紅細(xì)胞CR 1 陽性細(xì)胞百分比測定的臨床意義
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中華醫(yī)學(xué)研究雜志 2003年4月 第3卷 第4期
【摘要】 目的 建立一種測定紅細(xì)胞補體Ⅰ型受體(CR 1 )敏感且重復(fù)性良好的實驗方法,研究其臨床價值。方法 采用FACS Vantage流式細(xì)胞儀檢測20000個紅細(xì)胞,結(jié)合Cell Quest軟件分析,計算陽性細(xì)胞百分比。結(jié)果 本方法具有良好的敏感性及重復(fù)性,正常健康人紅細(xì)胞CR 1 陽性細(xì)胞百分比顯著高于大腸癌、肝癌、胰腺癌等患者(P<0.001),其中肝癌患者紅細(xì)胞CR 1 陽性細(xì)胞百分比表達(dá)顯著低于其它疾病(P<0.001),差異有顯著意義。結(jié)論 本方法能準(zhǔn)確檢測出紅細(xì)胞CR 1 分子的表達(dá),紅細(xì)胞CR 1 的表達(dá)及變化與惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展及轉(zhuǎn)歸具有明顯相關(guān)性;并其百分比對惡性腫瘤的輔助診斷與治療效果評價具有價值。
關(guān)鍵詞 惡性腫瘤 陽性細(xì)胞百分比 補體受體 低表達(dá)
【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】 A 【文章編號】 1680-6115(2003)04-0320-02
, 百拇醫(yī)藥
The clinical significance of the percent of complement receptor
typeⅠpositive cell in erythrocyte
Wang Wei,Cao Yuemin,Zheng Shiling,et al.
Department of Surgery,People’s Hospital of Hebei Province,Shijiazhuang050051.
【Abstract】 Objective To establish a highly sensitive and repetitive method to analyze the expression of eryˉthrocyte complement receptor typeⅠ(CR 1 )and investigate its clinical value.Methods Using FACS Vantage flow cytometry instrument for20000erythrocyte,analyzing with Cell Quest soft and counting the percent of the CR 1 positive cell.Results This method was highly sensitive and repetitive.In control group,the percent of CR 1 positive cell was far higher than mammary cancer,carcinoma of large intestine,hepatocarcinoma and cancer of pancreas groups(P<0.001),in which the percent of positive cell of hepatocarcinoma group was much lower than other disease(P<0.001).The difference was significant.Conclution This method can accurately test the expression of CR 1 in erythrocyte.There was significantly correlations between the expression,change of CR 1 positive cell and the occurrence,developˉment,prognosis of malignant tumor.Testing the percent of CR 1 positive cell was of great theoretical and clinical value on the accessory diagnose of malignant tumor and the therapeutic evaluation.
, 百拇醫(yī)藥
