黃芪總提取物抗衰老作用的實(shí)驗(yàn)研究(2)
1.5.2 肝、腦細(xì)胞中線粒體的制備[7]眼球放血處死小鼠,立即取出肝臟和腦組織,分別用冰冷的生理鹽水制成10%勻漿(W/V),4℃離心,(3500rmin-1,10min),取上清液,再4℃離心(11812r.min-1,15min),沉淀為線粒體。將線粒體懸于生理鹽水中,-20℃貯存待測(cè)。一部分線粒體懸液經(jīng)CPS-1A超聲波粉碎機(jī)粉碎,60μA,5s/次,間隙10s,反復(fù)4次使線粒體微粒破碎,4℃離心(2000rmin-1,10min),取上清液供酶活力測(cè)定。以上操作皆在4℃以下進(jìn)行。另一部分線粒體懸液直接供丙二醛(MDA)與蛋白質(zhì)的測(cè)定。
1.5.3 線粒體MDA含量的測(cè)定采用硫代巴比妥酸比色法[8],根據(jù)TEP標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算MDA含量,結(jié)果以nmol.mg-1Pr表示。蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用改良Lowry氏法[9]。
1.5.4 線粒體中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSHpx)活性測(cè)定取線粒體裂解液上清0.4ml,用DTNB法檢測(cè)[10],GSHpx活力單位以μmol.min-1.mg-1Pr表示。
1.5.5 線粒體錳超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活性測(cè)定按SOD測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)Mn-SOD活性。其活力單位以NU(國(guó)際單位).mg-1Pr表示。
1.5.6 線粒體GSH含量測(cè)定采用DTNB比色法[11],在412nm處測(cè)吸光度值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算GSH含量,結(jié)果以nmol.mg-1Pr表示。
1.5.7 線粒體GSSG含量測(cè)定[12]取線粒體裂解液上清1.0ml,加入0.04mol.L-1NEM水溶液0.4ml,室溫放置30min后,加0.187mol.L-1NaOH溶液1.5ml,OPT溶液(1mg.ml-1)0.1ml充分混合,室溫放置30min。在激發(fā)波長(zhǎng)350nm,發(fā)射波長(zhǎng)430nm處測(cè)熒光強(qiáng)度(F)值,并在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的GSSG含量,以nmol.mg-1Pr表示。
1.6 數(shù)據(jù)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以
±s表示,采用t檢驗(yàn)判定。


, http://www.www.srpcoatings.com(雷紅 王斌 李衛(wèi)平 楊雁 周愛(ài)武 陳敏珠)
1.5.3 線粒體MDA含量的測(cè)定采用硫代巴比妥酸比色法[8],根據(jù)TEP標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算MDA含量,結(jié)果以nmol.mg-1Pr表示。蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用改良Lowry氏法[9]。
1.5.4 線粒體中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSHpx)活性測(cè)定取線粒體裂解液上清0.4ml,用DTNB法檢測(cè)[10],GSHpx活力單位以μmol.min-1.mg-1Pr表示。
1.5.5 線粒體錳超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活性測(cè)定按SOD測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)Mn-SOD活性。其活力單位以NU(國(guó)際單位).mg-1Pr表示。
1.5.6 線粒體GSH含量測(cè)定采用DTNB比色法[11],在412nm處測(cè)吸光度值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算GSH含量,結(jié)果以nmol.mg-1Pr表示。
1.5.7 線粒體GSSG含量測(cè)定[12]取線粒體裂解液上清1.0ml,加入0.04mol.L-1NEM水溶液0.4ml,室溫放置30min后,加0.187mol.L-1NaOH溶液1.5ml,OPT溶液(1mg.ml-1)0.1ml充分混合,室溫放置30min。在激發(fā)波長(zhǎng)350nm,發(fā)射波長(zhǎng)430nm處測(cè)熒光強(qiáng)度(F)值,并在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的GSSG含量,以nmol.mg-1Pr表示。
1.6 數(shù)據(jù)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以
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