傳染性非典型肺炎的診療方案(之六)
(四)T淋巴細(xì)胞亞群
1.外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢測診斷標(biāo)準(zhǔn)
大多數(shù)SARS患者外周血T淋巴細(xì)胞CD3+、CD4+、CD8+亞群均減低，尤以CD4+減低明顯。
2.檢測方法
應(yīng)用流式細(xì)胞儀(Flow Cytometer,FCM)對相應(yīng)熒光抗體標(biāo)記的樣本進(jìn)行檢測，計算CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+細(xì)胞的百分比和絕對值。
3.結(jié)果解釋
(1)百分比：SARS患者的CD3+、CD4+、CD8+亞群的百分比可減低或正常。
(2)絕對值：SARS患者的CD3+、CD4+、CD8+亞群明顯減低，其中以CD4+亞群減低尤為顯著。
, http://www.www.srpcoatings.com
(3)CD4+、/CD8+：正常或降低。
(4)個體差異：不同SARS患者之間存在著較大的個體差異，影響因素包括年齡、病情、病程、有無基礎(chǔ)疾病、免疫功能狀態(tài)等。
現(xiàn)已證實，T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的特異性細(xì)胞免疫功能低下是SARS患者的主要免疫病理改變之一，主要表現(xiàn)為T淋巴細(xì)胞及其亞群的明顯受損，其中CD3+、CD4+、CD8+尤為明顯。另外，糖皮質(zhì)激素的應(yīng)用也會使T淋巴細(xì)胞亞群(主要為CD3+、CD4+、CD8+)的動態(tài)檢測，有助于SARS-CoV致病機(jī)制的研究和診斷，并且對于指導(dǎo)治療(尤其是糖皮質(zhì)激素應(yīng)用的時機(jī)、劑量等)以及提示預(yù)后具有重要價值。但應(yīng)用此標(biāo)準(zhǔn)診斷SARS時，應(yīng)排除人類免疫缺陷病毒(HIV)和乙型肝炎病毒等感染、腫瘤、自身免疫性疾病、免疫缺陷病、血液系統(tǒng)疾病、肝腎疾病、糖尿病、器官移植等情況導(dǎo)致的CD3+、CD4+、CD8+的變化。T淋巴細(xì)胞的受損與病情嚴(yán)重程度有明顯相關(guān)性，即重型SARS患者較普通型明顯，死亡病例T淋巴細(xì)胞的減低為可逆性改變，恢復(fù)期病例的T淋巴細(xì)胞及其亞群可逐漸接近或達(dá)到正常水平。
, 百拇醫(yī)藥
5.注意事項
(1)樣本采集后應(yīng)6小時內(nèi)送檢，24小時內(nèi)完成檢測。
(2)進(jìn)行T淋巴細(xì)胞亞群檢測的同時應(yīng)計數(shù)外周血淋巴細(xì)胞，用以計算各亞群(CD3+、CD4+、CD8+)的絕對值。
(3)防止微小凝塊阻塞流式細(xì)胞儀的吸樣針，加樣時應(yīng)盡量將全血樣本粘至樣品測試管的側(cè)壁上。
(4)防止單克隆抗體的損失，對樣本進(jìn)行熒光標(biāo)記時應(yīng)盡量避免將試劑粘到樣本測試管的側(cè)壁上。
(5)操作中應(yīng)注意避免各熒光標(biāo)記單克隆抗體的交叉污染。
(五)鑒別診斷
1.鑒別診斷項目
, http://www.www.srpcoatings.com
在SARS早期診斷時，流感病毒(甲、乙、丙型)、副流感病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒、嗜肺軍才菌、肺炎支原體、肺炎衣原體及呼吸道細(xì)菌等檢測有助于SARS的鑒別診斷。
2.實驗方法
