FAME酶免分析系統(tǒng)與手工操作系統(tǒng)的性能比較
摘要：我站在2003年1月，從國外引入了用于血液樣品處理的AT-plus2加樣系統(tǒng)，用于酶免分析的FAME系統(tǒng)以及具有動(dòng)力學(xué)判斷和掃描功能的HT3多功能掃描酶標(biāo)儀等儀器，并結(jié)合Auslab綜合判讀軟件配套使用，運(yùn)用國產(chǎn)檢測試劑，先后開發(fā)出一套適合我國“血站基本標(biāo)準(zhǔn)”中要求的供血者血液篩查自動(dòng)化檢測方法。
全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)運(yùn)行一年多了，為了解其性能我們用相同的國產(chǎn)酶免試劑對(duì)同一批血清標(biāo)本分別用常規(guī)單元儀器(手工加樣、洗板機(jī)、孵育箱、酶標(biāo)儀)和費(fèi)米全自動(dòng)分析系統(tǒng)進(jìn)行了檢測，對(duì)二者的性能做了比較。
1研究材料及設(shè)備
1.1 標(biāo)本來源：獻(xiàn)血者常規(guī)檢測標(biāo)本。
1.2 質(zhì)控物：HBsAg 1ng/ml質(zhì)控血清、抗-HCV 2NCU/ml質(zhì)控血清、抗-HIV 2NCU/ml質(zhì)控血清，以上質(zhì)控品均購自于中國衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心。
, 百拇醫(yī)藥
1.3試劑： HBsAg試劑盒，上海實(shí)業(yè)科化生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：20031011。
抗-HCV試劑盒，上海實(shí)業(yè)科化生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：20031121。
抗-HIV試劑盒，上海實(shí)業(yè)科化生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：20031120。
1.4 儀器設(shè)備：ML/FAME全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)，瑞士HAMILTONGS公司
ML/AT-plus 2全自動(dòng)樣品處理系統(tǒng)，瑞士HAMILTONGS公司
HT3多功能掃描酶標(biāo)閱讀儀，奧地利Anthos公司
Aw1型全自動(dòng)洗板機(jī)
Anthos2001型酶標(biāo)儀
, 百拇醫(yī)藥
1.5 檢測方法：
常規(guī)單元儀器檢測法：按照說明書進(jìn)行操作及判斷結(jié)果。
費(fèi)米全自動(dòng)分析系統(tǒng)檢測法：完全按照試劑說明書的要求進(jìn)行編程，操作規(guī)范, 未出現(xiàn)任何異常報(bào)警現(xiàn)象，實(shí)驗(yàn)有效。
2試驗(yàn)結(jié)果
2.1 精密度試驗(yàn)：以HBsAg 1ng/ml質(zhì)控血清，抗-HCV 2NCU/ml質(zhì)控血清及抗-HIV 2NCU/ml質(zhì)控血清作為質(zhì)控物，分別收集三項(xiàng)試驗(yàn)FAME程序和常規(guī)程序連續(xù)20次試驗(yàn)質(zhì)控值，求每一質(zhì)控血清值相對(duì)于Cutoff值的比率，觀察兩種程序的精密度。結(jié)果如下：
兩種操作程序精密度試驗(yàn)結(jié)果(表一)
HBsAg 抗-HCV 抗-HIV
, 百拇醫(yī)藥
N=20 FAME程序 常規(guī)程序 FAME程序 常規(guī)程序 FAME程序 常規(guī)程序
X3.38 3.26 7.02 6.54 7.11 6.57
SD 0.68 1.54 1.42 1.86 0.93 1.64
CV% 20.12 47.24 20.23 28.44 13.08 24.96
2.2 重復(fù)性和特異性試驗(yàn)：全自動(dòng)程序和常規(guī)程序檢測出的HBsAg、抗-HCV陽性標(biāo)本，用同樣的方法進(jìn)行重復(fù)性檢測，分別比較兩種程序初次反應(yīng)和重復(fù)反應(yīng)標(biāo)本對(duì)受檢標(biāo)本百分率的差異，其中FAME程序檢測標(biāo)本2230份，常規(guī)程序檢測標(biāo)本2350份。結(jié)果如下.
