抑凋亡基因bcl-2表達(dá)在子宮內(nèi)膜早期癌變中的意義
http://www.www.srpcoatings.com
中華醫(yī)學(xué)研究雜志 2003年2月 第3卷 第2期
【摘要】 目的 探討抑凋亡基因bcl-2與子宮內(nèi)膜早期癌變的關(guān)系。方法 應(yīng)用免疫組化SP法，原位檢測65例子宮內(nèi)膜不典型增生和30例子宮內(nèi)膜癌中bcl-2基因的表達(dá)。結(jié)果 子宮內(nèi)膜不典型增生bcl-2基因高表達(dá)，子宮內(nèi)膜癌bcl-2基因低表達(dá)(P<0.05)，且在子宮內(nèi)膜不典型增生中，隨病理分級的增加，bcl-2因陽性表達(dá)強(qiáng)度升高。結(jié)論 抑凋亡基因bcl-2參與了細(xì)胞增殖與凋亡的調(diào)控，與細(xì)胞的異常增殖有關(guān)，且主要在子宮內(nèi)膜惡變的早期起作用。
關(guān)鍵詞 凋亡 基因表達(dá) 不典型增生 免疫組織化學(xué)
【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】 A 【文章編號】 1680-6115(2003)02-0116-02
The significance of bcl-2gene expression of
theinitial malignant transformation of endometrial tissues
, 百拇醫(yī)藥
Li Xiangzhou，Zhang Jumin，Liu Ping
Weifang People’s Hospital，Weifang，Shandong261041.
【Abstract】 Objective To investigate the relationship between bcl-2gene andthe initial malignant transforˉmation of endometrial tissues.Methods The bcl-2gene expression were examined in65cases with endometrial atypical hyperplasia and30cases with endometrial carcinoma using immunohistochemical method.Results Bcl-2gene expression was higher in endometrial atypical hyperplasia than that of endometrial carcinoma(P<0.05).The positive rate of bcl-2gene expression rise with progression of pathological stage in endometrial atypical hyperplasia.Conclusion Bcl-2gene may play an important role in cellular proliferation/apoptosis and the initial stage of maligˉnant transformation of endometrial tissues.
, 百拇醫(yī)藥
Key words apoptosis gene expression atypical hyperplasia immunohistochemical
近年來研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞增殖(Cell proliferation)與凋亡(Apoptosis)平衡失調(diào)是導(dǎo)致惡性腫瘤發(fā)生的主要原因。bcl-2作為細(xì)胞凋亡的抑制基因 [1] ，其表達(dá)的異常會引起上述平衡的失調(diào)。我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法，在子宮內(nèi)膜不典型增生和子宮內(nèi)膜癌中進(jìn)行bcl-2基因的原位標(biāo)記，對其在早期癌變中的意義進(jìn)行探討。
1 材料與方法
1.1 一般資料 選擇我院近3年刮宮及手術(shù)切除標(biāo)本蠟塊，子宮內(nèi)膜不典型增生65例，其中輕度15例，中度21例，重度29例，平均年齡46.3歲(31～52歲);子宮內(nèi)膜癌30例，平均年齡51.6歲(33～65歲)。全部標(biāo)本均為10%的中性福爾馬林固定，石蠟包埋。
, http://www.www.srpcoatings.com
1.2 方法 采用免疫組化SP染色法:石蠟包埋組織4μm切片，常規(guī)脫蠟至水，滴加0.3%的H 2 O 2 甲醇液室溫下10min，以封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性;PBS液充分沖洗后，于0.01mol/L的枸櫞酸鈉抗原修復(fù)液內(nèi)(pH6.0)高壓抗原熱修復(fù)3min，自然冷卻;滴加封閉用的正常山羊血清，封閉特殊性抗原抗體反應(yīng)，將血清拋凈不沖洗;依次滴加:一抗工作液4℃過夜;生物素標(biāo)記的通用型二抗工作液室溫孵育15min;標(biāo)記辣根過氧化物酶內(nèi)的三抗(SA-HRP)工作液室溫孵育15min;DAB顯色與光鏡下控制時間。各步驟間均用PBS液充分沖洗。蘇木素復(fù)染，中性樹膠封片。