Key words malignant tumor percent of positive cell complement receptor lowexpression
紅細(xì)胞在血液中的數(shù)量龐大,分布最廣,與機體細(xì)胞及抗原物質(zhì)接觸最廣泛,紅細(xì)胞在機體天然免疫及指導(dǎo)非特異性免疫反應(yīng)中占重要地位,其中細(xì)胞膜上的補體Ⅰ型受體CR 1 的表達(dá)一直是國內(nèi)外學(xué)者的研究熱點。1985年Thomesn等描述了紅細(xì)胞CR 1 ELISA法,使用戊二醛固定將紅細(xì)胞單層包被在微量滴定板上;1987年郭峰教授建立了紅細(xì)胞免疫粘附酵母菌和腫瘤細(xì)胞的測定方法;1993年Jones [1] 使用ELISA技術(shù)測定完整紅細(xì)胞膜上CR 1 的分子數(shù)量;2000年王海濱 [2] 使用細(xì)胞酶免疫分析法定量測定完整紅細(xì)胞上CR 1 分子數(shù)量。我們在此基礎(chǔ)上使用FACS Vanˉtage流式細(xì)胞儀檢測20000個紅細(xì)胞結(jié)合Cell Quest軟件分析計算CR 1 陽性細(xì)胞百分比。為紅細(xì)胞CR 1 的檢測能夠應(yīng)用于臨床檢驗,為臨床惡性腫瘤疾病的輔助診斷以及對病情判斷和治療效果評價提供了重要參考指標(biāo)。現(xiàn)報告如下。
, 百拇醫(yī)藥
1 材料與方法
1.1 血標(biāo)本 取清晨空腹靜脈血1ml,EDTA抗凝,采血后4h內(nèi)實驗。對照組血標(biāo)本取自本院健康查體人群50例,實驗組大腸癌患者30例,肝癌患者27例,胰腺癌患者20例, 卵巢囊20例,均為2000年12月~2002年7月河北省人民醫(yī)院住院確診患者。
1.2 儀器與試劑 FACS Vantage流式細(xì)胞儀(美國BD公司);XW-80A旋渦混合器(上海醫(yī)科大學(xué));CD35-FITC Cali BRITE Beads I micron Beads IgG 1 FITC/IgG 2a PE(均為美國BD公司產(chǎn)品)1%多聚甲醛(北京試劑二廠)。
1.3 測定方法 (1)取清晨空腹外周靜脈血1ml;(2)取流式專用試管2支,1支加CD35-FITC單克隆抗體,另一管加陰性對照IgG 1 FITC/IgG 2a 各10μl,充分混勻3s,置4℃冰箱中反應(yīng)15min,加1%多聚甲醛0.5ml,24h內(nèi)上機檢測;(3)FACS Vantage流式細(xì)胞儀,激發(fā)光波為488nm,啟動Cell Quest軟件,用I micron Beads調(diào)熒光檢測變異系數(shù)(CV)<2%,用Cali BRITE Beads按程序調(diào)整流式細(xì)胞儀光電倍增管電壓及靈敏度閾值。使儀器處于最佳工作狀態(tài),F(xiàn)SC和SSC選擇對數(shù)方式,使用對照管調(diào)整陰性群體位于FL 1 VS LF 2 點圖,每份標(biāo)本收集紅細(xì)胞20000個,計算陽性細(xì)胞的百分率。測定后在Macintosh7300型計算機用Cell Quest軟件分析數(shù)據(jù),HP/600型打印機打印結(jié)果。
, 百拇醫(yī)藥
1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 實驗數(shù)據(jù)使用SPSS軟件分析,各組用student檢驗。
2 結(jié)果
2.1 本試驗檢測重復(fù)性、靈敏度及陰性對照 關(guān)于熒光的靈敏度和分辨率采用雞血紅細(xì)胞和均一大小的微球來檢測,每次應(yīng)用前調(diào)整FSC,SSC道數(shù)的平均值及變異系數(shù)(CV),使儀器處于最佳工作狀態(tài)和同一標(biāo)準(zhǔn)。高靈敏表現(xiàn)在每個細(xì)胞只要有100個熒光分子(異硫氰酸熒光素)就可以檢測出來,兩個細(xì)胞間有2%差別,流式細(xì)胞儀就可以區(qū)別開來。每份標(biāo)本都同時做同型陰性對照,以確定象限位置來計算陽性細(xì)胞百分率。
2.2 臨床價值 (1)正常人紅細(xì)胞CR 1 陽性細(xì)胞百分比測定值分布特點:50例健康人其表達(dá)分布存在一定差異,測 定值大于1.00%為高表達(dá);測定值介于1.00%~0.50%之間為中表達(dá);測定值小于0.50%為低表達(dá)。其它各組患者亦是如此分析(見表1)。(2)正常人與惡性腫瘤患者紅細(xì)胞CR 1 測定值的表達(dá)存在一定差異,從表1中看出大腸癌、肝癌、胰腺癌患者其紅細(xì)胞CR 1 陽性細(xì)胞百分比測定值明顯低于正常對照組及卵巢囊腫組患者(P<0.001);其中從肝癌組患者下降最為嚴(yán)重,明顯低于大腸癌及胰腺癌組患者(P<0.001)。對于肝癌、大腸癌、胰腺癌等患者的檢測發(fā)現(xiàn)其紅細(xì)胞CR 1 陽性細(xì)胞百分比值的下降程度隨疾病的進(jìn)展而逐漸降低,與疾病的嚴(yán)重程度明顯相關(guān)。對臨床病情判斷具有一定參考價值。