目前的實驗方法主要有快速診斷、血清學(xué)診斷、分子生物這檢測及病毒(衣原體、細(xì)菌)分離等方法。
(1)快速診斷：通常采用酶免疫分析(EIA)、間接免疫熒光法測定病原體的特異性抗原或抗體，操作簡便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
(2)血清學(xué)診斷：可采用補(bǔ)體結(jié)合試驗、代謝抑制試驗、間接血凝試驗及間接免疫熒光試驗等方法，應(yīng)用雙份血清檢測，抗體效價增高4倍及以上有意義，一般用于流行病學(xué)調(diào)查。
(3)分子生物學(xué)檢測：目前采用基因探針和PCR等方法。基因核酸雜交技術(shù)雖然敏感性和特異性高，但由于基因探針和同位素標(biāo)記，具有放射性污染，且設(shè)備要求高、操作繁瑣，一般難以推廣。PCR技術(shù)具有簡便、快速、敏感、特異等特點，容易推廣，但實驗室的標(biāo)準(zhǔn)化問題有待于解決。
, 百拇醫(yī)藥
(4)病毒(衣原體、細(xì)菌)的分離：采用患者鼻咽分泌物接種人胚肺細(xì)胞或猴腎細(xì)胞培養(yǎng)，分離病毒和衣原體，再用補(bǔ)體結(jié)合或中和試驗、IFA或ELISA等鑒定抗原，但細(xì)胞培養(yǎng)陽性率不夠高。另外因技術(shù)操作復(fù)雜，實驗設(shè)備要求較高，一般醫(yī)院不具備條件，且敏感性受標(biāo)本采集、運(yùn)輸、保存等因素影響，該實驗方法不適合作為常規(guī)檢測，多用于科研和疑難病例的鑒定。
建議在SARS鑒別診斷中首選快速診斷。
3.臨床意義
細(xì)菌感染可直接或繼病毒感染之后發(fā)生，以溶血性鏈球菌為多見，其次為流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌和葡萄球菌等，偶見革蘭陰性桿菌。嬰兒和兒童的主要肺炎病原體是病毒，主要有RSV、腺病毒、副流感病毒、甲型和乙型流感病毒。這些病原體也能引起成人肺炎。成人肺炎最常見的病因是細(xì)菌，其中肺炎鏈球菌最常見，其他病原菌包括厭氧菌、金黃色葡萄球菌、流感嗜血桿菌、卡他募拉菌、克雷伯肺炎桿菌和其他革蘭陰性桿菌等，甲型流感病毒也可引起成人呼吸道感染。肺炎支原體為一種類似細(xì)菌的微生物，是引起年齡較大兒童和青年肺炎特別常見的原因。
, http://www.www.srpcoatings.com
2002年底在我國廣東出現(xiàn)的SARS，其病原體SARS-CoV感染人體后可引起嚴(yán)重的呼吸系統(tǒng)癥狀，但這些癥狀并非SARS所特有。由于許多能夠?qū)е滦夤懿∽兊牟≡w，如流感病毒(甲型、乙型)，副流感病毒(1、2、3型)，腺病毒，RSV，肺炎支原體和肺炎衣原體，軍團(tuán)菌等均可引起呼吸道疾病，而且目前SARS在實驗室診斷方面還缺乏有效的特異性指標(biāo)，因此實驗室檢查中增加一些排除實驗以協(xié)助臨床進(jìn)行鑒別診斷非常重要。目前可開展上述病原體等檢測，作為SARS的排除診斷實驗。但在分析結(jié)果時，須考慮到SARS患者俁并上述病原體感染的可能。
在SARS患者住院治療期間，約有20%患者可出現(xiàn)糨發(fā)性下呼吸道和/或肺部感染。病原體包括革蘭陰性桿菌(非發(fā)酵菌群，肺炎我雷伯菌，不動桿菌)、革蘭陽性球菌(抗甲氧西林葡萄球菌)、真菌(白色念珠菌，曲霉菌)及結(jié)核分枝桿菌等。對病原體的正確實驗室診斷，是能否進(jìn)行針對性治療，降低病死率的關(guān)鍵。
《傳染性非典型肺炎（SARS）診療方案》下載全文, http://www.www.srpcoatings.com
