EDTA在骨切片制作應(yīng)用中的初步探討
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中華醫(yī)學(xué)研究雜志
【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 B 【文章編號(hào)】 1680-6115(2003)09-0838-02
骨切片標(biāo)本制作技術(shù)的關(guān)鍵在于骨組織的脫鈣，而病理學(xué)骨組織切片的制作在病理學(xué)技術(shù)方面一向難度較大，選用何種脫鈣劑進(jìn)行脫鈣，既不出現(xiàn)破壞其組織結(jié)構(gòu)，又能達(dá)到病理診斷所需要的理想標(biāo)本，故選擇一種理想的脫鈣劑就尤為重要，為此，筆者通過大量實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)酸性脫鈣劑對(duì)骨組織的精細(xì)結(jié)構(gòu)有較大的損傷，堿性染色操作起來也較困難，為解決這方面的難題，作者選用了硝酸、三氯醋酸、甲酸、乙二胺四乙酸(EDTA)四種脫鈣劑進(jìn)行脫鈣對(duì)比實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)EDTA脫鈣后骨組織結(jié)構(gòu)保存完好，是其它脫鈣劑都有所不及的，完全能達(dá)到骨組織診斷的要求，并為骨組織的功能研究及病理學(xué)教學(xué)提供形態(tài)學(xué)標(biāo)本以及提供臨床診斷的依據(jù)。
1 材料與方法
取長(zhǎng)骨組織一段，長(zhǎng)0.3～0.5cm，共計(jì)4塊，經(jīng)10%福爾馬林固定24h后流水沖洗2h，以后分別以5%硝酸、5%三氯醋酸、10%甲酸和15%EDTA脫鈣，脫水，石蠟包埋，切片，再同步進(jìn)行蘇木素—伊紅染色，常規(guī)脫水、透明、封片 [1] 。
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2 結(jié)果
對(duì)比觀察骨外膜、外環(huán)骨板、內(nèi)環(huán)骨板、骨細(xì)胞和骨間板等組織結(jié)構(gòu)清晰。其中以EDTA為脫鈣劑最清晰、完整，制片效果最佳。
3 討論
在制作合格的骨組織切片前，必須先去掉羥基磷灰石(Ca 10 [PO 4 ] 6 [OH] 2 )結(jié)晶，而骨鹽的存在形式主要是羥基磷灰石結(jié)晶 [2] ，骨鹽的無機(jī)成分是骨質(zhì)堅(jiān)硬的原因，組織內(nèi)的鈣質(zhì)是薄切的障礙，不管怎么說預(yù)先將其除去是必需的。脫鈣劑在到達(dá)無機(jī)成份之前，必須通過組織的有機(jī)成份，此過程中，必然會(huì)損壞部分骨組織結(jié)構(gòu)，對(duì)硝酸、三氯醋酸、甲酸、乙二胺四乙酸脫鈣劑行脫鈣骨實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，硝酸、甲酸特點(diǎn)是作用快，染色效果較好，但破壞組織結(jié)構(gòu)，而三氯醋酸，脫鈣時(shí)間較長(zhǎng)，盡管對(duì)組織結(jié)構(gòu)破壞較小，但染色的效果不佳，而EDTA，對(duì)組織結(jié)構(gòu)破壞小，染色效果頗佳。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，用EDTA脫鈣
, 百拇醫(yī)藥
切片后進(jìn)行HE染色方法，能最大限度地減少脫鈣劑對(duì)病理性組織的精細(xì)結(jié)構(gòu)的損傷，結(jié)果令人滿 意，為此，推薦EDTA液作為日
常使用的脫鈣劑。
