濕疹皮炎的中醫(yī)藥基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展
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濕疹皮炎的中醫(yī)藥基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展
上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院皮膚科 潘祥龍*
濕疹皮炎是一組變態(tài)反應(yīng)性炎癥性皮膚病，主要有濕疹、遺傳性過(guò)敏性皮炎(AD)和接觸性皮炎等。臨床表現(xiàn)為皮膚紅斑腫脹、水皰丘疹、糜爛滲出，或紅斑鱗屑、粗糙增厚和苔蘚化。其主要病理變化分為兩期，急性期為表皮真皮細(xì)胞水腫，毛細(xì)血管擴(kuò)張，多細(xì)胞炎癥浸潤(rùn)；慢性期為表皮增厚，角化過(guò)度及角化不全，以及慢性炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。發(fā)病機(jī)理主要是多因素引起變態(tài)反應(yīng)而致皮膚組織炎癥表現(xiàn)。中醫(yī)對(duì)此類(lèi)疾病很早就有論述，如將濕疹、遺傳性過(guò)敏性皮炎稱(chēng)之為"濕瘡"、"浸淫瘡"、"旋耳瘡"、"四灣風(fēng)"等；將接觸性皮炎稱(chēng)之為"漆瘡"、"膏藥風(fēng)"、"馬桶癬"等。中醫(yī)主要辨證分為風(fēng)熱、濕熱、血虛等型。
中醫(yī)中藥治療濕疹皮炎有著較為肯定的療效，但在中醫(yī)濕疹皮炎辨證分型的動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)研究尚處于滯后的狀態(tài)。由于此類(lèi)疾病的中醫(yī)病因復(fù)雜和臨床分型多，至今還沒(méi)有研制出依據(jù)中醫(yī)傳統(tǒng)病因而建立的"純"中醫(yī)病證的濕疹皮炎動(dòng)物模型。目前濕疹皮炎的中醫(yī)藥基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究主要采用依據(jù)西醫(yī)病因病理(如化學(xué)、生物、機(jī)械和物理等致病因素作用)而復(fù)制出西醫(yī)或中醫(yī)病名的動(dòng)物模型，用于中藥或中醫(yī)療法的臨床療效觀察和相關(guān)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的監(jiān)測(cè)。因此建立一個(gè)符合中醫(yī)病證和西醫(yī)致病原理相結(jié)合的造模方式，在濕疹皮炎的實(shí)驗(yàn)研究中就顯得非常重要。本文通過(guò)對(duì)目前該領(lǐng)域內(nèi)所采用的不同造模方法以及中醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展進(jìn)行概述，以期能有助于濕疹皮炎中醫(yī)基礎(chǔ)研究的深入和發(fā)展。
一.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究常用的濕疹皮炎動(dòng)物模型
1.1 原發(fā)刺激性接觸性皮炎模型
1.1.1 原理：采用刺激性物質(zhì)對(duì)受試動(dòng)物產(chǎn)生非免疫性的皮膚炎癥性反應(yīng)。在規(guī)定時(shí)間內(nèi)觀察動(dòng)物皮膚接觸供試品后所產(chǎn)生的刺激反應(yīng)及其他不良反應(yīng)。
1.1.2 方法：楊錫平[1]采用生漆外涂造模，取日本大耳白兔背部?jī)蓚?cè)對(duì)稱(chēng)區(qū)進(jìn)行脫毛，24小時(shí)或用棉簽沾取少許生漆在脫毛區(qū)中心涂1×1cm2薄層，5min后用汽油棉簽洗去生漆。發(fā)現(xiàn)造模后動(dòng)物出現(xiàn)不安、亂抓現(xiàn)象，局部起初表現(xiàn)為散在小紅點(diǎn)，隨后融合成片狀紅斑，并高出周?chē)Ｆつw。谷梅等采用巴豆外涂[2]小鼠皮膚也能制作出類(lèi)似的皮膚刺激性皮炎模型。夏汝山采用飽和硫化鈉[3]對(duì)雄性新西蘭白兔背部脫毛和涂藥，局部皮膚出現(xiàn)紅斑、腫脹及糜爛等反應(yīng)。用于刺激性皮炎的造模試劑一般不會(huì)產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)。一般以引起皮膚刺激性反應(yīng)的物質(zhì)作為篩選的對(duì)象。目前研究比較成熟的有巴豆油和硫化鈉等。
