"體外培育牛黃"研發(fā)訪談錄--體外培育牛黃的安全性評價⑤
記者：請問使用體外培育牛黃藥品的安全性有沒有保障？
宋瑞琨教授：我們按國家一類新藥的申報和審批要求進行了安全性評價，主要做了這些研究：急性毒性試驗，小鼠口服LD50為9g/kg，為臨床用量的1800倍，大鼠口服LD50為10g/kg，為臨床用量的2000倍；長期毒性試驗(大鼠、犬)，沒有任何毒副作用；特殊毒理試驗(微生物回復突變試驗、培養(yǎng)細胞染色體畸變試驗、小鼠微核試驗、大鼠的一般生殖毒性試驗、大鼠致畸敏感期毒性試驗、小鼠圍產期生殖毒性試驗)，無致畸、致突變作用。這些研究結果表明，體外培育牛黃的安全性是能夠得到保障的。
記者：能否詳細介紹一下具體的實驗情況？
宋瑞琨教授：好，我先從急性毒性試驗講起。體外培育牛黃按6.55～16.00g/kg劑量予小鼠灌胃給藥，動物出現(xiàn)活動減少，攝食量下降，排黃色軟便，部分動物死亡。死亡動物腸胃空虛，輕度脹氣。存活動物于給藥后1～3天內恢復正常，LD50為9.0(8.0～10.1)g/kg，是臨床用量(0.3g/60kg或5mg/kg)的1800倍。大鼠口服體外培育牛黃的LD50>10g/kg，是臨床用量的2000倍以上。
, 百拇醫(yī)藥
從急性毒性試驗結果可以看出，體外培育牛黃給予小鼠和大鼠口服后的急性毒性很低。小鼠口服TPN的LD50為9.0(8.0～10.1)g/kg，是人口服用量(0.3g或5mg/kg)的1800倍(參見表1)。大鼠口服TPN的LD50大于10g/kg，是人口服用量的2000倍以上。
記者：長期毒性實驗的情況如何？
宋瑞琨教授：在長期毒性試驗中，大鼠耐受體外培育牛黃1500mg/kg/天，達35天；犬耐受體外培育牛黃500mg/kg/天，共33天；對大鼠和犬各器官、系統(tǒng)的形態(tài)、結構和功能均無不良影響。用藥組體重增長均高于對照組。各劑量大鼠的血紅蛋白和紅細胞計數(shù)均明顯高于對照組。
在長期毒性試驗中，大鼠耐受TPN1500mg/kg達35天，犬耐受TPN500mg/kg達33天。結果表明TPN長期口服大鼠和犬各系統(tǒng)的形態(tài)、結構和功能無不良影響，而且用藥組動物的體重增長均高于對照組(參見表2)。
, 百拇醫(yī)藥
記者：你們做的體外培育牛黃致突變試驗的結果怎樣？
宋瑞琨教授：主要包括以下幾方面的實驗研究：
①微生物回復突變試驗。
體外培育牛黃經用鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100和TA102四個菌株，在摻入量高達10000ug/皿和加S9或不加S9的條件下進行Ames試驗，對各菌株均未有引起回復突變菌落數(shù)超過空白對照自發(fā)突變菌落數(shù)的2倍的情況，表明試驗結果為陰性。
體外培育牛黃在本試驗條件下，從定性的標準和平皿摻入試驗的觀測結果，其對各受試菌株引起的回復突變菌落數(shù)均未超過對照組自發(fā)突變菌落數(shù)的2倍，表明試驗結果為陰性，顯示體外培育牛黃對組氨酸缺陷型沙門氏菌無明顯的致回復突變作用。
②培養(yǎng)細胞染色體畸變試驗。
, http://www.www.srpcoatings.com
體外培育牛黃的劑量分別為1.0、10.0和100ug/ml，對人外周血淋巴細胞染色體畸變進行檢測，各劑量組的淋巴細胞染色體畸變率與對照組比較，均未見明顯增高，表明體外培育牛黃在本試驗條件下，對人外周血淋巴細胞無明顯致畸作用。
在體外培育牛黃的劑量分別為1.0、10.0和100ug/ml的試驗條件下，對人外周血淋巴細胞誘發(fā)的染色體細胞畸變率增加與溶劑對照組比較，均無統(tǒng)計學顯著性差別意義，試驗結果為陰性，表明在試驗條件下，對人外周血淋巴細胞染色體無明顯的致畸變性作用(參見表3)。
③小鼠微核試驗。
體外培育牛黃的劑量為50、150和500mg/kg體重對小鼠進行微核試驗，檢測各劑量組的動物的骨髓嗜多染紅細胞微核率及PCE/RBC比值的結果，與空白對照組比較均無顯著性差異(P>0.05)，表明培育牛黃對小鼠的體細胞未呈現(xiàn)有明顯的致突變作用。
, 百拇醫(yī)藥
體外培育牛黃的劑量為50、150、500mg/kg體重的試驗條件下，對小鼠的骨髓嗜多染紅細胞微核率未引起顯著增加，表明體外培育牛黃未呈現(xiàn)明顯的致突變性作用。
④生殖毒性試驗。
a.對大鼠的一般生殖毒性試驗