1.3 試劑 一抗鼠抗人bcl-2單克隆抗體及SP試劑盒均為美國Zymed公司產(chǎn)品，購自北京中山生物技術(shù)有限公司。
1.4 對照 用已知陽性切片作陽性對照，以PBS液代替一抗作陰性對照。
, 百拇醫(yī)藥
1.5 結(jié)果判斷 bcl-2以細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，每張切片隨機(jī)計數(shù)十個高倍視野，按陽性細(xì)胞所占比例記錄:無明顯陽性細(xì)胞為(-)，陽性細(xì)胞數(shù)<25%為(+)，25%～50%為(++)，>50%為(+++)(細(xì)胞計數(shù)應(yīng)用四川大學(xué)圖像中心彩色病理圖像分析軟件)。
1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 bcl-2基因表達(dá)病變組間比較采用X 2 檢驗。
2 結(jié)果
子宮內(nèi)膜不典型增生和癌中抑凋亡基因bcl-2蛋白表達(dá)情況見表1。表1 bcl-2基因在子宮內(nèi)膜不典型增生和癌中的表達(dá)在65例子宮內(nèi)膜不典型增生中bcl-2基因蛋白33例呈中→強(qiáng)陽性表達(dá)，20例呈陽性，12例呈陰性表達(dá)，總陽性表達(dá)率為81.54%(53/65)。其中輕度子宮內(nèi)膜不典型增生陽性率為40%(6/15)，中度為85.7%(18/21)，重度為100%(29/29)，表現(xiàn)為陽性率隨病理分級的增加而上升。在30例子宮內(nèi)膜癌中，bcl-2基因蛋白中→強(qiáng)陽性表達(dá)8例，陽性3例，陰性19例，總陽性率為36.67%(11/30)，明顯低于子宮內(nèi)膜不典型增生(X 2 =4.139，P<0.05)。
, 百拇醫(yī)藥
3 討論
性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展是由多因素影響、多基因調(diào)控的復(fù)雜過程，其中參與細(xì)胞增殖與凋亡平衡調(diào)控的基因的突變及表達(dá)異常，是導(dǎo)致惡性腫瘤發(fā)生的主要原因。bcl-2是一種抑制細(xì)胞凋亡的基因，首先在B細(xì)胞相關(guān)的惡性淋巴瘤中發(fā)現(xiàn)。近年來在結(jié)腸癌、乳腺癌及膽囊腺癌等上皮性腫瘤中也檢測到該基因的表達(dá) [2] 。我們研究結(jié)果表明:bcl-2基因蛋白在子宮內(nèi)膜不典型增生中的陽性表達(dá)隨病理分級的增高而呈上升趨勢。在重度不典型增生中，其陽性表達(dá)率和表達(dá)強(qiáng)度達(dá)到最高，提示細(xì)胞凋亡抑制的增強(qiáng)，導(dǎo)致了細(xì)胞凋亡的減少或不凋亡，使其出現(xiàn)了細(xì)胞的異常增殖。而在子宮內(nèi)膜癌中，bcl-2的陽性表達(dá)率較不典型增生明顯降低(P<0.05)，與莊小強(qiáng)等 [3] 在大腸腫瘤中的表達(dá)結(jié)果相近，僅有的少數(shù)(3例)強(qiáng)陽性表達(dá)病例，其組織形態(tài)學(xué)上均為高分化的腺癌，表明高分化的或早期的子宮內(nèi)膜腺癌與重度不典型增生中的部分病例bcl-2基因表達(dá)狀況相近。
對于bcl-2基因抑制細(xì)胞凋亡的機(jī)制，Korsmeyer SJ [4] 認(rèn)為可能是通過防止受損的DNA翻譯成參與細(xì)胞凋亡基因的信號或通過阻止這些基因產(chǎn)物的表達(dá)，從而顯著阻止 或減少由各種刺激引起的細(xì)胞殺傷，在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。同時bcl-2基因受許多調(diào)控因子的調(diào)控，其中最主要的是凋亡基因bax [1] ，它可與bcl-2基因形成bcl-2-bax異源二聚體，使其喪失抑凋亡功能。
, http://www.www.srpcoatings.com
本項研究中，子宮內(nèi)膜不典型增生從輕度到重度表現(xiàn)為細(xì)胞增生的逐漸活躍，bcl-2基因的陽性表達(dá)率及強(qiáng)度也逐漸升高，二者呈正相關(guān)，而在腺癌中bcl-2的表達(dá)率及強(qiáng)度卻明顯下降，表明該基因自細(xì)胞異常增殖的早期即開始參與，到重度不典型增生及早期癌變中達(dá)到高峰，而隨著細(xì)胞生物學(xué)行為的進(jìn)一步惡化，bcl-2基因不再起重要作用。
參考文獻(xiàn)
1 Levine B，Huang Q，Isaacs T，et al.Conversion of lytic to persistent alˉphavirus infection by the bcl-2cellular oncogene.Nature，1993，361:739-742.
2 姚宏，武群英，趙瑪麗，等.bcl-2和P16蛋白在膽囊粘膜上皮異形增生和膽囊腺癌中的表達(dá).中華病理學(xué)雜志，1999，2:134-135.