1.2 變應(yīng)性接觸性皮炎
1.2.1 原理：主要為Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)。采用一些容易引起變態(tài)反應(yīng)的化學(xué)物質(zhì)對(duì)敏感性個(gè)體致敏，再經(jīng)激發(fā)后引起局部皮膚炎癥反應(yīng)。
1.2.2 方法：宋智琦[4]采用2,4二硝基氟苯(DNFB)造模，用丙酮、橄欖油(4:1)為溶劑，稀釋至0.5%和0.2%溶液。小鼠腹部脫毛，在1×1cm2范圍內(nèi)均勻涂布0.5%DNFB，以單獨(dú)涂布丙酮、橄欖油(4:1)溶劑作為對(duì)照，每天一次，連續(xù)2天，第6天進(jìn)行激發(fā)，在鼠左耳背面涂抹0.2%DNFB。除了觀察耳厚度等常規(guī)外，還進(jìn)行真皮肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)，表皮朗格漢氏細(xì)胞計(jì)數(shù)，以及觀察各種藥物通過(guò)減少真皮肥大細(xì)胞和表皮朗格漢氏細(xì)胞以抑制遲發(fā)型超敏反應(yīng)。林熙然等[5]利用DNFB造模觀察到Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)模型中血漿降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)呈現(xiàn)降低的情況。林志彬[6]采用二硝基氯苯(DNCB)的造模，取小鼠頸部硫化鋇脫毛后，皮膚上滴50%DNCB丙酮溶液致敏。12日后在致敏小鼠的腹部皮膚上涂2.5%DNCB丙酮溶液進(jìn)行攻擊，制作遲發(fā)型皮膚過(guò)敏反應(yīng)模型。造模24小時(shí)后，鼠尾靜脈注射1%伊文思藍(lán)10ml/kg。30分鐘后處死小鼠，取下腹部藍(lán)染皮膚剪碎，1:1丙酮生理鹽水溶液4ml浸泡24小時(shí)后，離心取上清液進(jìn)行光密度觀察。張汝芝等[7]參照Boyera等[8]的報(bào)道，選用低濃度DNCB造模小劑量反復(fù)刺激誘發(fā)慢性接觸性濕疹，觀察模型的病理表現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)麻醉藥物普魯卡因可以抑制表皮朗格漢斯細(xì)胞，從而抑制濕疹。此后還發(fā)現(xiàn)氫化可的松也可以抑制該模型的建立。因而證實(shí)了小劑量的DNCB反復(fù)刺激也可以建立慢性濕疹模型。楊耀芳等[9]利用4-氨基吡啶誘發(fā)小鼠舔體反應(yīng)；組胺致家兔皮膚血管通透性增高；二甲苯及蛋清分別制成小鼠耳片腫脹和足趾腫脹模型。周瑩[10]用TNCB(2,4,6-三硝基氯苯)造模�？傊珼NFB和DNCB等制作出Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)模型都是利用較高濃度的試劑對(duì)動(dòng)物致敏，然后利用較小劑量的試劑誘發(fā)。
1.3 光變態(tài)反應(yīng)性接觸性皮炎(PACD)
1.3.1 原理：利用敏感個(gè)體接觸或由全身吸收某種化合物后，再經(jīng)日光或人工光源照射引起經(jīng)免疫機(jī)制的皮膚反應(yīng)。
1.3.2 方法：王曉彥等[11] 建立的模型是采用小鼠或豚鼠6甲基香豆素(6-MC)PACD誘導(dǎo)及激發(fā)的方法，對(duì)動(dòng)物的頸部用石蠟、松香(1:1)脫毛。首先于脫毛區(qū)注射FCA0.1ml誘導(dǎo)，用UVA14J/cm2，UVB140mJ/cm2照光，隔日重復(fù)一次，重復(fù)5次后第14天進(jìn)行激發(fā)，在豚鼠背脫毛區(qū)，分別涂10%6-MC、1%6-MC溶媒，左側(cè)區(qū)照光，右側(cè)區(qū)避光，在UVA28J/cm2，UVB60mJ/cm2照光24、48、72、96小時(shí)后觀察皮膚反應(yīng)。目前光敏性皮炎的造模方法還不多，中醫(yī)藥的研究也不多。
1.4 被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)
1.4.1 原理：主要為Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)。由IgE介導(dǎo)的速發(fā)型接觸性反應(yīng)和全身過(guò)敏反應(yīng)。為變應(yīng)原與肥大細(xì)胞表面的IgE抗體結(jié)合，引起靶器官產(chǎn)生急性病理炎癥反應(yīng)。
