散發(fā)性結(jié)直腸癌22號(hào)染色體微衛(wèi)星不穩(wěn)定性研究
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中華醫(yī)學(xué)研究雜志 2003年4月 第3卷 第4期
【摘要】 目的 研究微衛(wèi)星不穩(wěn)定在散發(fā)性結(jié)直腸癌發(fā)生中的作用。方法 用5個(gè)微衛(wèi)星DNA標(biāo)記對(duì)83例結(jié)直腸癌病例的腫瘤及正常組織進(jìn)行PCR反應(yīng)。PCR產(chǎn)物在ABI Prism377自動(dòng)熒光測(cè)序儀電泳3h，以GeneScan3.1和Genotyper2.1軟件進(jìn)行基因分型。微衛(wèi)星不穩(wěn)定性與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系比較采用樣本率差別統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果 83例散發(fā)性結(jié)直腸癌在22號(hào)染色體上微衛(wèi)星不穩(wěn)定檢出率為6%。4例標(biāo)本表現(xiàn)為低頻微衛(wèi)星不穩(wěn)定型，1例表現(xiàn)為高頻微衛(wèi)星不穩(wěn)定型。其中的5例微衛(wèi)星不穩(wěn)定病例，腫瘤均位于近端結(jié)腸，體積較大(直徑≥5cm)(P<0.05)，屬于Dukes B，C期，3例為中分化腺癌，1例低分化腺癌，1例粘液腺腺癌，均與年齡、性別無(wú)關(guān)。結(jié)論 散發(fā)性結(jié)直腸癌在22號(hào)染色體上微衛(wèi)星不穩(wěn)定的發(fā)生率低于以往的報(bào)道，微衛(wèi)星不穩(wěn)定發(fā)生在結(jié)直腸癌的中晚期。
關(guān)鍵詞 微衛(wèi)星不穩(wěn)定性22號(hào)染色體 散發(fā)性結(jié)直腸癌 基因定位
【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A 【文章編號(hào)】 1680-6115(2003)04-0289-03
, 百拇醫(yī)藥
Microsatellite instability on chromosome22in sporadic colorectal cancer
Qiu Guoqiang，Zhou Chongzhi，Peng Zhihai
Department of General Surgery，Shanghai No.1People’s Hospital，Shanghai200080.
【Abstract】 Objective To evaluate the role of microsatellite instability(MSI)in the carcinogenesis of spoˉradic colorectal cancer.Methods 83cases with colorectal cancer were analyzed with5polymorphic microsatellite markers by polymerase chain reactions(PCR).The products of PCR were electrophoresed for3hours on ABI377DNA sequencer and classified by Genescan3.1and Genotyper2.1softwares.MSIfrequency were compared to clinicoˉpathological parameters of the patients by sample rate test.Results MSI frequency of sporadic colorectal cancerous chromosome22was6.0%in83cases.4cases behaved low frequency MSI and1case high frequency MSIamong them.5cases with MSI were proximal colonic cancer，belonging to Dukes B or Dukes C stage，large size tumors(diamˉeter≥5cm)(P<0.05)and poorly differentiated mucous adenocarcinoma.There was no correlation between MSI and patients’age or gender in these cases.Conclusion MSI detected in this study was lower than that in previous obserˉvations.MSI was considered as the latter event in the carcinogenesis of colorectal cancer.