, 百拇醫(yī)藥
表1 各組患者紅細(xì)胞CR 1 陽性細(xì)胞百分比分布
注:a=0.05 正常對照組與卵巢囊腫組比較P>0.05;正常對照組與大腸癌組、肝癌組、胰腺癌組比較 P<0.001;肝癌組與大腸癌組、胰腺癌組比較 P<0.001
3 討論
我們建立的紅細(xì)胞CR 1 陽性細(xì)胞百分比的測定方法,靈敏度及重復(fù)性較好,適合在臨床推廣使用。本操作簡單,不需洗滌紅細(xì)胞,用完整的紅細(xì)胞,而不將紅細(xì)胞粘附在微量滴定板孔上,可保證紅細(xì)胞膜上所有的抗原分子充分暴露,從而達(dá)到與CD35-FITC單克隆抗體充分反應(yīng)之目的,這是本試驗方法準(zhǔn)確且重復(fù)性良好的重要因素之一。1例患者檢測20000個紅細(xì)胞也是保證本試驗方法準(zhǔn)確度的另一重要因素。
紅細(xì)胞CR 1 具有廣泛的生物學(xué)功能 [3,4] ,其主要功能有四方面。一是CR 1 通過與C3b或C4b結(jié)合抑制經(jīng)典或旁路途徑C3轉(zhuǎn)化酶的形成;二是可以作為調(diào)理素受體增強吞噬細(xì)胞攝取包被C3b或C4b顆;蛭⑸;三是可與帶有C3b的免疫復(fù)合物結(jié)合并將免疫復(fù)合物送到肝脾網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬銷毀,防止免疫復(fù)合物在組織中沉積;四是對機體具有免疫調(diào)節(jié)作用。雖然CR 1 在紅細(xì)胞膜上的數(shù)量僅相當(dāng)于白細(xì)胞膜上CR 1 分子的1/50~1/100,但其成簇分布且單位容積血液中紅細(xì)胞的數(shù)目大于白細(xì)胞三個數(shù)量級,其與循環(huán)免疫復(fù)合物、抗原物質(zhì)及其它機體細(xì)胞接觸的機會是白細(xì)胞的500~1000倍 [2] 。因此紅細(xì)胞膜上CR 1 陽性細(xì)胞百分比值的表達(dá)情況與機體正常生理功能維持及臨床病理變化都具有重要意義。
, 百拇醫(yī)藥
從表1中可以看到正常對照組與卵巢囊腫組患者紅細(xì)胞CR 1 陽性細(xì)胞百分比測定值基本一致,差異無顯著性(P>0.05),大腸癌組、肝癌組及胰腺癌組患者紅細(xì)胞CR 1 陽性細(xì)胞百分比顯著低于正常對照組及卵巢囊腫組患者,差 異有非常顯著性(P<0.001);且肝癌組患者紅細(xì)胞CR 1 陽性細(xì)胞百分比明顯低于大腸癌組和胰腺癌組患者,差異有非常顯著性(P<0.001)。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報道乳腺癌患者外周血中紅細(xì)胞CR 1 陽性細(xì)胞百分比明顯低于正常人及乳腺小葉增生患者,其差異非常明顯 [5] 。因此對一些與免疫因素有關(guān)的惡性腫瘤患者進(jìn)行紅細(xì)胞CR 1 陽性細(xì)胞百分比測定具有重要臨床價值。本測定方法簡單,靈敏度及重復(fù)性良好,適合于臨床進(jìn)行常規(guī)檢查,為惡性腫瘤患者的輔助診斷及臨床治療效果評價提供新的參考指標(biāo),希望醫(yī)學(xué)界同仁進(jìn)行更深入的研究,以取得更完善的結(jié)論。
參考文獻(xiàn)
, 百拇醫(yī)藥
1 Jones DRE.Detection of red cell sensitiation by antibody and compleˉmentment:current practice and future perspectives.Comp Haematol Int,1993,3:201-207.
2 王海濱,張景萍,王輝,等.紅細(xì)胞CR 1 分子的定量測定及其臨床意義.中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志,2000,20:381-384.
3 Rodgaard A,Thomsen BS,Bendixen G,et al.Increased expression of complement receptor typeⅠ(CR 1 .CD35)on human peripheral blood T lymphocytes after polyclonal activation in vitro.Immunol Res,1995,14(1):69-76.
