hCGβ在乳酸桿菌中的分泌性表達(dá)
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復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院分子病毒學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 上海200011 王紅梅;李大金;姜紅;袁正宏
參見附件(180kb)。
復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院分子病毒學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 上海200011 王紅梅;李大金;姜紅;袁正宏
關(guān)鍵詞:乳酸桿菌;hCGβ;電穿孔轉(zhuǎn)化
摘要:目的:探索乳酸桿菌攜帶表達(dá)h CGβ避孕疫苗的抗生育作用。方法:用PCR從短小乳酸桿菌染色體中擴(kuò)增得到S-層蛋白的信號(hào)肽序列,將其與h CGβ基因連接后克隆到乳酸桿菌整合型表達(dá)載體p Ilac的lac啟動(dòng)子下游,得到質(zhì)粒p Ilac h CGβ,電穿孔轉(zhuǎn)化干酪氏乳酸桿菌Lb. caseiCECT5 2 76。挑選轉(zhuǎn)化后的耐藥菌落,在含紅霉素培養(yǎng)基中培養(yǎng),抽提其染色體DNA,PCR及測序鑒定證實(shí)h CGβ基因整合到Lb.casei的基因組中。h CG放免檢測上清及細(xì)胞裂解液中的h CGβ。結(jié)果:h CGβ基因已經(jīng)整合到Lb.casei的基因組中;細(xì)菌產(chǎn)生的目的蛋白約有3/ 4分泌進(jìn)入培養(yǎng)上清,而加入誘導(dǎo)劑乳糖2...
復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院分子病毒學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 上海200011 王紅梅;李大金;姜紅;袁正宏
關(guān)鍵詞:乳酸桿菌;hCGβ;電穿孔轉(zhuǎn)化
摘要:目的:探索乳酸桿菌攜帶表達(dá)h CGβ避孕疫苗的抗生育作用。方法:用PCR從短小乳酸桿菌染色體中擴(kuò)增得到S-層蛋白的信號(hào)肽序列,將其與h CGβ基因連接后克隆到乳酸桿菌整合型表達(dá)載體p Ilac的lac啟動(dòng)子下游,得到質(zhì)粒p Ilac h CGβ,電穿孔轉(zhuǎn)化干酪氏乳酸桿菌Lb. caseiCECT5 2 76。挑選轉(zhuǎn)化后的耐藥菌落,在含紅霉素培養(yǎng)基中培養(yǎng),抽提其染色體DNA,PCR及測序鑒定證實(shí)h CGβ基因整合到Lb.casei的基因組中。h CG放免檢測上清及細(xì)胞裂解液中的h CGβ。結(jié)果:h CGβ基因已經(jīng)整合到Lb.casei的基因組中;細(xì)菌產(chǎn)生的目的蛋白約有3/ 4分泌進(jìn)入培養(yǎng)上清,而加入誘導(dǎo)劑乳糖2...
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