, 百拇醫(yī)藥
Key words microsatellite instabillity chromosome22 sporadic colorectal cancer gene-mapping
結(jié)直腸癌的發(fā)生是一個(gè)涉及多基因、多途徑的過(guò)程，被認(rèn)為是多個(gè)控制生長(zhǎng)和分化位點(diǎn)基因突變累積的結(jié)果。1993年結(jié)直腸癌中發(fā)現(xiàn)的微衛(wèi)星不穩(wěn)定現(xiàn)象(Microsatellite Instability，MSI)以及其和遺傳性非息肉性結(jié)直腸癌(Herediˉtary Non-polyposis Colorectal Cancer，HNPCC)的關(guān)系為研究結(jié)直腸癌的形成和發(fā)展的機(jī)制提供了新的方法。HNPCC占結(jié)直腸癌的5%，其主要基因的不穩(wěn)定是在進(jìn)行雜合缺失分析時(shí)發(fā)現(xiàn)為微衛(wèi)星不穩(wěn)定。在過(guò)去的幾年中對(duì)于MSI這一獨(dú)特的基因不穩(wěn)定形式的研究不再局限于HNPCC，而擴(kuò)展到其他腫瘤。目前在散發(fā)性(非遺傳性)結(jié)直腸癌中也發(fā)現(xiàn)存在MSI現(xiàn)象 [1，2] 。22號(hào)染色體長(zhǎng)臂上明顯的等位基因缺失現(xiàn)象早在1989年就已發(fā)現(xiàn)，認(rèn)為有抑癌基因存在 [3] ，但與其它染色體不同的是，至今沒(méi)有發(fā)現(xiàn)與結(jié)直腸癌肯定相關(guān)的抑癌基因。我們已對(duì)22號(hào)染色體雜合缺失現(xiàn)象進(jìn)行了分析 [4] ，同時(shí)我們分析微衛(wèi)星不穩(wěn)定現(xiàn)象，試圖從另一角度闡明22號(hào)染色體基因不穩(wěn)定與結(jié)直腸癌發(fā)生的關(guān)系。我們課題選用(GeneAmp9700，Perkin-Elmer，USA)公司提供的熒光標(biāo)記引物試劑盒，共有400對(duì)引物，覆蓋人類23對(duì)染色體，在22號(hào)染色體長(zhǎng)臂上主要有5對(duì)。我們采用22號(hào)染色體5個(gè)微衛(wèi)星DNA標(biāo)記對(duì)散發(fā)性結(jié)直腸癌中的微衛(wèi)星不穩(wěn)定現(xiàn)象進(jìn)行分析，并研究其臨床特征。
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1 對(duì)象與方法
1.1 研究對(duì)象 為本院1998～1999年間結(jié)直腸癌外科手術(shù)患者，共83例，其中男40例，女43例，年齡為31～84歲，中位年齡66歲。所有病例均經(jīng)病理證實(shí)。依據(jù)Dukes標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期，A期8例，B期21例，C期40例，D期14例。高分化腺癌23例，中分化39例，低分化、粘液腺癌共21例。腫瘤組織病理分級(jí)及分型依據(jù)WHO標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。
1.2 DNA抽提 所有病例均于術(shù)后半小時(shí)內(nèi)取新鮮癌組織(避開(kāi)壞死區(qū)域，并去除鄰近正常組織)和對(duì)應(yīng)正常粘膜組織(距腫瘤邊緣5cm以上)-液氮冷藏后轉(zhuǎn)-70℃凍存。標(biāo)準(zhǔn)酚-氯仿法進(jìn)行DNA抽提，乙醇沉淀。
1.3 微衛(wèi)星標(biāo)記及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 5對(duì)熒光標(biāo)記引物基本覆蓋22號(hào)染色體長(zhǎng)臂5個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記(表1)，每對(duì)引物之間距離平均約為8cm。不同熒光標(biāo)記及不同片段長(zhǎng)度的微衛(wèi)星標(biāo)記引物分3組進(jìn)行多重PCR反應(yīng)。反應(yīng)體系為5μl，1.4ng DNA模板，1.5mol/L Mg 2+ ，80mol/L dNTP，0.3U Iot-StartTaq酶(QIAGENE，Germany)每對(duì)引物0.06μl。反應(yīng)采用“touch-down”反應(yīng)程序，如下:Ⅰ階段，96℃，12min，94℃，20s，63℃～56℃(每個(gè)循環(huán)降低0.5℃)，1min，72℃，1min，共14個(gè)循環(huán);Ⅱ階段，94℃，20s，56℃，1min，72℃，1min，共20個(gè)循環(huán)(GeneAmp9700，Perkin-Elmer，USA)。
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表1 22號(hào)染色體長(zhǎng)臂5個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)