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兩種操作程序靈敏度的比較(表二)
HBsAg 抗-HCV
FAME 常規(guī)程序 FAME程序 常規(guī)程序
1：1 3.85 3.52 7.89 7.52
1：2 3.31 2.96 7.35 7.01
1：4 2.79 2.41 6.55 5.98
, http://www.www.srpcoatings.com
1：8 2.18 1.56 5.62 4.87
3討論
3.1 由表一可以看出，F(xiàn)AME結(jié)果質(zhì)控值的擺動(dòng)范圍變窄，SD和CV值均小于常規(guī)結(jié)果質(zhì)控值的SD和CV值，F(xiàn)AME程序的應(yīng)用改善了ELISA試驗(yàn)的精密度，因此費(fèi)米分析系統(tǒng)得出的結(jié)果重復(fù)性好、精密度高、結(jié)果穩(wěn)定可靠。
3.2 由表二可以看出，使用費(fèi)米分析系統(tǒng)檢測的靈敏度比常規(guī)單元儀器高，由于靈敏度的提高可篩選出更多的弱陽性標(biāo)本，因此用它檢測可以降低血液危險(xiǎn)機(jī)率，避免輸血引起的感染事件。
3.3 由于ELISA試驗(yàn)水平受試劑盒品質(zhì)和操作過程的影響，由于常規(guī)操作手法受主觀因素影響，孵育時(shí)間、加樣標(biāo)準(zhǔn)或多或少有一定的差別，這種操作的不均一性，可造成試驗(yàn)結(jié)果變異過大，結(jié)果的假陽性增高，為了減少非特異性反應(yīng)，必須給予相對(duì)較強(qiáng)的洗板條件，但是洗板條件的增強(qiáng)，使試驗(yàn)體系中的弱陽性標(biāo)本的反應(yīng)程度相應(yīng)降低，將可能造成部分弱陽性標(biāo)本的漏檢。因此，常規(guī)操作程序由于人為因素的影響，限制了檢驗(yàn)水平的發(fā)揮。
3.4 費(fèi)米系統(tǒng)獨(dú)特品質(zhì)表現(xiàn)在，硬件上采用了綜合模塊化設(shè)計(jì)，廣泛采用液體水平檢測技術(shù)、體積與重量傳感、光學(xué)位置傳感等實(shí)現(xiàn)了真正全過程控制，特別是專利的洗板液體傳感，確保了最佳洗板效果。在軟件與功能上，目前仍是唯一的全自動(dòng)GMP/GLP規(guī)范符合系統(tǒng)，如全面的系統(tǒng)跟蹤記錄與系統(tǒng)追溯，標(biāo)本/試劑加樣校驗(yàn)及“自由任務(wù)管理器”實(shí)現(xiàn)隨時(shí)增加檢測板。酶標(biāo)板在FAME中的處理過程按試劑盒說明書有微機(jī)編程，使酶聯(lián)免疫的各個(gè)步驟都在嚴(yán)格控制下進(jìn)行，每一塊酶標(biāo)板的實(shí)驗(yàn)條件幾乎一致，確保了操作的穩(wěn)定性，避免了手工法的人為誤差，提高了檢測的精確性和重復(fù)性，并可準(zhǔn)確的反映出試劑盒所固有的靈敏度和特異性，既有利于弱陽性標(biāo)本的檢出，又可減少非特異性反應(yīng)，降低了由輸血傳播疾病的危險(xiǎn)，增加了輸血的安全系數(shù)。, 百拇醫(yī)藥(范文成)
全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)運(yùn)行一年多了，為了解其性能我們用相同的國產(chǎn)酶免試劑對(duì)同一批血清標(biāo)本分別用常規(guī)單元儀器(手工加樣、洗板機(jī)、孵育箱、酶標(biāo)儀)和費(fèi)米全自動(dòng)分析系統(tǒng)進(jìn)行了檢測，對(duì)二者的性能做了比較。
1研究材料及設(shè)備
1.1 標(biāo)本來源：獻(xiàn)血者常規(guī)檢測標(biāo)本。
1.2 質(zhì)控物：HBsAg 1ng/ml質(zhì)控血清、抗-HCV 2NCU/ml質(zhì)控血清、抗-HIV 2NCU/ml質(zhì)控血清，以上質(zhì)控品均購自于中國衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心。
, 百拇醫(yī)藥
1.3試劑： HBsAg試劑盒，上海實(shí)業(yè)科化生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：20031011。
抗-HCV試劑盒，上海實(shí)業(yè)科化生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：20031121。
抗-HIV試劑盒，上海實(shí)業(yè)科化生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：20031120。
1.4 儀器設(shè)備：ML/FAME全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)，瑞士HAMILTONGS公司
ML/AT-plus 2全自動(dòng)樣品處理系統(tǒng)，瑞士HAMILTONGS公司
HT3多功能掃描酶標(biāo)閱讀儀，奧地利Anthos公司
Aw1型全自動(dòng)洗板機(jī)
Anthos2001型酶標(biāo)儀
, 百拇醫(yī)藥
1.5 檢測方法：
常規(guī)單元儀器檢測法：按照說明書進(jìn)行操作及判斷結(jié)果。
費(fèi)米全自動(dòng)分析系統(tǒng)檢測法：完全按照試劑說明書的要求進(jìn)行編程，操作規(guī)范, 未出現(xiàn)任何異常報(bào)警現(xiàn)象，實(shí)驗(yàn)有效。
2試驗(yàn)結(jié)果
2.1 精密度試驗(yàn)：以HBsAg 1ng/ml質(zhì)控血清，抗-HCV 2NCU/ml質(zhì)控血清及抗-HIV 2NCU/ml質(zhì)控血清作為質(zhì)控物，分別收集三項(xiàng)試驗(yàn)FAME程序和常規(guī)程序連續(xù)20次試驗(yàn)質(zhì)控值，求每一質(zhì)控血清值相對(duì)于Cutoff值的比率，觀察兩種程序的精密度。結(jié)果如下：
兩種操作程序精密度試驗(yàn)結(jié)果(表一)
HBsAg 抗-HCV 抗-HIV
, 百拇醫(yī)藥
N=20 FAME程序 常規(guī)程序 FAME程序 常規(guī)程序 FAME程序 常規(guī)程序
X3.38 3.26 7.02 6.54 7.11 6.57
SD 0.68 1.54 1.42 1.86 0.93 1.64
CV% 20.12 47.24 20.23 28.44 13.08 24.96
2.2 重復(fù)性和特異性試驗(yàn)：全自動(dòng)程序和常規(guī)程序檢測出的HBsAg、抗-HCV陽性標(biāo)本，用同樣的方法進(jìn)行重復(fù)性檢測，分別比較兩種程序初次反應(yīng)和重復(fù)反應(yīng)標(biāo)本對(duì)受檢標(biāo)本百分率的差異，其中FAME程序檢測標(biāo)本2230份，常規(guī)程序檢測標(biāo)本2350份。結(jié)果如下.