3 莊小強(qiáng)，袁世珍，王曉懷，等.大腸腫瘤中抑凋亡基因bcl-2和P53蛋白產(chǎn)物的表達(dá)和意義.臨床與實驗病理學(xué)雜志，1996，12:23-26.
4 Korsmeyer SJ.Bcl-2initiates a new category of oncogenes:regulators of calldeath.Blood，1992，80:879-886.
(收稿日期:2002-10-19)
作者單位:261041山東省濰坊市人民醫(yī)院
(編輯于少偉), 百拇醫(yī)藥(李湘洲)
關(guān)鍵詞 凋亡 基因表達(dá) 不典型增生 免疫組織化學(xué)
【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】 A 【文章編號】 1680-6115(2003)02-0116-02
The significance of bcl-2gene expression of
theinitial malignant transformation of endometrial tissues
, 百拇醫(yī)藥
Li Xiangzhou，Zhang Jumin，Liu Ping
Weifang People’s Hospital，Weifang，Shandong261041.
【Abstract】 Objective To investigate the relationship between bcl-2gene andthe initial malignant transforˉmation of endometrial tissues.Methods The bcl-2gene expression were examined in65cases with endometrial atypical hyperplasia and30cases with endometrial carcinoma using immunohistochemical method.Results Bcl-2gene expression was higher in endometrial atypical hyperplasia than that of endometrial carcinoma(P<0.05).The positive rate of bcl-2gene expression rise with progression of pathological stage in endometrial atypical hyperplasia.Conclusion Bcl-2gene may play an important role in cellular proliferation/apoptosis and the initial stage of maligˉnant transformation of endometrial tissues.
, 百拇醫(yī)藥
Key words apoptosis gene expression atypical hyperplasia immunohistochemical
近年來研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞增殖(Cell proliferation)與凋亡(Apoptosis)平衡失調(diào)是導(dǎo)致惡性腫瘤發(fā)生的主要原因。bcl-2作為細(xì)胞凋亡的抑制基因 [1] ，其表達(dá)的異常會引起上述平衡的失調(diào)。我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法，在子宮內(nèi)膜不典型增生和子宮內(nèi)膜癌中進(jìn)行bcl-2基因的原位標(biāo)記，對其在早期癌變中的意義進(jìn)行探討。
1 材料與方法
1.1 一般資料 選擇我院近3年刮宮及手術(shù)切除標(biāo)本蠟塊，子宮內(nèi)膜不典型增生65例，其中輕度15例，中度21例，重度29例，平均年齡46.3歲(31～52歲);子宮內(nèi)膜癌30例，平均年齡51.6歲(33～65歲)。全部標(biāo)本均為10%的中性福爾馬林固定，石蠟包埋。
, http://www.www.srpcoatings.com
1.2 方法 采用免疫組化SP染色法:石蠟包埋組織4μm切片，常規(guī)脫蠟至水，滴加0.3%的H 2 O 2 甲醇液室溫下10min，以封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性;PBS液充分沖洗后，于0.01mol/L的枸櫞酸鈉抗原修復(fù)液內(nèi)(pH6.0)高壓抗原熱修復(fù)3min，自然冷卻;滴加封閉用的正常山羊血清，封閉特殊性抗原抗體反應(yīng)，將血清拋凈不沖洗;依次滴加:一抗工作液4℃過夜;生物素標(biāo)記的通用型二抗工作液室溫孵育15min;標(biāo)記辣根過氧化物酶內(nèi)的三抗(SA-HRP)工作液室溫孵育15min;DAB顯色與光鏡下控制時間。各步驟間均用PBS液充分沖洗。蘇木素復(fù)染，中性樹膠封片。
1.3 試劑 一抗鼠抗人bcl-2單克隆抗體及SP試劑盒均為美國Zymed公司產(chǎn)品，購自北京中山生物技術(shù)有限公司。
1.4 對照 用已知陽性切片作陽性對照，以PBS液代替一抗作陰性對照。
, 百拇醫(yī)藥