1.4 微衛(wèi)星不穩(wěn)定分析 0.5μl PCR產(chǎn)物和0.1μl基因掃描標(biāo)準(zhǔn)分子量Genescan500及0/9μl加樣緩沖液混合后96℃變性5min，其產(chǎn)物在ABI Prism377自動(dòng)熒光測(cè)序儀(P-E Applied Biosystem，USA)上用5%丙烯酰胺凝膠電泳3h，以GeneScan3.1軟件(P-E Applied Biosystem，USA)進(jìn)行基因分型，Genotyper2.1軟件(P-E Applied Biosystem，USA)對(duì)于所有可檢測(cè)到的熒光峰型均標(biāo)示其分子量、峰高、峰面積。 若腫瘤組織DNA出現(xiàn)正常對(duì)照中未見(jiàn)的異常峰型，則該病例被視為微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI) [5] 。在分析的5個(gè)位點(diǎn)中，2個(gè)以上位點(diǎn)發(fā)生微衛(wèi)星不穩(wěn)定視為高頻微衛(wèi)星不穩(wěn)定型，1個(gè)位點(diǎn)發(fā)生微衛(wèi)星不穩(wěn)定視為低頻微衛(wèi)星不穩(wěn)定型。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 MSI與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系比較采用樣本率差別統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，P<0.05為差異有顯著性。
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2 結(jié)果
2.1 MSI的發(fā)生率 83例結(jié)直腸癌標(biāo)本，共4例標(biāo)本表現(xiàn)為低頻微衛(wèi)星不穩(wěn)定型，1例表現(xiàn)為高頻微衛(wèi)星不穩(wěn)定型，微衛(wèi)星不穩(wěn)定病例占6%，在表現(xiàn)微衛(wèi)星不穩(wěn)定的微衛(wèi)星DNA標(biāo)記位點(diǎn)上均未發(fā)生雜合缺失。
2.2 MSI與臨床病理特征之間的關(guān)系 5例微衛(wèi)星不穩(wěn)定病例，均位于近端結(jié)腸。遠(yuǎn)端結(jié)腸、直腸癌中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)微衛(wèi)星不穩(wěn)定現(xiàn)象，其微衛(wèi)星不穩(wěn)定發(fā)生率低于近端結(jié)腸癌，差異有顯著性意義(P<0.05)。微衛(wèi)星不穩(wěn)定現(xiàn)象在體積較大腫瘤(直徑≥5cm)高于體積較小腫瘤，其發(fā)生率差異有顯著性意義(P<0.05)，屬于Dukes B，C期，3例為中分化腺癌、1例低分化腺癌、1例粘液腺腺癌，均與年齡、性別無(wú)關(guān)，見(jiàn)表2。
表2 5例微衛(wèi)星不穩(wěn)定發(fā)生位點(diǎn)和臨床病理特征
3 討論
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微衛(wèi)星DNA標(biāo)記是一類短重復(fù)DNA序列，這一類DNA序列沒(méi)有編碼功能，由10～50個(gè)小序列重復(fù)組成，重復(fù)序列可為1～6個(gè)堿基，常見(jiàn)為雙核苷酸重復(fù)。微衛(wèi)星DNA標(biāo)記廣泛、隨機(jī)分布于人類基因組中。而在與同一個(gè)體的正常組織比較下，腫瘤組織內(nèi)微衛(wèi)星重復(fù)單位可以發(fā)生增多或減少而造成長(zhǎng)度改變，從而在同一位點(diǎn)上出現(xiàn)不同于正常組織的等位片斷即稱為微衛(wèi)星不穩(wěn)定，它是由DNA錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)在DNA復(fù)制過(guò)程中不能修復(fù)復(fù)制錯(cuò)誤所致。目前認(rèn)為微衛(wèi)星不穩(wěn)定和抑癌基因的雜合缺失呈負(fù)相關(guān)。微衛(wèi)星不穩(wěn)定型結(jié)直腸癌主要是近端結(jié)腸癌，分化較差，腫瘤較大 [6，7] ，和年齡、性別無(wú)關(guān) [8] 。我們的結(jié)果與之相符。5例微衛(wèi)星不穩(wěn)定型病人均在近端結(jié)腸，體積較大(直徑≥5cm)，3例為中分化腺癌，1例低分化腺癌，1例粘液腺腺癌，與性別、年齡無(wú)關(guān)，發(fā)生在Dukes B、C期。在發(fā)生不穩(wěn)定的微衛(wèi)星DNA標(biāo)記位點(diǎn)上均未發(fā)現(xiàn)雜合缺失現(xiàn)象 [4] 。有研究表明微衛(wèi)星不穩(wěn)定是結(jié)直腸癌發(fā)生過(guò)程中的早期現(xiàn)象 [9] ，而有些研究則認(rèn)為其發(fā)生在結(jié)直腸癌發(fā)展過(guò)程的中晚期 [10] ，本研究提示微衛(wèi)星不穩(wěn)定主要存在于Dukes B、C期，支持后一種觀點(diǎn)。