, 百拇醫(yī)藥
4 Montefiori DC,Graham BS,Zhou JY,et al.Binding of human immunodˉeficiency virus type1to the C3b/C4b receptor CR 1 (CD35)and red blood cell in the presence of enrelopespecific antibodies and compleˉment.National institutes of health AIDS vaccine clinical trials networks.J Infect Dis,1994,170(2):429-432.
5 王偉,曹月敏.紅細(xì)胞補體Ⅰ型受體在乳腺癌患者中的表達(dá).中華醫(yī)學(xué)研究雜志,2002,10:885-886.
作者單位:050051石家莊河北省人民醫(yī)院普外科(科研中心)
(收稿日期:2003-01-15)
(編輯李年令), 百拇醫(yī)藥
關(guān)鍵詞 惡性腫瘤 陽性細(xì)胞百分比 補體受體 低表達(dá)
【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】 A 【文章編號】 1680-6115(2003)04-0320-02
, 百拇醫(yī)藥
The clinical significance of the percent of complement receptor
typeⅠpositive cell in erythrocyte
Wang Wei,Cao Yuemin,Zheng Shiling,et al.
Department of Surgery,People’s Hospital of Hebei Province,Shijiazhuang050051.
【Abstract】 Objective To establish a highly sensitive and repetitive method to analyze the expression of eryˉthrocyte complement receptor typeⅠ(CR 1 )and investigate its clinical value.Methods Using FACS Vantage flow cytometry instrument for20000erythrocyte,analyzing with Cell Quest soft and counting the percent of the CR 1 positive cell.Results This method was highly sensitive and repetitive.In control group,the percent of CR 1 positive cell was far higher than mammary cancer,carcinoma of large intestine,hepatocarcinoma and cancer of pancreas groups(P<0.001),in which the percent of positive cell of hepatocarcinoma group was much lower than other disease(P<0.001).The difference was significant.Conclution This method can accurately test the expression of CR 1 in erythrocyte.There was significantly correlations between the expression,change of CR 1 positive cell and the occurrence,developˉment,prognosis of malignant tumor.Testing the percent of CR 1 positive cell was of great theoretical and clinical value on the accessory diagnose of malignant tumor and the therapeutic evaluation.
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Key words malignant tumor percent of positive cell complement receptor lowexpression