EDTA是一種很好的脫鈣螯合劑“Versene”(乙二胺四乙酸ethylene diamine tetraacetic acid簡(jiǎn)稱EDTA)，具有與鈣形成可溶性非離子復(fù)合物的性能，脫鈣時(shí)，常配制成中性EDTA液，以NaOH調(diào)到pH7.0，脫鈣時(shí)濕度以不超過30℃為好，螯合作用最佳。按0.3～0.5cm取材，用15%EDTA行脫鈣，2～3天可達(dá)到脫鈣目的。其脫鈣劑的效果，對(duì)組織破壞小，長(zhǎng)期在EDTA液中數(shù)日也不致有明顯破壞，不致影響染色效果，也不使組織產(chǎn)生氣泡破壞，并不破壞酶活性，故可應(yīng)用于組織化學(xué)的研究 [3] ，亦可應(yīng)用于浸銀染色方法的脫鈣前處理，在Schiffer在硫堇骨組織切片染色法 [4] ，Tappen W.C(1965)脫鈣組織塊硝酸銀浸染法的染色效果也較佳。但EDTA因能與鐵、鎂、鉛發(fā)生絡(luò)合，使用時(shí)應(yīng)加注意，在脫鈣時(shí)根據(jù)骨組織的致密程度，決定EDTA的濃度和時(shí)間，在實(shí)驗(yàn)中，人的扁骨15%EDTA液2～3天，長(zhǎng)骨1～2周，新鮮牙齒4～5周，最后脫鈣的結(jié)果，以骨針刺無阻力為度。實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明，制作病理性骨組織切片時(shí)，經(jīng)EDTA液脫鈣的骨組織，其結(jié)構(gòu)清晰，結(jié)果令人滿意，完全能達(dá)到骨組織標(biāo)本的形態(tài)學(xué)教學(xué)以及臨床診斷需要的目的。
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參考文獻(xiàn)
1 熊緒畬.組織學(xué)標(biāo)本制作技術(shù).武漢:湖北醫(yī)學(xué)院出版社，1979，171.
2 鄒仲之.組織學(xué)與胚胎學(xué).第五版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2001，47.
3 劉介眉，嚴(yán)慶漢.病理組織染色的理論方法和應(yīng)用.北京:人民衛(wèi)生出版社，1983，134.
4 龔志錦，詹溶洲.病理組織制片和染色技術(shù).上海:上�？茖W(xué)技術(shù)出版社，1994，288.
作者單位:646000四川瀘州醫(yī)學(xué)院病理教研室
(收稿日期:2003-04-04) (編輯 何蓓), 百拇醫(yī)藥(張莉瓊)
骨切片標(biāo)本制作技術(shù)的關(guān)鍵在于骨組織的脫鈣，而病理學(xué)骨組織切片的制作在病理學(xué)技術(shù)方面一向難度較大，選用何種脫鈣劑進(jìn)行脫鈣，既不出現(xiàn)破壞其組織結(jié)構(gòu)，又能達(dá)到病理診斷所需要的理想標(biāo)本，故選擇一種理想的脫鈣劑就尤為重要，為此，筆者通過大量實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)酸性脫鈣劑對(duì)骨組織的精細(xì)結(jié)構(gòu)有較大的損傷，堿性染色操作起來也較困難，為解決這方面的難題，作者選用了硝酸、三氯醋酸、甲酸、乙二胺四乙酸(EDTA)四種脫鈣劑進(jìn)行脫鈣對(duì)比實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)EDTA脫鈣后骨組織結(jié)構(gòu)保存完好，是其它脫鈣劑都有所不及的，完全能達(dá)到骨組織診斷的要求，并為骨組織的功能研究及病理學(xué)教學(xué)提供形態(tài)學(xué)標(biāo)本以及提供臨床診斷的依據(jù)。
1 材料與方法
取長(zhǎng)骨組織一段，長(zhǎng)0.3～0.5cm，共計(jì)4塊，經(jīng)10%福爾馬林固定24h后流水沖洗2h，以后分別以5%硝酸、5%三氯醋酸、10%甲酸和15%EDTA脫鈣，脫水，石蠟包埋，切片，再同步進(jìn)行蘇木素—伊紅染色，常規(guī)脫水、透明、封片 [1] 。
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2 結(jié)果
對(duì)比觀察骨外膜、外環(huán)骨板、內(nèi)環(huán)骨板、骨細(xì)胞和骨間板等組織結(jié)構(gòu)清晰。其中以EDTA為脫鈣劑最清晰、完整，制片效果最佳。
3 討論