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本研究的微衛(wèi)星不穩(wěn)定型病例僅為6%，與其它研究報(bào)道的12%～15%發(fā)生率不同，原因可能是:(1)由于微衛(wèi) 星不穩(wěn)定和雜合缺失是結(jié)直腸癌發(fā)生的不同機(jī)制，在以往我們的報(bào)道中22號(hào)染色體長(zhǎng)臂表現(xiàn)為明顯的雜合缺失現(xiàn)象 [4]，所以在22號(hào)染色體上的基因不穩(wěn)定主要表現(xiàn)為雜合缺失而不是微衛(wèi)星不穩(wěn)定。(2)12%～15%這一發(fā)生率主要由西方學(xué)者報(bào)道，可能東西方人群種族及地理環(huán)境不同所致。(3)所選擇微衛(wèi)星的數(shù)目和位點(diǎn)不同。
本研究提示基因不穩(wěn)定在散發(fā)性結(jié)直腸癌發(fā)生過(guò)程中的作用涉及兩種途徑，一為發(fā)生在染色體水平，即雜合缺失(Loss Of Heterozygosity，LOH)，二為發(fā)生于核苷酸水平，即微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI)。散發(fā)性結(jié)直腸癌病例在22號(hào)染色體上，基因不穩(wěn)定主要表現(xiàn)為雜合缺失，但微衛(wèi)星不穩(wěn)定在結(jié)直腸癌發(fā)生過(guò)程中也起著一定作用。
參考文獻(xiàn)
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基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào):30080016)
作者單位:200080上海第一人民醫(yī)院普通外科
(收稿日期:2002-11-28)
(編輯張 璇), 百拇醫(yī)藥(裘國(guó)強(qiáng))
關(guān)鍵詞 微衛(wèi)星不穩(wěn)定性22號(hào)染色體 散發(fā)性結(jié)直腸癌 基因定位
【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A 【文章編號(hào)】 1680-6115(2003)04-0289-03
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Microsatellite instability on chromosome22in sporadic colorectal cancer
Qiu Guoqiang，Zhou Chongzhi，Peng Zhihai
Department of General Surgery，Shanghai No.1People’s Hospital，Shanghai200080.
【Abstract】 Objective To evaluate the role of microsatellite instability(MSI)in the carcinogenesis of spoˉradic colorectal cancer.Methods 83cases with colorectal cancer were analyzed with5polymorphic microsatellite markers by polymerase chain reactions(PCR).The products of PCR were electrophoresed for3hours on ABI377DNA sequencer and classified by Genescan3.1and Genotyper2.1softwares.MSIfrequency were compared to clinicoˉpathological parameters of the patients by sample rate test.Results MSI frequency of sporadic colorectal cancerous chromosome22was6.0%in83cases.4cases behaved low frequency MSI and1case high frequency MSIamong them.5cases with MSI were proximal colonic cancer，belonging to Dukes B or Dukes C stage，large size tumors(diamˉeter≥5cm)(P<0.05)and poorly differentiated mucous adenocarcinoma.There was no correlation between MSI and patients’age or gender in these cases.Conclusion MSI detected in this study was lower than that in previous obserˉvations.MSI was considered as the latter event in the carcinogenesis of colorectal cancer.