紅細(xì)胞在血液中的數(shù)量龐大,分布最廣,與機體細(xì)胞及抗原物質(zhì)接觸最廣泛,紅細(xì)胞在機體天然免疫及指導(dǎo)非特異性免疫反應(yīng)中占重要地位,其中細(xì)胞膜上的補體Ⅰ型受體CR 1 的表達(dá)一直是國內(nèi)外學(xué)者的研究熱點。1985年Thomesn等描述了紅細(xì)胞CR 1 ELISA法,使用戊二醛固定將紅細(xì)胞單層包被在微量滴定板上;1987年郭峰教授建立了紅細(xì)胞免疫粘附酵母菌和腫瘤細(xì)胞的測定方法;1993年Jones [1] 使用ELISA技術(shù)測定完整紅細(xì)胞膜上CR 1 的分子數(shù)量;2000年王海濱 [2] 使用細(xì)胞酶免疫分析法定量測定完整紅細(xì)胞上CR 1 分子數(shù)量。我們在此基礎(chǔ)上使用FACS Vanˉtage流式細(xì)胞儀檢測20000個紅細(xì)胞結(jié)合Cell Quest軟件分析計算CR 1 陽性細(xì)胞百分比。為紅細(xì)胞CR 1 的檢測能夠應(yīng)用于臨床檢驗,為臨床惡性腫瘤疾病的輔助診斷以及對病情判斷和治療效果評價提供了重要參考指標(biāo)。現(xiàn)報告如下。
, 百拇醫(yī)藥
1 材料與方法
1.1 血標(biāo)本 取清晨空腹靜脈血1ml,EDTA抗凝,采血后4h內(nèi)實驗。對照組血標(biāo)本取自本院健康查體人群50例,實驗組大腸癌患者30例,肝癌患者27例,胰腺癌患者20例, 卵巢囊20例,均為2000年12月~2002年7月河北省人民醫(yī)院住院確診患者。
1.2 儀器與試劑 FACS Vantage流式細(xì)胞儀(美國BD公司);XW-80A旋渦混合器(上海醫(yī)科大學(xué));CD35-FITC Cali BRITE Beads I micron Beads IgG 1 FITC/IgG 2a PE(均為美國BD公司產(chǎn)品)1%多聚甲醛(北京試劑二廠)。
1.3 測定方法 (1)取清晨空腹外周靜脈血1ml;(2)取流式專用試管2支,1支加CD35-FITC單克隆抗體,另一管加陰性對照IgG 1 FITC/IgG 2a 各10μl,充分混勻3s,置4℃冰箱中反應(yīng)15min,加1%多聚甲醛0.5ml,24h內(nèi)上機檢測;(3)FACS Vantage流式細(xì)胞儀,激發(fā)光波為488nm,啟動Cell Quest軟件,用I micron Beads調(diào)熒光檢測變異系數(shù)(CV)<2%,用Cali BRITE Beads按程序調(diào)整流式細(xì)胞儀光電倍增管電壓及靈敏度閾值。使儀器處于最佳工作狀態(tài),F(xiàn)SC和SSC選擇對數(shù)方式,使用對照管調(diào)整陰性群體位于FL 1 VS LF 2 點圖,每份標(biāo)本收集紅細(xì)胞20000個,計算陽性細(xì)胞的百分率。測定后在Macintosh7300型計算機用Cell Quest軟件分析數(shù)據(jù),HP/600型打印機打印結(jié)果。
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1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 實驗數(shù)據(jù)使用SPSS軟件分析,各組用student檢驗。
2 結(jié)果
2.1 本試驗檢測重復(fù)性、靈敏度及陰性對照 關(guān)于熒光的靈敏度和分辨率采用雞血紅細(xì)胞和均一大小的微球來檢測,每次應(yīng)用前調(diào)整FSC,SSC道數(shù)的平均值及變異系數(shù)(CV),使儀器處于最佳工作狀態(tài)和同一標(biāo)準(zhǔn)。高靈敏表現(xiàn)在每個細(xì)胞只要有100個熒光分子(異硫氰酸熒光素)就可以檢測出來,兩個細(xì)胞間有2%差別,流式細(xì)胞儀就可以區(qū)別開來。每份標(biāo)本都同時做同型陰性對照,以確定象限位置來計算陽性細(xì)胞百分率。
2.2 臨床價值 (1)正常人紅細(xì)胞CR 1 陽性細(xì)胞百分比測定值分布特點:50例健康人其表達(dá)分布存在一定差異,測 定值大于1.00%為高表達(dá);測定值介于1.00%~0.50%之間為中表達(dá);測定值小于0.50%為低表達(dá)。其它各組患者亦是如此分析(見表1)。(2)正常人與惡性腫瘤患者紅細(xì)胞CR 1 測定值的表達(dá)存在一定差異,從表1中看出大腸癌、肝癌、胰腺癌患者其紅細(xì)胞CR 1 陽性細(xì)胞百分比測定值明顯低于正常對照組及卵巢囊腫組患者(P<0.001);其中從肝癌組患者下降最為嚴(yán)重,明顯低于大腸癌及胰腺癌組患者(P<0.001)。對于肝癌、大腸癌、胰腺癌等患者的檢測發(fā)現(xiàn)其紅細(xì)胞CR 1 陽性細(xì)胞百分比值的下降程度隨疾病的進(jìn)展而逐漸降低,與疾病的嚴(yán)重程度明顯相關(guān)。對臨床病情判斷具有一定參考價值。
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表1 各組患者紅細(xì)胞CR 1 陽性細(xì)胞百分比分布
注:a=0.05 正常對照組與卵巢囊腫組比較P>0.05;正常對照組與大腸癌組、肝癌組、胰腺癌組比較 P<0.001;肝癌組與大腸癌組、胰腺癌組比較 P<0.001
3 討論
