99mTc-HMPAO-WBC實(shí)驗(yàn)性心肌炎顯像的研究(1)
用BALB/c小鼠接種柯薩奇B3m病毒(CVB3m)，以制備病毒性心肌炎動物模型。將動物模型分為苦參總堿中抗柯薩奇B病毒有效成分注射液(簡稱抗柯注射液)治療組及生理鹽水對照組，行99mTc-6-甲基丙二胺肟(HMPAO)-WBC心肌顯像，并作組織病理學(xué)與電鏡檢查對比，以評價(jià)抗柯注射液對抗CVB的治療效果。
一、材料和方法
1 動物模型的制作[1]：取8周齡體重18—20g的BALB/c雄性小鼠61只、隨機(jī)分成3組：正常組16只，抗柯注射液治療組21只，生理鹽水對照組(簡稱對照組)24只。正常組：每只小鼠腹腔內(nèi)注射無菌生理鹽水0.8ml。治療組及對照組每只小鼠腹腔內(nèi)注射10-6CVB3m懸液半數(shù)組織培養(yǎng)感染量(TCID50)0.8ml，2小時(shí)后治療組小鼠腹腔內(nèi)注射抗柯注射液0.2m1，每日2次(40mg·kg-1·d-1)；對照組及正常組給予0.9%生理鹽水0.2ml,每日2次，連續(xù)5天。
, 百拇醫(yī)藥
2 淋巴細(xì)胞分離[2,3]：正常組頸椎脫位致死，開胸取血，肝素抗凝，用RPMI-1640液稀釋1倍，再用相對密度(舊稱比重)為1.088的淋巴細(xì)胞分離液分離淋巴細(xì)胞，2000r/min離心20分鐘。取小鼠脾臟研碎，稀釋至16ml左右，用上述方法分離淋巴細(xì)胞。將全血中分離的淋巴細(xì)胞與脾臟內(nèi)的淋巴細(xì)胞混勻，用RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌2次，淋巴細(xì)胞數(shù)為2.1×107.
3 99mTc-HMPAO的標(biāo)記[3]: 99mTc 淋洗液1850MBq，體積<5ml，注入含1mgHMPAO凍干品安瓶中振蕩。測定標(biāo)記率為89%。
4.淋巴細(xì)胞的標(biāo)記：在分離的淋巴細(xì)胞試管中(約2ml)加入3ml99mTc-HMPAO (740MBq)，室溫下每隔5分鐘振搖1次，約30分鐘。1000r/min離心5分鐘，棄上清液，用生理鹽水洗滌2次，并用生理鹽水還原至5ml，再測放射性為74MBq，標(biāo)記率為10%。
, 百拇醫(yī)藥
5 .顯像方法：鼠靜脈注射99mTc-HMPAO-WBC懸液0.4ml(總量為5ml,細(xì)胞數(shù)2.1×107,放射性活度為74MBq)，3小時(shí)后將鼠頸椎脫位致死,分別取心、肝、肺等臟器，稱重，測定每分鐘計(jì)數(shù)后顯像(美國ADAC公司GenesysSPECT儀)。
6.取鼠部分心肌，分別置2%戊二醛磷酸鹽緩沖液及10%中性福爾馬林緩沖液內(nèi)，作病理切片。
二、結(jié)果與討論
1.99mTc-HMPAO-WBC 在BALB/c小鼠體內(nèi)的分布。注射99mTc-HMPAO-WBC3小時(shí)后，核素主要分布在肝、脾、腎，其次為肺與骨路，心臟和腦的放射性最低。
2. 心肌顯像。99mTc-HMPAO-WBC經(jīng)小鼠尾靜脈注射后3小時(shí)，注射10-6TCID50CVB3m病毒0.8ml的BALB/c小鼠心肌內(nèi)有明顯放射性濃聚，而正常組小鼠的心肌放射性較稀疏，2組肺和肝均可見放射性濃聚�？箍伦⑸湟褐委熃M小鼠心肌內(nèi)放射性聚集高于正常組。對照組小鼠心肌內(nèi)放射性聚集程度明顯高于正常組及抗柯注射液治療組。
3.組織病理學(xué)檢查。①光鏡檢查：抗柯注射液治療組于接種病毒后5天，所取心肌組織基本正常；對照組心肌則呈多灶性壞死，心肌細(xì)胞崩解呈碎片，液性壞死，單個核細(xì)胞浸潤，周邊心肌呈凝固性壞死，血管內(nèi)皮呈隆起增生。②心肌組織超微結(jié)構(gòu)觀察：抗柯注射液治療組小鼠的心肌纖維、線粒體及心肌細(xì)胞核均未見明顯改變，而對照組小鼠心肌纖維排列紊亂，部分溶解，線粒體腫脹，部分線粒體嵴斷裂及空泡變性.脂肪滴增多，心肌細(xì)胞核腫脹，核固縮，心肌纖維內(nèi)可見大小不一的鈣化灶。, 百拇醫(yī)藥(陳曙霞 袁濟(jì)民 謝龍山 梅尚文 劉晶星)
