炎癥性腸病患者外周血可溶性CD44v6檢測
作者:江學良 權(quán)啟鎮(zhèn) 孫自勤 王要軍 齊風 王東 張修禮
單位:中國人民解放軍濟南軍區(qū)總醫(yī)院消化科 山東省濟南市 250031
關(guān)鍵詞:結(jié)腸炎,潰瘍性/診斷;克隆病/診斷
世界華人消化雜志991225
中國圖書館分類號 R574.62
Subject headings colitis,ulcerative/diagnosis; Crohn disease/diagnosis; CD44V6/analysis
1 材料和方法
1.1 材料 潰瘍性結(jié)腸炎(UC)患者34例,男14例,女20例,平均年齡31.4歲,均符合1993年太原全國慢性非感染性腸道疾病學術(shù)研討會制訂的潰瘍性結(jié)腸炎診斷標準.其中輕度16例,中度10例,重度8例,有16例患者近期用過皮質(zhì)激素(潑尼松或地塞米松)治療.克隆病(CD)8例,男6例,女2例,平均年齡32.3歲,2例患者近期用過皮質(zhì)激素治療.正常人對照組20例,男8例,女12例,平均年齡30.6歲,均為健康查體者.異硫氰酸熒光素(FITC)標記的鼠抗人CD44V6(CD44V6-FITC,同種熒光素標記的陰性對照羊抗鼠IgG1-FITC均由法國國際免疫公司生產(chǎn);淋巴細胞分離液由中國醫(yī)學科學院血液研究所生產(chǎn).流式細胞儀為FACScan型,美國Becton Dickinson生產(chǎn).
, http://www.www.srpcoatings.com
1.2 方法 晨取肘靜脈血2mL,20g/L EDTA抗凝(抗凝劑∶血=1∶9),懸浮于淋巴細胞分離液上,1500r/min離心15min,提取其中的淋巴細胞,加PBS 2mL漂洗,同速離心棄上清,備用.免疫反應(yīng)前調(diào)整細胞數(shù)至1012/L,分取100μL放入2支試管內(nèi),試管內(nèi)分別加20μL CD44V6-FITC和IgG1-FITC,室溫避光反應(yīng)30min,上機前先以標準熒光微球調(diào)整儀器變異系數(shù)在2.0%以內(nèi),上機后收集10000個細胞,熒光強度以對數(shù)放大,測定光散射數(shù)據(jù),結(jié)果采用Macintosh 650型計算機及Cell Quest Plot軟件進行數(shù)據(jù)分析,以陽性細胞百分數(shù)表示.
統(tǒng)計學處理 采用兩樣本均數(shù)的t檢驗和等級資料的Ridit分析.
2 結(jié)果
UC患者CD44V6(4.84%±1.62%)與正常人(5.16%±2.11%)及CD患者(5.09%±1.87%)相比差異無顯著性(P>0.05);UC患者CD44V6在輕度(4.91%±1.23%),中度(4.86%±1.19%)及重度(4.77%±1.13%)之間表達也無顯著性差異(P>0.05).
, http://www.www.srpcoatings.com
3 討論
CD44分子最初由Dzlchau于1980年用單克隆抗體確定并描述,是淋巴細胞歸巢受體,其基因定位于11號染色體短臂上.由于基因轉(zhuǎn)錄過程中mRNA選擇性剪接而形成標準型CD44及變異型CD44(V1~10),主要參與淋巴細胞歸巢,上皮細胞增生,腫瘤轉(zhuǎn)移和非霍奇金淋巴瘤分型等.炎癥性腸病患者腸活檢組織中標準型CD44及變異型CD44V6,V3表達已有研究[1-6],Rosenberg et al[6]發(fā)現(xiàn)CD44V6及V3在UC患者中有高強度表達,而CD患者則無,認為這有助于區(qū)別這兩種疾病,并可作為一個重要的鑒別診斷指標,而Reinisch et al[2]則認為CD44V6表達與結(jié)腸粘膜隱窩上皮細胞增生有關(guān),而非特異性改變,不能作為CD和UC鑒別診斷指標.由于腸活檢標本只有通過介入性方法才可獲得,另外CD44原位檢測是一種復(fù)雜而昂貴的技術(shù)方法,并且對免疫組化獲得結(jié)果的解釋有一定的主觀性,為了避免這些問題,我們采用靈敏先進的流式細胞技術(shù),以單克隆抗體作分子探針,檢測了血液中循環(huán)的可溶性CD44V6,觀察其是否對UC和CD的鑒別診斷有一定幫助.結(jié)果提示,CD44V6在UC和CD患者中的表達無顯著性差異,不足以作為二者鑒別診斷指標,而且可溶性CD44V6在輕中重度UC患者中的表達也無顯著性差異,說明其與炎癥程度無關(guān).這些結(jié)果的差異可能與抗體不同,檢測方法不一致及是否應(yīng)用皮質(zhì)激素治療等多因素有關(guān),對其臨床意義還需做進一步研究.
, http://www.www.srpcoatings.com
致謝 本研究得到本院流式細胞室尹格平博士及孫曉明主管技師的幫助,特此致謝!