我們建立的紅細(xì)胞CR 1 陽性細(xì)胞百分比的測定方法,靈敏度及重復(fù)性較好,適合在臨床推廣使用。本操作簡單,不需洗滌紅細(xì)胞,用完整的紅細(xì)胞,而不將紅細(xì)胞粘附在微量滴定板孔上,可保證紅細(xì)胞膜上所有的抗原分子充分暴露,從而達(dá)到與CD35-FITC單克隆抗體充分反應(yīng)之目的,這是本試驗方法準(zhǔn)確且重復(fù)性良好的重要因素之一。1例患者檢測20000個紅細(xì)胞也是保證本試驗方法準(zhǔn)確度的另一重要因素。
紅細(xì)胞CR 1 具有廣泛的生物學(xué)功能 [3,4] ,其主要功能有四方面。一是CR 1 通過與C3b或C4b結(jié)合抑制經(jīng)典或旁路途徑C3轉(zhuǎn)化酶的形成;二是可以作為調(diào)理素受體增強吞噬細(xì)胞攝取包被C3b或C4b顆;蛭⑸;三是可與帶有C3b的免疫復(fù)合物結(jié)合并將免疫復(fù)合物送到肝脾網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬銷毀,防止免疫復(fù)合物在組織中沉積;四是對機體具有免疫調(diào)節(jié)作用。雖然CR 1 在紅細(xì)胞膜上的數(shù)量僅相當(dāng)于白細(xì)胞膜上CR 1 分子的1/50~1/100,但其成簇分布且單位容積血液中紅細(xì)胞的數(shù)目大于白細(xì)胞三個數(shù)量級,其與循環(huán)免疫復(fù)合物、抗原物質(zhì)及其它機體細(xì)胞接觸的機會是白細(xì)胞的500~1000倍 [2] 。因此紅細(xì)胞膜上CR 1 陽性細(xì)胞百分比值的表達(dá)情況與機體正常生理功能維持及臨床病理變化都具有重要意義。
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從表1中可以看到正常對照組與卵巢囊腫組患者紅細(xì)胞CR 1 陽性細(xì)胞百分比測定值基本一致,差異無顯著性(P>0.05),大腸癌組、肝癌組及胰腺癌組患者紅細(xì)胞CR 1 陽性細(xì)胞百分比顯著低于正常對照組及卵巢囊腫組患者,差 異有非常顯著性(P<0.001);且肝癌組患者紅細(xì)胞CR 1 陽性細(xì)胞百分比明顯低于大腸癌組和胰腺癌組患者,差異有非常顯著性(P<0.001)。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報道乳腺癌患者外周血中紅細(xì)胞CR 1 陽性細(xì)胞百分比明顯低于正常人及乳腺小葉增生患者,其差異非常明顯 [5] 。因此對一些與免疫因素有關(guān)的惡性腫瘤患者進(jìn)行紅細(xì)胞CR 1 陽性細(xì)胞百分比測定具有重要臨床價值。本測定方法簡單,靈敏度及重復(fù)性良好,適合于臨床進(jìn)行常規(guī)檢查,為惡性腫瘤患者的輔助診斷及臨床治療效果評價提供新的參考指標(biāo),希望醫(yī)學(xué)界同仁進(jìn)行更深入的研究,以取得更完善的結(jié)論。
參考文獻(xiàn)
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1 Jones DRE.Detection of red cell sensitiation by antibody and compleˉmentment:current practice and future perspectives.Comp Haematol Int,1993,3:201-207.
2 王海濱,張景萍,王輝,等.紅細(xì)胞CR 1 分子的定量測定及其臨床意義.中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志,2000,20:381-384.
3 Rodgaard A,Thomsen BS,Bendixen G,et al.Increased expression of complement receptor typeⅠ(CR 1 .CD35)on human peripheral blood T lymphocytes after polyclonal activation in vitro.Immunol Res,1995,14(1):69-76.
, 百拇醫(yī)藥
4 Montefiori DC,Graham BS,Zhou JY,et al.Binding of human immunodˉeficiency virus type1to the C3b/C4b receptor CR 1 (CD35)and red blood cell in the presence of enrelopespecific antibodies and compleˉment.National institutes of health AIDS vaccine clinical trials networks.J Infect Dis,1994,170(2):429-432.
5 王偉,曹月敏.紅細(xì)胞補體Ⅰ型受體在乳腺癌患者中的表達(dá).中華醫(yī)學(xué)研究雜志,2002,10:885-886.
作者單位:050051石家莊河北省人民醫(yī)院普外科(科研中心)
(收稿日期:2003-01-15)
(編輯李年令), 百拇醫(yī)藥
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