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Key words microsatellite instabillity chromosome22 sporadic colorectal cancer gene-mapping
結(jié)直腸癌的發(fā)生是一個(gè)涉及多基因、多途徑的過(guò)程，被認(rèn)為是多個(gè)控制生長(zhǎng)和分化位點(diǎn)基因突變累積的結(jié)果。1993年結(jié)直腸癌中發(fā)現(xiàn)的微衛(wèi)星不穩(wěn)定現(xiàn)象(Microsatellite Instability，MSI)以及其和遺傳性非息肉性結(jié)直腸癌(Herediˉtary Non-polyposis Colorectal Cancer，HNPCC)的關(guān)系為研究結(jié)直腸癌的形成和發(fā)展的機(jī)制提供了新的方法。HNPCC占結(jié)直腸癌的5%，其主要基因的不穩(wěn)定是在進(jìn)行雜合缺失分析時(shí)發(fā)現(xiàn)為微衛(wèi)星不穩(wěn)定。在過(guò)去的幾年中對(duì)于MSI這一獨(dú)特的基因不穩(wěn)定形式的研究不再局限于HNPCC，而擴(kuò)展到其他腫瘤。目前在散發(fā)性(非遺傳性)結(jié)直腸癌中也發(fā)現(xiàn)存在MSI現(xiàn)象 [1，2] 。22號(hào)染色體長(zhǎng)臂上明顯的等位基因缺失現(xiàn)象早在1989年就已發(fā)現(xiàn)，認(rèn)為有抑癌基因存在 [3] ，但與其它染色體不同的是，至今沒(méi)有發(fā)現(xiàn)與結(jié)直腸癌肯定相關(guān)的抑癌基因。我們已對(duì)22號(hào)染色體雜合缺失現(xiàn)象進(jìn)行了分析 [4] ，同時(shí)我們分析微衛(wèi)星不穩(wěn)定現(xiàn)象，試圖從另一角度闡明22號(hào)染色體基因不穩(wěn)定與結(jié)直腸癌發(fā)生的關(guān)系。我們課題選用(GeneAmp9700，Perkin-Elmer，USA)公司提供的熒光標(biāo)記引物試劑盒，共有400對(duì)引物，覆蓋人類23對(duì)染色體，在22號(hào)染色體長(zhǎng)臂上主要有5對(duì)。我們采用22號(hào)染色體5個(gè)微衛(wèi)星DNA標(biāo)記對(duì)散發(fā)性結(jié)直腸癌中的微衛(wèi)星不穩(wěn)定現(xiàn)象進(jìn)行分析，并研究其臨床特征。
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1 對(duì)象與方法
1.1 研究對(duì)象 為本院1998～1999年間結(jié)直腸癌外科手術(shù)患者，共83例，其中男40例，女43例，年齡為31～84歲，中位年齡66歲。所有病例均經(jīng)病理證實(shí)。依據(jù)Dukes標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期，A期8例，B期21例，C期40例，D期14例。高分化腺癌23例，中分化39例，低分化、粘液腺癌共21例。腫瘤組織病理分級(jí)及分型依據(jù)WHO標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。
1.2 DNA抽提 所有病例均于術(shù)后半小時(shí)內(nèi)取新鮮癌組織(避開(kāi)壞死區(qū)域，并去除鄰近正常組織)和對(duì)應(yīng)正常粘膜組織(距腫瘤邊緣5cm以上)-液氮冷藏后轉(zhuǎn)-70℃凍存。標(biāo)準(zhǔn)酚-氯仿法進(jìn)行DNA抽提，乙醇沉淀。
