國人體外血清檢測過敏原(SIgE)研究(1)
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體外血清檢測過敏原即體外血清特異性IgE檢測，是高科技查找過敏原(即變應(yīng)原)和診斷各種變態(tài)反應(yīng)病特異性的關(guān)鍵手段，與傳統(tǒng)的皮膚試驗和激發(fā)試驗一樣，都屬于變態(tài)反應(yīng)病的特異性診斷，但相比之下具有安全、準(zhǔn)確、方便等優(yōu)點。
Wide等于1967年首先建立了特異性IgE(Specific IgE,SIgE)的測定方法，經(jīng)各國學(xué)者近30年的研究，日臻完善，目前已成為變態(tài)反應(yīng)病不可缺少的診斷手段之一。
如何評價國人體外血清特異性IgE檢測是近年來變態(tài)反應(yīng)專業(yè)研討的熱點課題，1993年-1995年我院對170例患者進行了特異性IgE檢測和皮膚過敏原試驗，具體研究報告如下：
對象及檢測方法
1.1對象
, http://www.www.srpcoatings.com
1.1.1試驗組：本研究選擇170例支氣管哮喘、過敏性鼻炎和蕁麻疹患者為試驗組，其中男90例，女80例，年齡7-66歲，均系本院住院和門診患者，且長期居住沈陽地區(qū)。過敏性鼻炎診斷參照“變態(tài)反應(yīng)鼻炎診斷和療效評定標(biāo)準(zhǔn)”、(中華耳鼻咽喉雜志，第26卷第3期1991年)；支氣管哮喘診斷參照“支氣管哮喘的診斷分期和療效標(biāo)準(zhǔn)”，(中華結(jié)核和呼吸雜志，1991年)；蕁麻診斷參照“蕁麻疹診斷標(biāo)準(zhǔn)”(實用變態(tài)反應(yīng)學(xué)，葉世泰主編)。
1.1.2 對照組：選擇本院血庫獻血員及其他健康人30例，男16例，女14例，年齡6-70歲，均系長期居住沈陽地區(qū)者。
1.2 方法
1.2.1 采樣要求：受檢者早晨空腹取靜脈血3-5毫升，置于加蓋試管內(nèi)，常速離心，分離血清后送檢。
1.2.2 檢測原理：采用先進的生物素-親和素-酶標(biāo)抗體的ELISA技術(shù)和AlaSTAT免疫分析系統(tǒng)。在已包被配體的固相載體中，加入受檢者血清和相應(yīng)的配體標(biāo)記變應(yīng)原，這樣受檢者血清中相應(yīng)的SIgE就與標(biāo)記配體的變應(yīng)原特異性結(jié)合，形成SIgE-變應(yīng)的免疫復(fù)合物。然后加入抗配體，通過配體/抗配體橋聯(lián)，使之與固相載體相連接。再加入酶標(biāo)記的抗人IgE抗體。形成固相載體-抗配體-標(biāo)記變應(yīng)原-SIgE-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。該復(fù)合物再與加入的酶底物作用發(fā)生顏色反應(yīng)，在一定范圍內(nèi)與SIgE的濃度成正比。
, 百拇醫(yī)藥
1.2.3 儀器試劑：儀器為美國DPC公司產(chǎn)Sopheia2000型酶聯(lián)測定儀及相關(guān)配套產(chǎn)品如微量移液器、定量加液器、振蕩器等。試劑采用美國DPC“AlaSTAT”藥盒，利用酶免疫包被試管方法進行總IgE和特異性IgE測定。藥盒由包被試管、高特異性抗體及標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控構(gòu)成，產(chǎn)品符合世界衛(wèi)生組織國際標(biāo)準(zhǔn)。
1.2.4主要操作步驟：(1)向測定管中加入100ul變應(yīng)原，向標(biāo)準(zhǔn)管中加入100ul參考變應(yīng)原，向陽性對照管中加入100ul粉螨變應(yīng)原；(2)測定管中加入50ul受檢者血清，向標(biāo)準(zhǔn)管和對照管分別加入50ul標(biāo)準(zhǔn)品和50ul陽性血清；(3)室溫下振蕩1小時，每分鐘200次；(4)每管加入50ul抗配體，室溫下振蕩1小時后，棄去反應(yīng)液。每管加2ml清洗液，放置2分鐘，棄去。如此2次，然后在吸水紙上扣干；(5)每管加入200ul酶標(biāo)記抗體，室溫下振蕩1小時后，清洗3次，扣干；(6)每管(包括空白管)加入500ul顯色液(5ml緩沖液加1片OPD藥片立即配成)，室溫下避光放置10分鐘，期間搖動幾次；(7)終止反應(yīng)，每管(包括空白管)加入500ul1N的H2SO4；(8)送Sopheia2000型酶聯(lián)測定儀檢測。儀器測定結(jié)果分級報告如下：SigE水平(IU/ml) <0.29 0.30- 0.35 1.50- 3.00- 15.00-, http://www.www.srpcoatings.com(秦洪義)