, 百拇醫(yī)藥
兩種操作程序靈敏度的比較(表二)
HBsAg 抗-HCV
FAME 常規(guī)程序 FAME程序 常規(guī)程序
1：1 3.85 3.52 7.89 7.52
1：2 3.31 2.96 7.35 7.01
1：4 2.79 2.41 6.55 5.98
, http://www.www.srpcoatings.com
1：8 2.18 1.56 5.62 4.87
3討論
3.1 由表一可以看出，F(xiàn)AME結(jié)果質(zhì)控值的擺動(dòng)范圍變窄，SD和CV值均小于常規(guī)結(jié)果質(zhì)控值的SD和CV值，F(xiàn)AME程序的應(yīng)用改善了ELISA試驗(yàn)的精密度，因此費(fèi)米分析系統(tǒng)得出的結(jié)果重復(fù)性好、精密度高、結(jié)果穩(wěn)定可靠。
3.2 由表二可以看出，使用費(fèi)米分析系統(tǒng)檢測的靈敏度比常規(guī)單元儀器高，由于靈敏度的提高可篩選出更多的弱陽性標(biāo)本，因此用它檢測可以降低血液危險(xiǎn)機(jī)率，避免輸血引起的感染事件。
3.3 由于ELISA試驗(yàn)水平受試劑盒品質(zhì)和操作過程的影響，由于常規(guī)操作手法受主觀因素影響，孵育時(shí)間、加樣標(biāo)準(zhǔn)或多或少有一定的差別，這種操作的不均一性，可造成試驗(yàn)結(jié)果變異過大，結(jié)果的假陽性增高，為了減少非特異性反應(yīng)，必須給予相對(duì)較強(qiáng)的洗板條件，但是洗板條件的增強(qiáng)，使試驗(yàn)體系中的弱陽性標(biāo)本的反應(yīng)程度相應(yīng)降低，將可能造成部分弱陽性標(biāo)本的漏檢。因此，常規(guī)操作程序由于人為因素的影響，限制了檢驗(yàn)水平的發(fā)揮。
3.4 費(fèi)米系統(tǒng)獨(dú)特品質(zhì)表現(xiàn)在，硬件上采用了綜合模塊化設(shè)計(jì)，廣泛采用液體水平檢測技術(shù)、體積與重量傳感、光學(xué)位置傳感等實(shí)現(xiàn)了真正全過程控制，特別是專利的洗板液體傳感，確保了最佳洗板效果。在軟件與功能上，目前仍是唯一的全自動(dòng)GMP/GLP規(guī)范符合系統(tǒng)，如全面的系統(tǒng)跟蹤記錄與系統(tǒng)追溯，標(biāo)本/試劑加樣校驗(yàn)及“自由任務(wù)管理器”實(shí)現(xiàn)隨時(shí)增加檢測板。酶標(biāo)板在FAME中的處理過程按試劑盒說明書有微機(jī)編程，使酶聯(lián)免疫的各個(gè)步驟都在嚴(yán)格控制下進(jìn)行，每一塊酶標(biāo)板的實(shí)驗(yàn)條件幾乎一致，確保了操作的穩(wěn)定性，避免了手工法的人為誤差，提高了檢測的精確性和重復(fù)性，并可準(zhǔn)確的反映出試劑盒所固有的靈敏度和特異性，既有利于弱陽性標(biāo)本的檢出，又可減少非特異性反應(yīng)，降低了由輸血傳播疾病的危險(xiǎn)，增加了輸血的安全系數(shù)。, 百拇醫(yī)藥(范文成)