低氧啟動重組腺相關(guān)病毒的構(gòu)建
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目的 構(gòu)建低氧啟動rAAV,介導(dǎo)目的基因僅在低氧時特異性高效表達(dá)。方法 通過分子生物學(xué)的方法,分別構(gòu)建pGL3-6HRE-CMV-mp和pGL3-6HRE-CMV-mp-WPRE載體,比較2種低氧啟動子的特異性和在低氧時的啟動能力。選擇最佳的低氧啟動子構(gòu)建低氧啟動rAAV載體。采用磷酸鈣和氯仿-PEG8000/NaCl-氯仿法構(gòu)建低氧啟動rAAV病毒。rAAV病毒蛋白電泳和EGFP報告基因驗證低氧啟動rAAV病毒的構(gòu)建和介導(dǎo)目的基因在低氧時的表達(dá)。結(jié)果 6HRE-CMV-mp-WPRE是最佳的低氧啟動子,在低氧時高效、特異的表達(dá)目的基因。低氧啟動rAAV僅在低氧時介導(dǎo)報告基因EGFP的表達(dá)。采用6HRE-CMV-mp-WPRE啟動子的rAAV具有良好的低氧特異性和高效啟動能力。結(jié)論 采用最佳的低氧啟動子,本研究實現(xiàn)了低氧啟動rAAV的構(gòu)建。
目的 構(gòu)建低氧啟動rAAV,介導(dǎo)目的基因僅在低氧時特異性高效表達(dá)。方法 通過分子生物學(xué)的方法,分別構(gòu)建pGL3-6HRE-CMV-mp和pGL3-6HRE-CMV-mp-WPRE載體,比較2種低氧啟動子的特異性和在低氧時的啟動能力。選擇最佳的低氧啟動子構(gòu)建低氧啟動rAAV載體。采用磷酸鈣和氯仿-PEG8000/NaCl-氯仿法構(gòu)建低氧啟動rAAV病毒。rAAV病毒蛋白電泳和EGFP報告基因驗證低氧啟動rAAV病毒的構(gòu)建和介導(dǎo)目的基因在低氧時的表達(dá)。結(jié)果 6HRE-CMV-mp-WPRE是最佳的低氧啟動子,在低氧時高效、特異的表達(dá)目的基因。低氧啟動rAAV僅在低氧時介導(dǎo)報告基因EGFP的表達(dá)。采用6HRE-CMV-mp-WPRE啟動子的rAAV具有良好的低氧特異性和高效啟動能力。結(jié)論 采用最佳的低氧啟動子,本研究實現(xiàn)了低氧啟動rAAV的構(gòu)建。
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