1.4.2 方法：用致敏動(dòng)物含反應(yīng)素抗體的血清注射到同種或密切相關(guān)的異種正常動(dòng)物皮內(nèi)，24~72小時(shí)后靜脈注射抗原，使其局部釋放血管活性介質(zhì)。隨著機(jī)體內(nèi)抗原抗體反應(yīng)，血管活性介質(zhì)的釋放，局部血管通透性升高，因待測(cè)物質(zhì)與染料(通常是伊文思藍(lán))混合，局部反應(yīng)可通過(guò)皮膚斑點(diǎn)證實(shí)。譚毓治[12]利用5%蛋清生理鹽水溶液0.5ml肌注大鼠后腿，同時(shí)腹腔注射百日咳疫苗2×1010/只，12~14天采血，分離血清。稀釋后以不同濃度注射于分組大鼠皮下各點(diǎn)。每天一次，連續(xù)三天，末次給藥后1h，進(jìn)行抗原攻擊，尾靜脈注入5%蛋清。吳氏[13] 的PCA實(shí)驗(yàn)證明天花粉致敏大鼠后產(chǎn)生抗天花粉特異性IgE抗體。胡學(xué)軍[14]利用該原理造模后發(fā)現(xiàn)大鼠血清總IgE含量無(wú)明顯升高。此類(lèi)模型適用于檢測(cè)致敏動(dòng)物血清中的IgE類(lèi)抗體的滴度和鑒定免疫球蛋白類(lèi)別。
1.5 遺傳性過(guò)敏性皮炎(AD)
AD動(dòng)物模型一般多采用正常動(dòng)物反復(fù)致敏，它與AD疾病的本質(zhì)有區(qū)別。1997年日本松田等首次發(fā)現(xiàn)與人類(lèi)AD十分相似的AD動(dòng)物模型-NC/Nga鼠。醫(yī)學(xué)界研究證實(shí)NC鼠在普通環(huán)境(Conv)飼養(yǎng)中可發(fā)生AD的損害；在特定無(wú)病原菌環(huán)境(SPF)中飼養(yǎng)則不發(fā)病，但在受到抗原刺激后可誘發(fā)其發(fā)生持續(xù)而嚴(yán)重的AD損害，其皮損、病理、免疫學(xué)特征和人類(lèi)AD相一致[15]。
1.6 其他相關(guān)模型
1.6.1 血管通透性增高模型 在動(dòng)物背部脫毛，涂受試藥物1h后，耳緣靜脈注射5g/L伊文思藍(lán)溶液1mg/kg ......
濕疹皮炎的中醫(yī)藥基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展
上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院皮膚科 潘祥龍*
濕疹皮炎是一組變態(tài)反應(yīng)性炎癥性皮膚病，主要有濕疹、遺傳性過(guò)敏性皮炎(AD)和接觸性皮炎等。臨床表現(xiàn)為皮膚紅斑腫脹、水皰丘疹、糜爛滲出，或紅斑鱗屑、粗糙增厚和苔蘚化。其主要病理變化分為兩期，急性期為表皮真皮細(xì)胞水腫，毛細(xì)血管擴(kuò)張，多細(xì)胞炎癥浸潤(rùn)；慢性期為表皮增厚，角化過(guò)度及角化不全，以及慢性炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。發(fā)病機(jī)理主要是多因素引起變態(tài)反應(yīng)而致皮膚組織炎癥表現(xiàn)。中醫(yī)對(duì)此類(lèi)疾病很早就有論述，如將濕疹、遺傳性過(guò)敏性皮炎稱(chēng)之為"濕瘡"、"浸淫瘡"、"旋耳瘡"、"四灣風(fēng)"等；將接觸性皮炎稱(chēng)之為"漆瘡"、"膏藥風(fēng)"、"馬桶癬"等。中醫(yī)主要辨證分為風(fēng)熱、濕熱、血虛等型。
中醫(yī)中藥治療濕疹皮炎有著較為肯定的療效，但在中醫(yī)濕疹皮炎辨證分型的動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)研究尚處于滯后的狀態(tài)。由于此類(lèi)疾病的中醫(yī)病因復(fù)雜和臨床分型多，至今還沒(méi)有研制出依據(jù)中醫(yī)傳統(tǒng)病因而建立的"純"中醫(yī)病證的濕疹皮炎動(dòng)物模型。目前濕疹皮炎的中醫(yī)藥基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究主要采用依據(jù)西醫(yī)病因病理(如化學(xué)、生物、機(jī)械和物理等致病因素作用)而復(fù)制出西醫(yī)或中醫(yī)病名的動(dòng)物模型，用于中藥或中醫(yī)療法的臨床療效觀察和相關(guān)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的監(jiān)測(cè)。因此建立一個(gè)符合中醫(yī)病證和西醫(yī)致病原理相結(jié)合的造模方式，在濕疹皮炎的實(shí)驗(yàn)研究中就顯得非常重要。本文通過(guò)對(duì)目前該領(lǐng)域內(nèi)所采用的不同造模方法以及中醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展進(jìn)行概述，以期能有助于濕疹皮炎中醫(yī)基礎(chǔ)研究的深入和發(fā)展。