一、材料和方法
1 動物模型的制作[1]：取8周齡體重18—20g的BALB/c雄性小鼠61只、隨機(jī)分成3組：正常組16只，抗柯注射液治療組21只，生理鹽水對照組(簡稱對照組)24只。正常組：每只小鼠腹腔內(nèi)注射無菌生理鹽水0.8ml。治療組及對照組每只小鼠腹腔內(nèi)注射10-6CVB3m懸液半數(shù)組織培養(yǎng)感染量(TCID50)0.8ml，2小時(shí)后治療組小鼠腹腔內(nèi)注射抗柯注射液0.2m1，每日2次(40mg·kg-1·d-1)；對照組及正常組給予0.9%生理鹽水0.2ml,每日2次，連續(xù)5天。
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2 淋巴細(xì)胞分離[2,3]：正常組頸椎脫位致死，開胸取血，肝素抗凝，用RPMI-1640液稀釋1倍，再用相對密度(舊稱比重)為1.088的淋巴細(xì)胞分離液分離淋巴細(xì)胞，2000r/min離心20分鐘。取小鼠脾臟研碎，稀釋至16ml左右，用上述方法分離淋巴細(xì)胞。將全血中分離的淋巴細(xì)胞與脾臟內(nèi)的淋巴細(xì)胞混勻，用RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌2次，淋巴細(xì)胞數(shù)為2.1×107.
3 99mTc-HMPAO的標(biāo)記[3]: 99mTc 淋洗液1850MBq，體積<5ml，注入含1mgHMPAO凍干品安瓶中振蕩。測定標(biāo)記率為89%。
4.淋巴細(xì)胞的標(biāo)記：在分離的淋巴細(xì)胞試管中(約2ml)加入3ml99mTc-HMPAO (740MBq)，室溫下每隔5分鐘振搖1次，約30分鐘。1000r/min離心5分鐘，棄上清液，用生理鹽水洗滌2次，并用生理鹽水還原至5ml，再測放射性為74MBq，標(biāo)記率為10%。
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5 .顯像方法：鼠靜脈注射99mTc-HMPAO-WBC懸液0.4ml(總量為5ml,細(xì)胞數(shù)2.1×107,放射性活度為74MBq)，3小時(shí)后將鼠頸椎脫位致死,分別取心、肝、肺等臟器，稱重，測定每分鐘計(jì)數(shù)后顯像(美國ADAC公司GenesysSPECT儀)。
6.取鼠部分心肌，分別置2%戊二醛磷酸鹽緩沖液及10%中性福爾馬林緩沖液內(nèi)，作病理切片。
二、結(jié)果與討論
1.99mTc-HMPAO-WBC 在BALB/c小鼠體內(nèi)的分布。注射99mTc-HMPAO-WBC3小時(shí)后，核素主要分布在肝、脾、腎，其次為肺與骨路，心臟和腦的放射性最低。
2. 心肌顯像。99mTc-HMPAO-WBC經(jīng)小鼠尾靜脈注射后3小時(shí)，注射10-6TCID50CVB3m病毒0.8ml的BALB/c小鼠心肌內(nèi)有明顯放射性濃聚，而正常組小鼠的心肌放射性較稀疏，2組肺和肝均可見放射性濃聚�？箍伦⑸湟褐委熃M小鼠心肌內(nèi)放射性聚集高于正常組。對照組小鼠心肌內(nèi)放射性聚集程度明顯高于正常組及抗柯注射液治療組。
3.組織病理學(xué)檢查。①光鏡檢查：抗柯注射液治療組于接種病毒后5天，所取心肌組織基本正常；對照組心肌則呈多灶性壞死，心肌細(xì)胞崩解呈碎片，液性壞死，單個核細(xì)胞浸潤，周邊心肌呈凝固性壞死，血管內(nèi)皮呈隆起增生。②心肌組織超微結(jié)構(gòu)觀察：抗柯注射液治療組小鼠的心肌纖維、線粒體及心肌細(xì)胞核均未見明顯改變，而對照組小鼠心肌纖維排列紊亂，部分溶解，線粒體腫脹，部分線粒體嵴斷裂及空泡變性.脂肪滴增多，心肌細(xì)胞核腫脹，核固縮，心肌纖維內(nèi)可見大小不一的鈣化灶。, 百拇醫(yī)藥(陳曙霞 袁濟(jì)民 謝龍山 梅尚文 劉晶星)
百拇醫(yī)藥網(wǎng) http://www.www.srpcoatings.com/html/Dir/2003/09/26/99/288.htm