1.外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢測診斷標(biāo)準(zhǔn)
大多數(shù)SARS患者外周血T淋巴細(xì)胞CD3+、CD4+、CD8+亞群均減低，尤以CD4+減低明顯。
2.檢測方法
應(yīng)用流式細(xì)胞儀(Flow Cytometer,FCM)對相應(yīng)熒光抗體標(biāo)記的樣本進(jìn)行檢測，計算CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+細(xì)胞的百分比和絕對值。
3.結(jié)果解釋
(1)百分比：SARS患者的CD3+、CD4+、CD8+亞群的百分比可減低或正常。
(2)絕對值：SARS患者的CD3+、CD4+、CD8+亞群明顯減低，其中以CD4+亞群減低尤為顯著。
, http://www.www.srpcoatings.com
(3)CD4+、/CD8+：正常或降低。
(4)個體差異：不同SARS患者之間存在著較大的個體差異，影響因素包括年齡、病情、病程、有無基礎(chǔ)疾病、免疫功能狀態(tài)等。
現(xiàn)已證實，T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的特異性細(xì)胞免疫功能低下是SARS患者的主要免疫病理改變之一，主要表現(xiàn)為T淋巴細(xì)胞及其亞群的明顯受損，其中CD3+、CD4+、CD8+尤為明顯。另外，糖皮質(zhì)激素的應(yīng)用也會使T淋巴細(xì)胞亞群(主要為CD3+、CD4+、CD8+)的動態(tài)檢測，有助于SARS-CoV致病機(jī)制的研究和診斷，并且對于指導(dǎo)治療(尤其是糖皮質(zhì)激素應(yīng)用的時機(jī)、劑量等)以及提示預(yù)后具有重要價值。但應(yīng)用此標(biāo)準(zhǔn)診斷SARS時，應(yīng)排除人類免疫缺陷病毒(HIV)和乙型肝炎病毒等感染、腫瘤、自身免疫性疾病、免疫缺陷病、血液系統(tǒng)疾病、肝腎疾病、糖尿病、器官移植等情況導(dǎo)致的CD3+、CD4+、CD8+的變化。T淋巴細(xì)胞的受損與病情嚴(yán)重程度有明顯相關(guān)性，即重型SARS患者較普通型明顯，死亡病例T淋巴細(xì)胞的減低為可逆性改變，恢復(fù)期病例的T淋巴細(xì)胞及其亞群可逐漸接近或達(dá)到正常水平。
, 百拇醫(yī)藥
5.注意事項
(1)樣本采集后應(yīng)6小時內(nèi)送檢，24小時內(nèi)完成檢測。
(2)進(jìn)行T淋巴細(xì)胞亞群檢測的同時應(yīng)計數(shù)外周血淋巴細(xì)胞，用以計算各亞群(CD3+、CD4+、CD8+)的絕對值。
(3)防止微小凝塊阻塞流式細(xì)胞儀的吸樣針，加樣時應(yīng)盡量將全血樣本粘至樣品測試管的側(cè)壁上。
(4)防止單克隆抗體的損失，對樣本進(jìn)行熒光標(biāo)記時應(yīng)盡量避免將試劑粘到樣本測試管的側(cè)壁上。
(5)操作中應(yīng)注意避免各熒光標(biāo)記單克隆抗體的交叉污染。
(五)鑒別診斷
1.鑒別診斷項目
, http://www.www.srpcoatings.com
在SARS早期診斷時，流感病毒(甲、乙、丙型)、副流感病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒、嗜肺軍才菌、肺炎支原體、肺炎衣原體及呼吸道細(xì)菌等檢測有助于SARS的鑒別診斷。
2.實驗方法
目前的實驗方法主要有快速診斷、血清學(xué)診斷、分子生物這檢測及病毒(衣原體、細(xì)菌)分離等方法。