在制作合格的骨組織切片前，必須先去掉羥基磷灰石(Ca 10 [PO 4 ] 6 [OH] 2 )結(jié)晶，而骨鹽的存在形式主要是羥基磷灰石結(jié)晶 [2] ，骨鹽的無機(jī)成分是骨質(zhì)堅(jiān)硬的原因，組織內(nèi)的鈣質(zhì)是薄切的障礙，不管怎么說預(yù)先將其除去是必需的。脫鈣劑在到達(dá)無機(jī)成份之前，必須通過組織的有機(jī)成份，此過程中，必然會(huì)損壞部分骨組織結(jié)構(gòu)，對(duì)硝酸、三氯醋酸、甲酸、乙二胺四乙酸脫鈣劑行脫鈣骨實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，硝酸、甲酸特點(diǎn)是作用快，染色效果較好，但破壞組織結(jié)構(gòu)，而三氯醋酸，脫鈣時(shí)間較長(zhǎng)，盡管對(duì)組織結(jié)構(gòu)破壞較小，但染色的效果不佳，而EDTA，對(duì)組織結(jié)構(gòu)破壞小，染色效果頗佳。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，用EDTA脫鈣
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切片后進(jìn)行HE染色方法，能最大限度地減少脫鈣劑對(duì)病理性組織的精細(xì)結(jié)構(gòu)的損傷，結(jié)果令人滿 意，為此，推薦EDTA液作為日
常使用的脫鈣劑。
EDTA是一種很好的脫鈣螯合劑“Versene”(乙二胺四乙酸ethylene diamine tetraacetic acid簡(jiǎn)稱EDTA)，具有與鈣形成可溶性非離子復(fù)合物的性能，脫鈣時(shí)，常配制成中性EDTA液，以NaOH調(diào)到pH7.0，脫鈣時(shí)濕度以不超過30℃為好，螯合作用最佳。按0.3～0.5cm取材，用15%EDTA行脫鈣，2～3天可達(dá)到脫鈣目的。其脫鈣劑的效果，對(duì)組織破壞小，長(zhǎng)期在EDTA液中數(shù)日也不致有明顯破壞，不致影響染色效果，也不使組織產(chǎn)生氣泡破壞，并不破壞酶活性，故可應(yīng)用于組織化學(xué)的研究 [3] ，亦可應(yīng)用于浸銀染色方法的脫鈣前處理，在Schiffer在硫堇骨組織切片染色法 [4] ，Tappen W.C(1965)脫鈣組織塊硝酸銀浸染法的染色效果也較佳。但EDTA因能與鐵、鎂、鉛發(fā)生絡(luò)合，使用時(shí)應(yīng)加注意，在脫鈣時(shí)根據(jù)骨組織的致密程度，決定EDTA的濃度和時(shí)間，在實(shí)驗(yàn)中，人的扁骨15%EDTA液2～3天，長(zhǎng)骨1～2周，新鮮牙齒4～5周，最后脫鈣的結(jié)果，以骨針刺無阻力為度。實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明，制作病理性骨組織切片時(shí)，經(jīng)EDTA液脫鈣的骨組織，其結(jié)構(gòu)清晰，結(jié)果令人滿意，完全能達(dá)到骨組織標(biāo)本的形態(tài)學(xué)教學(xué)以及臨床診斷需要的目的。
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參考文獻(xiàn)
1 熊緒畬.組織學(xué)標(biāo)本制作技術(shù).武漢:湖北醫(yī)學(xué)院出版社，1979，171.
2 鄒仲之.組織學(xué)與胚胎學(xué).第五版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2001，47.
3 劉介眉，嚴(yán)慶漢.病理組織染色的理論方法和應(yīng)用.北京:人民衛(wèi)生出版社，1983，134.
4 龔志錦，詹溶洲.病理組織制片和染色技術(shù).上海:上�？茖W(xué)技術(shù)出版社，1994，288.
作者單位:646000四川瀘州醫(yī)學(xué)院病理教研室
(收稿日期:2003-04-04) (編輯 何蓓), 百拇醫(yī)藥(張莉瓊)
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