1.5 結(jié)果判斷 bcl-2以細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，每張切片隨機(jī)計數(shù)十個高倍視野，按陽性細(xì)胞所占比例記錄:無明顯陽性細(xì)胞為(-)，陽性細(xì)胞數(shù)<25%為(+)，25%～50%為(++)，>50%為(+++)(細(xì)胞計數(shù)應(yīng)用四川大學(xué)圖像中心彩色病理圖像分析軟件)。
1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 bcl-2基因表達(dá)病變組間比較采用X 2 檢驗。
2 結(jié)果
子宮內(nèi)膜不典型增生和癌中抑凋亡基因bcl-2蛋白表達(dá)情況見表1。表1 bcl-2基因在子宮內(nèi)膜不典型增生和癌中的表達(dá)在65例子宮內(nèi)膜不典型增生中bcl-2基因蛋白33例呈中→強(qiáng)陽性表達(dá)，20例呈陽性，12例呈陰性表達(dá)，總陽性表達(dá)率為81.54%(53/65)。其中輕度子宮內(nèi)膜不典型增生陽性率為40%(6/15)，中度為85.7%(18/21)，重度為100%(29/29)，表現(xiàn)為陽性率隨病理分級的增加而上升。在30例子宮內(nèi)膜癌中，bcl-2基因蛋白中→強(qiáng)陽性表達(dá)8例，陽性3例，陰性19例，總陽性率為36.67%(11/30)，明顯低于子宮內(nèi)膜不典型增生(X 2 =4.139，P<0.05)。
, 百拇醫(yī)藥
3 討論
性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展是由多因素影響、多基因調(diào)控的復(fù)雜過程，其中參與細(xì)胞增殖與凋亡平衡調(diào)控的基因的突變及表達(dá)異常，是導(dǎo)致惡性腫瘤發(fā)生的主要原因。bcl-2是一種抑制細(xì)胞凋亡的基因，首先在B細(xì)胞相關(guān)的惡性淋巴瘤中發(fā)現(xiàn)。近年來在結(jié)腸癌、乳腺癌及膽囊腺癌等上皮性腫瘤中也檢測到該基因的表達(dá) [2] 。我們研究結(jié)果表明:bcl-2基因蛋白在子宮內(nèi)膜不典型增生中的陽性表達(dá)隨病理分級的增高而呈上升趨勢。在重度不典型增生中，其陽性表達(dá)率和表達(dá)強(qiáng)度達(dá)到最高，提示細(xì)胞凋亡抑制的增強(qiáng)，導(dǎo)致了細(xì)胞凋亡的減少或不凋亡，使其出現(xiàn)了細(xì)胞的異常增殖。而在子宮內(nèi)膜癌中，bcl-2的陽性表達(dá)率較不典型增生明顯降低(P<0.05)，與莊小強(qiáng)等 [3] 在大腸腫瘤中的表達(dá)結(jié)果相近，僅有的少數(shù)(3例)強(qiáng)陽性表達(dá)病例，其組織形態(tài)學(xué)上均為高分化的腺癌，表明高分化的或早期的子宮內(nèi)膜腺癌與重度不典型增生中的部分病例bcl-2基因表達(dá)狀況相近。
對于bcl-2基因抑制細(xì)胞凋亡的機(jī)制，Korsmeyer SJ [4] 認(rèn)為可能是通過防止受損的DNA翻譯成參與細(xì)胞凋亡基因的信號或通過阻止這些基因產(chǎn)物的表達(dá)，從而顯著阻止 或減少由各種刺激引起的細(xì)胞殺傷，在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。同時bcl-2基因受許多調(diào)控因子的調(diào)控，其中最主要的是凋亡基因bax [1] ，它可與bcl-2基因形成bcl-2-bax異源二聚體，使其喪失抑凋亡功能。
, http://www.www.srpcoatings.com
本項研究中，子宮內(nèi)膜不典型增生從輕度到重度表現(xiàn)為細(xì)胞增生的逐漸活躍，bcl-2基因的陽性表達(dá)率及強(qiáng)度也逐漸升高，二者呈正相關(guān)，而在腺癌中bcl-2的表達(dá)率及強(qiáng)度卻明顯下降，表明該基因自細(xì)胞異常增殖的早期即開始參與，到重度不典型增生及早期癌變中達(dá)到高峰，而隨著細(xì)胞生物學(xué)行為的進(jìn)一步惡化，bcl-2基因不再起重要作用。
參考文獻(xiàn)
1 Levine B，Huang Q，Isaacs T，et al.Conversion of lytic to persistent alˉphavirus infection by the bcl-2cellular oncogene.Nature，1993，361:739-742.
2 姚宏，武群英，趙瑪麗，等.bcl-2和P16蛋白在膽囊粘膜上皮異形增生和膽囊腺癌中的表達(dá).中華病理學(xué)雜志，1999，2:134-135.
3 莊小強(qiáng)，袁世珍，王曉懷，等.大腸腫瘤中抑凋亡基因bcl-2和P53蛋白產(chǎn)物的表達(dá)和意義.臨床與實驗病理學(xué)雜志，1996，12:23-26.
4 Korsmeyer SJ.Bcl-2initiates a new category of oncogenes:regulators of calldeath.Blood，1992，80:879-886.
(收稿日期:2002-10-19)
作者單位:261041山東省濰坊市人民醫(yī)院
(編輯于少偉), 百拇醫(yī)藥(李湘洲)
百拇醫(yī)藥網(wǎng) http://www.www.srpcoatings.com/html/Dir/2004/05/10/40/24/23.htm