1.3 微衛(wèi)星標(biāo)記及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 5對(duì)熒光標(biāo)記引物基本覆蓋22號(hào)染色體長(zhǎng)臂5個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記(表1)，每對(duì)引物之間距離平均約為8cm。不同熒光標(biāo)記及不同片段長(zhǎng)度的微衛(wèi)星標(biāo)記引物分3組進(jìn)行多重PCR反應(yīng)。反應(yīng)體系為5μl，1.4ng DNA模板，1.5mol/L Mg 2+ ，80mol/L dNTP，0.3U Iot-StartTaq酶(QIAGENE，Germany)每對(duì)引物0.06μl。反應(yīng)采用“touch-down”反應(yīng)程序，如下:Ⅰ階段，96℃，12min，94℃，20s，63℃～56℃(每個(gè)循環(huán)降低0.5℃)，1min，72℃，1min，共14個(gè)循環(huán);Ⅱ階段，94℃，20s，56℃，1min，72℃，1min，共20個(gè)循環(huán)(GeneAmp9700，Perkin-Elmer，USA)。
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表1 22號(hào)染色體長(zhǎng)臂5個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)
1.4 微衛(wèi)星不穩(wěn)定分析 0.5μl PCR產(chǎn)物和0.1μl基因掃描標(biāo)準(zhǔn)分子量Genescan500及0/9μl加樣緩沖液混合后96℃變性5min，其產(chǎn)物在ABI Prism377自動(dòng)熒光測(cè)序儀(P-E Applied Biosystem，USA)上用5%丙烯酰胺凝膠電泳3h，以GeneScan3.1軟件(P-E Applied Biosystem，USA)進(jìn)行基因分型，Genotyper2.1軟件(P-E Applied Biosystem，USA)對(duì)于所有可檢測(cè)到的熒光峰型均標(biāo)示其分子量、峰高、峰面積。 若腫瘤組織DNA出現(xiàn)正常對(duì)照中未見(jiàn)的異常峰型，則該病例被視為微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI) [5] 。在分析的5個(gè)位點(diǎn)中，2個(gè)以上位點(diǎn)發(fā)生微衛(wèi)星不穩(wěn)定視為高頻微衛(wèi)星不穩(wěn)定型，1個(gè)位點(diǎn)發(fā)生微衛(wèi)星不穩(wěn)定視為低頻微衛(wèi)星不穩(wěn)定型。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 MSI與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系比較采用樣本率差別統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，P<0.05為差異有顯著性。
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2 結(jié)果
2.1 MSI的發(fā)生率 83例結(jié)直腸癌標(biāo)本，共4例標(biāo)本表現(xiàn)為低頻微衛(wèi)星不穩(wěn)定型，1例表現(xiàn)為高頻微衛(wèi)星不穩(wěn)定型，微衛(wèi)星不穩(wěn)定病例占6%，在表現(xiàn)微衛(wèi)星不穩(wěn)定的微衛(wèi)星DNA標(biāo)記位點(diǎn)上均未發(fā)生雜合缺失。
2.2 MSI與臨床病理特征之間的關(guān)系 5例微衛(wèi)星不穩(wěn)定病例，均位于近端結(jié)腸。遠(yuǎn)端結(jié)腸、直腸癌中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)微衛(wèi)星不穩(wěn)定現(xiàn)象，其微衛(wèi)星不穩(wěn)定發(fā)生率低于近端結(jié)腸癌，差異有顯著性意義(P<0.05)。微衛(wèi)星不穩(wěn)定現(xiàn)象在體積較大腫瘤(直徑≥5cm)高于體積較小腫瘤，其發(fā)生率差異有顯著性意義(P<0.05)，屬于Dukes B，C期，3例為中分化腺癌、1例低分化腺癌、1例粘液腺腺癌，均與年齡、性別無(wú)關(guān)，見(jiàn)表2。
表2 5例微衛(wèi)星不穩(wěn)定發(fā)生位點(diǎn)和臨床病理特征