在本試驗條件下，體外培育牛黃的劑量高達500mg/kg體重，對大鼠生殖行為和能力、著床數(shù)、著床后胚胎存活數(shù)、活胎仔的生長發(fā)育等方面均未觀察到不良影響。對存活的胎仔亦未見明顯的致畸胎作用。
本試驗條件下，體外培育牛黃對大鼠的生殖行為和能力、著床數(shù)及著床后胚胎存活數(shù)、存活胎仔的生長發(fā)育等方面均未觀察到不良影響；對存活的胎仔亦未見有明顯的致畸作用。
b.體外培育牛黃對大鼠致畸敏感期毒性試驗
, http://www.www.srpcoatings.com
在本試驗條件下，體外培育牛黃劑量高達500mg/kg體重，對大鼠妊娠期的體重，著床后的胚胎存活數(shù)，胎仔的生長發(fā)育均無明顯不良影響，對胎仔也未見有明顯的致畸胎作用。
試驗結果表明，在本試驗條件下，體外培育牛黃對大鼠妊娠期的體重、著床后的胚胎存活數(shù)、胎仔的生長發(fā)育等方面均無明顯的不良影響，對胎仔也未見有明顯的致畸作用。
c.體外培育牛黃對小鼠圍產期生殖毒性試驗
小鼠于妊娠后期及哺乳期受予體外培育牛黃劑量最高達500mg/kg體重，其對小鼠的正常分娩，幼仔出生后成活及哺育成活，幼仔的生長發(fā)育等方面均未見有不良影響作用。
在本試驗條件下，小鼠于妊娠后期及哺乳期受予體外培育牛黃，劑量最高達500mg/kg體重，其對小鼠的正常分娩、幼仔出生后成活及哺育成活、幼仔的生長發(fā)育等方面均未見有不良影響作用，表明體外培育牛黃對小鼠無明顯的圍產期毒性。
記者：能否再介紹一下在食品安全性方面的評價情況？
宋瑞琨教授：我們按食品新資源評價的技術要求，根據《食品安全性毒理學評價程序與方法》(GB15193-94)，判定體外培育牛黃通過食品安全性毒理學一、二階段檢驗。其中小鼠急性毒性實驗表明：體外培育牛黃屬實際無毒物質；遺傳毒性實驗(Ames試驗、小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗、小鼠精子畸形試驗)為陰性；大鼠30天喂養(yǎng)實驗為陰性。因時間有限，詳細情況我就不再作介紹了。⑤, http://www.www.srpcoatings.com(辛 奮)
宋瑞琨教授：我們按國家一類新藥的申報和審批要求進行了安全性評價，主要做了這些研究：急性毒性試驗，小鼠口服LD50為9g/kg，為臨床用量的1800倍，大鼠口服LD50為10g/kg，為臨床用量的2000倍；長期毒性試驗(大鼠、犬)，沒有任何毒副作用；特殊毒理試驗(微生物回復突變試驗、培養(yǎng)細胞染色體畸變試驗、小鼠微核試驗、大鼠的一般生殖毒性試驗、大鼠致畸敏感期毒性試驗、小鼠圍產期生殖毒性試驗)，無致畸、致突變作用。這些研究結果表明，體外培育牛黃的安全性是能夠得到保障的。
記者：能否詳細介紹一下具體的實驗情況？
宋瑞琨教授：好，我先從急性毒性試驗講起。體外培育牛黃按6.55～16.00g/kg劑量予小鼠灌胃給藥，動物出現(xiàn)活動減少，攝食量下降，排黃色軟便，部分動物死亡。死亡動物腸胃空虛，輕度脹氣。存活動物于給藥后1～3天內恢復正常，LD50為9.0(8.0～10.1)g/kg，是臨床用量(0.3g/60kg或5mg/kg)的1800倍。大鼠口服體外培育牛黃的LD50>10g/kg，是臨床用量的2000倍以上。
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從急性毒性試驗結果可以看出，體外培育牛黃給予小鼠和大鼠口服后的急性毒性很低。小鼠口服TPN的LD50為9.0(8.0～10.1)g/kg，是人口服用量(0.3g或5mg/kg)的1800倍(參見表1)。大鼠口服TPN的LD50大于10g/kg，是人口服用量的2000倍以上。
記者：長期毒性實驗的情況如何？
宋瑞琨教授：在長期毒性試驗中，大鼠耐受體外培育牛黃1500mg/kg/天，達35天；犬耐受體外培育牛黃500mg/kg/天，共33天；對大鼠和犬各器官、系統(tǒng)的形態(tài)、結構和功能均無不良影響。用藥組體重增長均高于對照組。各劑量大鼠的血紅蛋白和紅細胞計數(shù)均明顯高于對照組。
在長期毒性試驗中，大鼠耐受TPN1500mg/kg達35天，犬耐受TPN500mg/kg達33天。結果表明TPN長期口服大鼠和犬各系統(tǒng)的形態(tài)、結構和功能無不良影響，而且用藥組動物的體重增長均高于對照組(參見表2)。
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記者：你們做的體外培育牛黃致突變試驗的結果怎樣？