一.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究常用的濕疹皮炎動(dòng)物模型
1.1 原發(fā)刺激性接觸性皮炎模型
1.1.1 原理：采用刺激性物質(zhì)對(duì)受試動(dòng)物產(chǎn)生非免疫性的皮膚炎癥性反應(yīng)。在規(guī)定時(shí)間內(nèi)觀察動(dòng)物皮膚接觸供試品后所產(chǎn)生的刺激反應(yīng)及其他不良反應(yīng)。
1.1.2 方法：楊錫平[1]采用生漆外涂造模，取日本大耳白兔背部?jī)蓚?cè)對(duì)稱(chēng)區(qū)進(jìn)行脫毛，24小時(shí)或用棉簽沾取少許生漆在脫毛區(qū)中心涂1×1cm2薄層，5min后用汽油棉簽洗去生漆。發(fā)現(xiàn)造模后動(dòng)物出現(xiàn)不安、亂抓現(xiàn)象，局部起初表現(xiàn)為散在小紅點(diǎn)，隨后融合成片狀紅斑，并高出周?chē)Ｆつw。谷梅等采用巴豆外涂[2]小鼠皮膚也能制作出類(lèi)似的皮膚刺激性皮炎模型。夏汝山采用飽和硫化鈉[3]對(duì)雄性新西蘭白兔背部脫毛和涂藥，局部皮膚出現(xiàn)紅斑、腫脹及糜爛等反應(yīng)。用于刺激性皮炎的造模試劑一般不會(huì)產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)。一般以引起皮膚刺激性反應(yīng)的物質(zhì)作為篩選的對(duì)象。目前研究比較成熟的有巴豆油和硫化鈉等。
1.2 變應(yīng)性接觸性皮炎
1.2.1 原理：主要為Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)。采用一些容易引起變態(tài)反應(yīng)的化學(xué)物質(zhì)對(duì)敏感性個(gè)體致敏，再經(jīng)激發(fā)后引起局部皮膚炎癥反應(yīng)。
1.2.2 方法：宋智琦[4]采用2,4二硝基氟苯(DNFB)造模，用丙酮、橄欖油(4:1)為溶劑，稀釋至0.5%和0.2%溶液。小鼠腹部脫毛，在1×1cm2范圍內(nèi)均勻涂布0.5%DNFB，以單獨(dú)涂布丙酮、橄欖油(4:1)溶劑作為對(duì)照，每天一次，連續(xù)2天，第6天進(jìn)行激發(fā)，在鼠左耳背面涂抹0.2%DNFB。除了觀察耳厚度等常規(guī)外，還進(jìn)行真皮肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)，表皮朗格漢氏細(xì)胞計(jì)數(shù)，以及觀察各種藥物通過(guò)減少真皮肥大細(xì)胞和表皮朗格漢氏細(xì)胞以抑制遲發(fā)型超敏反應(yīng)。林熙然等[5]利用DNFB造模觀察到Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)模型中血漿降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)呈現(xiàn)降低的情況。林志彬[6]采用二硝基氯苯(DNCB)的造模，取小鼠頸部硫化鋇脫毛后，皮膚上滴50%DNCB丙酮溶液致敏。12日后在致敏小鼠的腹部皮膚上涂2.5%DNCB丙酮溶液進(jìn)行攻擊，制作遲發(fā)型皮膚過(guò)敏反應(yīng)模型。造模24小時(shí)后，鼠尾靜脈注射1%伊文思藍(lán)10ml/kg。30分鐘后處死小鼠，取下腹部藍(lán)染皮膚剪碎，1:1丙酮生理鹽水溶液4ml浸泡24小時(shí)后，離心取上清液進(jìn)行光密度觀察。張汝芝等[7]參照Boyera等[8]的報(bào)道，選用低濃度DNCB造模小劑量反復(fù)刺激誘發(fā)慢性接觸性濕疹，觀察模型的病理表現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)麻醉藥物普魯卡因可以抑制表皮朗格漢斯細(xì)胞，從而抑制濕疹。