3 討論
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微衛(wèi)星DNA標(biāo)記是一類短重復(fù)DNA序列，這一類DNA序列沒(méi)有編碼功能，由10～50個(gè)小序列重復(fù)組成，重復(fù)序列可為1～6個(gè)堿基，常見(jiàn)為雙核苷酸重復(fù)。微衛(wèi)星DNA標(biāo)記廣泛、隨機(jī)分布于人類基因組中。而在與同一個(gè)體的正常組織比較下，腫瘤組織內(nèi)微衛(wèi)星重復(fù)單位可以發(fā)生增多或減少而造成長(zhǎng)度改變，從而在同一位點(diǎn)上出現(xiàn)不同于正常組織的等位片斷即稱為微衛(wèi)星不穩(wěn)定，它是由DNA錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)在DNA復(fù)制過(guò)程中不能修復(fù)復(fù)制錯(cuò)誤所致。目前認(rèn)為微衛(wèi)星不穩(wěn)定和抑癌基因的雜合缺失呈負(fù)相關(guān)。微衛(wèi)星不穩(wěn)定型結(jié)直腸癌主要是近端結(jié)腸癌，分化較差，腫瘤較大 [6，7] ，和年齡、性別無(wú)關(guān) [8] 。我們的結(jié)果與之相符。5例微衛(wèi)星不穩(wěn)定型病人均在近端結(jié)腸，體積較大(直徑≥5cm)，3例為中分化腺癌，1例低分化腺癌，1例粘液腺腺癌，與性別、年齡無(wú)關(guān)，發(fā)生在Dukes B、C期。在發(fā)生不穩(wěn)定的微衛(wèi)星DNA標(biāo)記位點(diǎn)上均未發(fā)現(xiàn)雜合缺失現(xiàn)象 [4] 。有研究表明微衛(wèi)星不穩(wěn)定是結(jié)直腸癌發(fā)生過(guò)程中的早期現(xiàn)象 [9] ，而有些研究則認(rèn)為其發(fā)生在結(jié)直腸癌發(fā)展過(guò)程的中晚期 [10] ，本研究提示微衛(wèi)星不穩(wěn)定主要存在于Dukes B、C期，支持后一種觀點(diǎn)。
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本研究的微衛(wèi)星不穩(wěn)定型病例僅為6%，與其它研究報(bào)道的12%～15%發(fā)生率不同，原因可能是:(1)由于微衛(wèi) 星不穩(wěn)定和雜合缺失是結(jié)直腸癌發(fā)生的不同機(jī)制，在以往我們的報(bào)道中22號(hào)染色體長(zhǎng)臂表現(xiàn)為明顯的雜合缺失現(xiàn)象 [4]，所以在22號(hào)染色體上的基因不穩(wěn)定主要表現(xiàn)為雜合缺失而不是微衛(wèi)星不穩(wěn)定。(2)12%～15%這一發(fā)生率主要由西方學(xué)者報(bào)道，可能東西方人群種族及地理環(huán)境不同所致。(3)所選擇微衛(wèi)星的數(shù)目和位點(diǎn)不同。
本研究提示基因不穩(wěn)定在散發(fā)性結(jié)直腸癌發(fā)生過(guò)程中的作用涉及兩種途徑，一為發(fā)生在染色體水平，即雜合缺失(Loss Of Heterozygosity，LOH)，二為發(fā)生于核苷酸水平，即微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI)。散發(fā)性結(jié)直腸癌病例在22號(hào)染色體上，基因不穩(wěn)定主要表現(xiàn)為雜合缺失，但微衛(wèi)星不穩(wěn)定在結(jié)直腸癌發(fā)生過(guò)程中也起著一定作用。
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基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào):30080016)
作者單位:200080上海第一人民醫(yī)院普通外科
(收稿日期:2002-11-28)
(編輯張 璇), 百拇醫(yī)藥(裘國(guó)強(qiáng))
百拇醫(yī)藥網(wǎng) http://www.www.srpcoatings.com/html/Dir/2004/05/10/40/24/29.htm