宋瑞琨教授：主要包括以下幾方面的實驗研究：
①微生物回復突變試驗。
體外培育牛黃經用鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100和TA102四個菌株，在摻入量高達10000ug/皿和加S9或不加S9的條件下進行Ames試驗，對各菌株均未有引起回復突變菌落數(shù)超過空白對照自發(fā)突變菌落數(shù)的2倍的情況，表明試驗結果為陰性。
體外培育牛黃在本試驗條件下，從定性的標準和平皿摻入試驗的觀測結果，其對各受試菌株引起的回復突變菌落數(shù)均未超過對照組自發(fā)突變菌落數(shù)的2倍，表明試驗結果為陰性，顯示體外培育牛黃對組氨酸缺陷型沙門氏菌無明顯的致回復突變作用。
②培養(yǎng)細胞染色體畸變試驗。
, http://www.www.srpcoatings.com
體外培育牛黃的劑量分別為1.0、10.0和100ug/ml，對人外周血淋巴細胞染色體畸變進行檢測，各劑量組的淋巴細胞染色體畸變率與對照組比較，均未見明顯增高，表明體外培育牛黃在本試驗條件下，對人外周血淋巴細胞無明顯致畸作用。
在體外培育牛黃的劑量分別為1.0、10.0和100ug/ml的試驗條件下，對人外周血淋巴細胞誘發(fā)的染色體細胞畸變率增加與溶劑對照組比較，均無統(tǒng)計學顯著性差別意義，試驗結果為陰性，表明在試驗條件下，對人外周血淋巴細胞染色體無明顯的致畸變性作用(參見表3)。
③小鼠微核試驗。
體外培育牛黃的劑量為50、150和500mg/kg體重對小鼠進行微核試驗，檢測各劑量組的動物的骨髓嗜多染紅細胞微核率及PCE/RBC比值的結果，與空白對照組比較均無顯著性差異(P>0.05)，表明培育牛黃對小鼠的體細胞未呈現(xiàn)有明顯的致突變作用。
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體外培育牛黃的劑量為50、150、500mg/kg體重的試驗條件下，對小鼠的骨髓嗜多染紅細胞微核率未引起顯著增加，表明體外培育牛黃未呈現(xiàn)明顯的致突變性作用。
④生殖毒性試驗。
a.對大鼠的一般生殖毒性試驗
在本試驗條件下，體外培育牛黃的劑量高達500mg/kg體重，對大鼠生殖行為和能力、著床數(shù)、著床后胚胎存活數(shù)、活胎仔的生長發(fā)育等方面均未觀察到不良影響。對存活的胎仔亦未見明顯的致畸胎作用。
本試驗條件下，體外培育牛黃對大鼠的生殖行為和能力、著床數(shù)及著床后胚胎存活數(shù)、存活胎仔的生長發(fā)育等方面均未觀察到不良影響；對存活的胎仔亦未見有明顯的致畸作用。
b.體外培育牛黃對大鼠致畸敏感期毒性試驗
, http://www.www.srpcoatings.com
在本試驗條件下，體外培育牛黃劑量高達500mg/kg體重，對大鼠妊娠期的體重，著床后的胚胎存活數(shù)，胎仔的生長發(fā)育均無明顯不良影響，對胎仔也未見有明顯的致畸胎作用。
試驗結果表明，在本試驗條件下，體外培育牛黃對大鼠妊娠期的體重、著床后的胚胎存活數(shù)、胎仔的生長發(fā)育等方面均無明顯的不良影響，對胎仔也未見有明顯的致畸作用。
c.體外培育牛黃對小鼠圍產期生殖毒性試驗
小鼠于妊娠后期及哺乳期受予體外培育牛黃劑量最高達500mg/kg體重，其對小鼠的正常分娩，幼仔出生后成活及哺育成活，幼仔的生長發(fā)育等方面均未見有不良影響作用。
在本試驗條件下，小鼠于妊娠后期及哺乳期受予體外培育牛黃，劑量最高達500mg/kg體重，其對小鼠的正常分娩、幼仔出生后成活及哺育成活、幼仔的生長發(fā)育等方面均未見有不良影響作用，表明體外培育牛黃對小鼠無明顯的圍產期毒性。
記者：能否再介紹一下在食品安全性方面的評價情況？
宋瑞琨教授：我們按食品新資源評價的技術要求，根據《食品安全性毒理學評價程序與方法》(GB15193-94)，判定體外培育牛黃通過食品安全性毒理學一、二階段檢驗。其中小鼠急性毒性實驗表明：體外培育牛黃屬實際無毒物質；遺傳毒性實驗(Ames試驗、小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗、小鼠精子畸形試驗)為陰性；大鼠30天喂養(yǎng)實驗為陰性。因時間有限，詳細情況我就不再作介紹了。⑤, http://www.www.srpcoatings.com(辛 奮)
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