此后還發(fā)現(xiàn)氫化可的松也可以抑制該模型的建立。因而證實(shí)了小劑量的DNCB反復(fù)刺激也可以建立慢性濕疹模型。楊耀芳等[9]利用4-氨基吡啶誘發(fā)小鼠舔體反應(yīng)；組胺致家兔皮膚血管通透性增高；二甲苯及蛋清分別制成小鼠耳片腫脹和足趾腫脹模型。周瑩[10]用TNCB(2,4,6-三硝基氯苯)造模�？傊珼NFB和DNCB等制作出Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)模型都是利用較高濃度的試劑對(duì)動(dòng)物致敏，然后利用較小劑量的試劑誘發(fā)。
1.3 光變態(tài)反應(yīng)性接觸性皮炎(PACD)
1.3.1 原理：利用敏感個(gè)體接觸或由全身吸收某種化合物后，再經(jīng)日光或人工光源照射引起經(jīng)免疫機(jī)制的皮膚反應(yīng)。
1.3.2 方法：王曉彥等[11] 建立的模型是采用小鼠或豚鼠6甲基香豆素(6-MC)PACD誘導(dǎo)及激發(fā)的方法，對(duì)動(dòng)物的頸部用石蠟、松香(1:1)脫毛。首先于脫毛區(qū)注射FCA0.1ml誘導(dǎo)，用UVA14J/cm2，UVB140mJ/cm2照光，隔日重復(fù)一次，重復(fù)5次后第14天進(jìn)行激發(fā)，在豚鼠背脫毛區(qū)，分別涂10%6-MC、1%6-MC溶媒，左側(cè)區(qū)照光，右側(cè)區(qū)避光，在UVA28J/cm2，UVB60mJ/cm2照光24、48、72、96小時(shí)后觀察皮膚反應(yīng)。目前光敏性皮炎的造模方法還不多，中醫(yī)藥的研究也不多。
1.4 被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)
1.4.1 原理：主要為Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)。由IgE介導(dǎo)的速發(fā)型接觸性反應(yīng)和全身過(guò)敏反應(yīng)。為變應(yīng)原與肥大細(xì)胞表面的IgE抗體結(jié)合，引起靶器官產(chǎn)生急性病理炎癥反應(yīng)。
1.4.2 方法：用致敏動(dòng)物含反應(yīng)素抗體的血清注射到同種或密切相關(guān)的異種正常動(dòng)物皮內(nèi)，24~72小時(shí)后靜脈注射抗原，使其局部釋放血管活性介質(zhì)。隨著機(jī)體內(nèi)抗原抗體反應(yīng)，血管活性介質(zhì)的釋放，局部血管通透性升高，因待測(cè)物質(zhì)與染料(通常是伊文思藍(lán))混合，局部反應(yīng)可通過(guò)皮膚斑點(diǎn)證實(shí)。譚毓治[12]利用5%蛋清生理鹽水溶液0.5ml肌注大鼠后腿，同時(shí)腹腔注射百日咳疫苗2×1010/只，12~14天采血，分離血清。稀釋后以不同濃度注射于分組大鼠皮下各點(diǎn)。每天一次，連續(xù)三天，末次給藥后1h，進(jìn)行抗原攻擊，尾靜脈注入5%蛋清。吳氏[13] 的PCA實(shí)驗(yàn)證明天花粉致敏大鼠后產(chǎn)生抗天花粉特異性IgE抗體。胡學(xué)軍[14]利用該原理造模后發(fā)現(xiàn)大鼠血清總IgE含量無(wú)明顯升高。此類(lèi)模型適用于檢測(cè)致敏動(dòng)物血清中的IgE類(lèi)抗體的滴度和鑒定免疫球蛋白類(lèi)別。
1.5 遺傳性過(guò)敏性皮炎(AD)
AD動(dòng)物模型一般多采用正常動(dòng)物反復(fù)致敏，它與AD疾病的本質(zhì)有區(qū)別。1997年日本松田等首次發(fā)現(xiàn)與人類(lèi)AD十分相似的AD動(dòng)物模型-NC/Nga鼠。醫(yī)學(xué)界研究證實(shí)NC鼠在普通環(huán)境(Conv)飼養(yǎng)中可發(fā)生AD的損害；在特定無(wú)病原菌環(huán)境(SPF)中飼養(yǎng)則不發(fā)病，但在受到抗原刺激后可誘發(fā)其發(fā)生持續(xù)而嚴(yán)重的AD損害，其皮損、病理、免疫學(xué)特征和人類(lèi)AD相一致[15]。
1.6 其他相關(guān)模型
1.6.1 血管通透性增高模型 在動(dòng)物背部脫毛，涂受試藥物1h后，耳緣靜脈注射5g/L伊文思藍(lán)溶液1mg/kg ......
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