體外血清檢測過敏原即體外血清特異性IgE檢測，是高科技查找過敏原(即變應(yīng)原)和診斷各種變態(tài)反應(yīng)病特異性的關(guān)鍵手段，與傳統(tǒng)的皮膚試驗和激發(fā)試驗一樣，都屬于變態(tài)反應(yīng)病的特異性診斷，但相比之下具有安全、準(zhǔn)確、方便等優(yōu)點。
Wide等于1967年首先建立了特異性IgE(Specific IgE,SIgE)的測定方法，經(jīng)各國學(xué)者近30年的研究，日臻完善，目前已成為變態(tài)反應(yīng)病不可缺少的診斷手段之一。
如何評價國人體外血清特異性IgE檢測是近年來變態(tài)反應(yīng)專業(yè)研討的熱點課題，1993年-1995年我院對170例患者進行了特異性IgE檢測和皮膚過敏原試驗，具體研究報告如下：
對象及檢測方法
1.1對象
, http://www.www.srpcoatings.com
1.1.1試驗組：本研究選擇170例支氣管哮喘、過敏性鼻炎和蕁麻疹患者為試驗組，其中男90例，女80例，年齡7-66歲，均系本院住院和門診患者，且長期居住沈陽地區(qū)。過敏性鼻炎診斷參照“變態(tài)反應(yīng)鼻炎診斷和療效評定標(biāo)準(zhǔn)”、(中華耳鼻咽喉雜志，第26卷第3期1991年)；支氣管哮喘診斷參照“支氣管哮喘的診斷分期和療效標(biāo)準(zhǔn)”，(中華結(jié)核和呼吸雜志，1991年)；蕁麻診斷參照“蕁麻疹診斷標(biāo)準(zhǔn)”(實用變態(tài)反應(yīng)學(xué)，葉世泰主編)。
1.1.2 對照組：選擇本院血庫獻血員及其他健康人30例，男16例，女14例，年齡6-70歲，均系長期居住沈陽地區(qū)者。
1.2 方法
1.2.1 采樣要求：受檢者早晨空腹取靜脈血3-5毫升，置于加蓋試管內(nèi)，常速離心，分離血清后送檢。
1.2.2 檢測原理：采用先進的生物素-親和素-酶標(biāo)抗體的ELISA技術(shù)和AlaSTAT免疫分析系統(tǒng)。在已包被配體的固相載體中，加入受檢者血清和相應(yīng)的配體標(biāo)記變應(yīng)原，這樣受檢者血清中相應(yīng)的SIgE就與標(biāo)記配體的變應(yīng)原特異性結(jié)合，形成SIgE-變應(yīng)的免疫復(fù)合物。然后加入抗配體，通過配體/抗配體橋聯(lián)，使之與固相載體相連接。再加入酶標(biāo)記的抗人IgE抗體。形成固相載體-抗配體-標(biāo)記變應(yīng)原-SIgE-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。該復(fù)合物再與加入的酶底物作用發(fā)生顏色反應(yīng)，在一定范圍內(nèi)與SIgE的濃度成正比。
, 百拇醫(yī)藥
1.2.3 儀器試劑：儀器為美國DPC公司產(chǎn)Sopheia2000型酶聯(lián)測定儀及相關(guān)配套產(chǎn)品如微量移液器、定量加液器、振蕩器等。試劑采用美國DPC“AlaSTAT”藥盒，利用酶免疫包被試管方法進行總IgE和特異性IgE測定。藥盒由包被試管、高特異性抗體及標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控構(gòu)成，產(chǎn)品符合世界衛(wèi)生組織國際標(biāo)準(zhǔn)。
1.2.4主要操作步驟：(1)向測定管中加入100ul變應(yīng)原，向標(biāo)準(zhǔn)管中加入100ul參考變應(yīng)原，向陽性對照管中加入100ul粉螨變應(yīng)原；(2)測定管中加入50ul受檢者血清，向標(biāo)準(zhǔn)管和對照管分別加入50ul標(biāo)準(zhǔn)品和50ul陽性血清；(3)室溫下振蕩1小時，每分鐘200次；(4)每管加入50ul抗配體，室溫下振蕩1小時后，棄去反應(yīng)液。每管加2ml清洗液，放置2分鐘，棄去。如此2次，然后在吸水紙上扣干；(5)每管加入200ul酶標(biāo)記抗體，室溫下振蕩1小時后，清洗3次，扣干；(6)每管(包括空白管)加入500ul顯色液(5ml緩沖液加1片OPD藥片立即配成)，室溫下避光放置10分鐘，期間搖動幾次；(7)終止反應(yīng)，每管(包括空白管)加入500ul1N的H2SO4；(8)送Sopheia2000型酶聯(lián)測定儀檢測。儀器測定結(jié)果分級報告如下：SigE水平(IU/ml) <0.29 0.30- 0.35 1.50- 3.00- 15.00-, http://www.www.srpcoatings.com(秦洪義)
百拇醫(yī)藥網(wǎng) http://www.www.srpcoatings.com/html/Dir/2003/09/26/99/548.htm