(1)快速診斷：通常采用酶免疫分析(EIA)、間接免疫熒光法測定病原體的特異性抗原或抗體，操作簡便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
(2)血清學(xué)診斷：可采用補(bǔ)體結(jié)合試驗、代謝抑制試驗、間接血凝試驗及間接免疫熒光試驗等方法，應(yīng)用雙份血清檢測，抗體效價增高4倍及以上有意義，一般用于流行病學(xué)調(diào)查。
(3)分子生物學(xué)檢測：目前采用基因探針和PCR等方法。基因核酸雜交技術(shù)雖然敏感性和特異性高，但由于基因探針和同位素標(biāo)記，具有放射性污染，且設(shè)備要求高、操作繁瑣，一般難以推廣。PCR技術(shù)具有簡便、快速、敏感、特異等特點，容易推廣，但實驗室的標(biāo)準(zhǔn)化問題有待于解決。
, 百拇醫(yī)藥
(4)病毒(衣原體、細(xì)菌)的分離：采用患者鼻咽分泌物接種人胚肺細(xì)胞或猴腎細(xì)胞培養(yǎng)，分離病毒和衣原體，再用補(bǔ)體結(jié)合或中和試驗、IFA或ELISA等鑒定抗原，但細(xì)胞培養(yǎng)陽性率不夠高。另外因技術(shù)操作復(fù)雜，實驗設(shè)備要求較高，一般醫(yī)院不具備條件，且敏感性受標(biāo)本采集、運(yùn)輸、保存等因素影響，該實驗方法不適合作為常規(guī)檢測，多用于科研和疑難病例的鑒定。
建議在SARS鑒別診斷中首選快速診斷。
3.臨床意義
細(xì)菌感染可直接或繼病毒感染之后發(fā)生，以溶血性鏈球菌為多見，其次為流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌和葡萄球菌等，偶見革蘭陰性桿菌。嬰兒和兒童的主要肺炎病原體是病毒，主要有RSV、腺病毒、副流感病毒、甲型和乙型流感病毒。這些病原體也能引起成人肺炎。成人肺炎最常見的病因是細(xì)菌，其中肺炎鏈球菌最常見，其他病原菌包括厭氧菌、金黃色葡萄球菌、流感嗜血桿菌、卡他募拉菌、克雷伯肺炎桿菌和其他革蘭陰性桿菌等，甲型流感病毒也可引起成人呼吸道感染。肺炎支原體為一種類似細(xì)菌的微生物，是引起年齡較大兒童和青年肺炎特別常見的原因。
, http://www.www.srpcoatings.com
2002年底在我國廣東出現(xiàn)的SARS，其病原體SARS-CoV感染人體后可引起嚴(yán)重的呼吸系統(tǒng)癥狀，但這些癥狀并非SARS所特有。由于許多能夠?qū)е滦夤懿∽兊牟≡w，如流感病毒(甲型、乙型)，副流感病毒(1、2、3型)，腺病毒，RSV，肺炎支原體和肺炎衣原體，軍團(tuán)菌等均可引起呼吸道疾病，而且目前SARS在實驗室診斷方面還缺乏有效的特異性指標(biāo)，因此實驗室檢查中增加一些排除實驗以協(xié)助臨床進(jìn)行鑒別診斷非常重要。目前可開展上述病原體等檢測，作為SARS的排除診斷實驗。但在分析結(jié)果時，須考慮到SARS患者俁并上述病原體感染的可能。
在SARS患者住院治療期間，約有20%患者可出現(xiàn)糨發(fā)性下呼吸道和/或肺部感染。病原體包括革蘭陰性桿菌(非發(fā)酵菌群，肺炎我雷伯菌，不動桿菌)、革蘭陽性球菌(抗甲氧西林葡萄球菌)、真菌(白色念珠菌，曲霉菌)及結(jié)核分枝桿菌等。對病原體的正確實驗室診斷，是能否進(jìn)行針對性治療，降低病死率的關(guān)鍵。
《傳染性非典型肺炎（SARS）診療方案》下載全文, http://www.www.srpcoatings.com
百拇醫(yī)藥網(wǎng) http://www.www.srpcoatings.com/html/Dir/2003/11/25/12/163.htm