http://www.www.srpcoatings.com(李耘)
百拇醫(yī)藥網(wǎng) http://www.www.srpcoatings.com/html/Dir/2003/09/26/98/805.htm