通訊作者 江學良
參考文獻
1 江學良,權(quán)啟鎮(zhèn),孫自勤,王要軍,齊風.潰瘍性結(jié)腸炎患者粘附分子表達的變化.華人消化雜志,1998;6:54-55
2 Reinisch W,Heider KH,Oberhuber G,Dejaco C,Mullner M,Adolf GR,Gasche C.Poor diagnostic value of colonic CD44V6 expression and serum concentrations of its soluble form in the differentiation of ulcerative colitis from Crohn's disease.Gut,1998;43:375-382
, 百拇醫(yī)藥
3 Fromont Hankard G,Cezard JP,Aigrain Y,Navarro J,Peuchmaur M.CD44 variant expression in inflammatory colonic mucosa is not disease specific but associated with increased cyprt cell proliferation.Histopathology,1998;32:317-321
4 Rogler G,Andus T,Aschenbrenner E,Vogl D,F(xiàn)alk W,Scholmerich J,Gross V.Alterations of the phenotype of colonic macrophages in inflammatory bowel disease.Eur J Gastroenterol Hepatol,1997;9:893-899
5 Papadogiannakis N,Gad A,Chenard MP,Bellocq JP,Duclos B.Expression of CD44 variants in differential diagnosis of ulcerative colitis and Crohn's disease.Lancet,1996;347:1413-1414
6 Rosenberg WM,Prince C,Kaklamanis L,F(xiàn)ox SB,Jackson DG,Simmons DL,Chapman RW,Trowell JM,Jewell DP,Bell JI.Increased expression of CD44V6 and CD44V3 in ulcerative colitis but not colonic Crohn's disease.Lancet,1995;345:1205-1209
收稿日期 1999-09-22, 百拇醫(yī)藥
單位:中國人民解放軍濟南軍區(qū)總醫(yī)院消化科 山東省濟南市 250031
關(guān)鍵詞:結(jié)腸炎,潰瘍性/診斷;克隆病/診斷
世界華人消化雜志991225
中國圖書館分類號 R574.62
Subject headings colitis,ulcerative/diagnosis; Crohn disease/diagnosis; CD44V6/analysis
1 材料和方法
1.1 材料 潰瘍性結(jié)腸炎(UC)患者34例,男14例,女20例,平均年齡31.4歲,均符合1993年太原全國慢性非感染性腸道疾病學術(shù)研討會制訂的潰瘍性結(jié)腸炎診斷標準.其中輕度16例,中度10例,重度8例,有16例患者近期用過皮質(zhì)激素(潑尼松或地塞米松)治療.克隆病(CD)8例,男6例,女2例,平均年齡32.3歲,2例患者近期用過皮質(zhì)激素治療.正常人對照組20例,男8例,女12例,平均年齡30.6歲,均為健康查體者.異硫氰酸熒光素(FITC)標記的鼠抗人CD44V6(CD44V6-FITC,同種熒光素標記的陰性對照羊抗鼠IgG1-FITC均由法國國際免疫公司生產(chǎn);淋巴細胞分離液由中國醫(yī)學科學院血液研究所生產(chǎn).流式細胞儀為FACScan型,美國Becton Dickinson生產(chǎn).
, http://www.www.srpcoatings.com
1.2 方法 晨取肘靜脈血2mL,20g/L EDTA抗凝(抗凝劑∶血=1∶9),懸浮于淋巴細胞分離液上,1500r/min離心15min,提取其中的淋巴細胞,加PBS 2mL漂洗,同速離心棄上清,備用.免疫反應(yīng)前調(diào)整細胞數(shù)至1012/L,分取100μL放入2支試管內(nèi),試管內(nèi)分別加20μL CD44V6-FITC和IgG1-FITC,室溫避光反應(yīng)30min,上機前先以標準熒光微球調(diào)整儀器變異系數(shù)在2.0%以內(nèi),上機后收集10000個細胞,熒光強度以對數(shù)放大,測定光散射數(shù)據(jù),結(jié)果采用Macintosh 650型計算機及Cell Quest Plot軟件進行數(shù)據(jù)分析,以陽性細胞百分數(shù)表示.
統(tǒng)計學處理 采用兩樣本均數(shù)的t檢驗和等級資料的Ridit分析.
2 結(jié)果
UC患者CD44V6(4.84%±1.62%)與正常人(5.16%±2.11%)及CD患者(5.09%±1.87%)相比差異無顯著性(P>0.05);UC患者CD44V6在輕度(4.91%±1.23%),中度(4.86%±1.19%)及重度(4.77%±1.13%)之間表達也無顯著性差異(P>0.05).
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3 討論
CD44分子最初由Dzlchau于1980年用單克隆抗體確定并描述,是淋巴細胞歸巢受體,其基因定位于11號染色體短臂上.由于基因轉(zhuǎn)錄過程中mRNA選擇性剪接而形成標準型CD44及變異型CD44(V1~10),主要參與淋巴細胞歸巢,上皮細胞增生,腫瘤轉(zhuǎn)移和非霍奇金淋巴瘤分型等.炎癥性腸病患者腸活檢組織中標準型CD44及變異型CD44V6,V3表達已有研究[1-6],Rosenberg et al[6]發(fā)現(xiàn)CD44V6及V3在UC患者中有高強度表達,而CD患者則無,認為這有助于區(qū)別這兩種疾病,并可作為一個重要的鑒別診斷指標,而Reinisch et al[2]則認為CD44V6表達與結(jié)腸粘膜隱窩上皮細胞增生有關(guān),而非特異性改變,不能作為CD和UC鑒別診斷指標.由于腸活檢標本只有通過介入性方法才可獲得,另外CD44原位檢測是一種復(fù)雜而昂貴的技術(shù)方法,并且對免疫組化獲得結(jié)果的解釋有一定的主觀性,為了避免這些問題,我們采用靈敏先進的流式細胞技術(shù),以單克隆抗體作分子探針,檢測了血液中循環(huán)的可溶性CD44V6,觀察其是否對UC和CD的鑒別診斷有一定幫助.結(jié)果提示,CD44V6在UC和CD患者中的表達無顯著性差異,不足以作為二者鑒別診斷指標,而且可溶性CD44V6在輕中重度UC患者中的表達也無顯著性差異,說明其與炎癥程度無關(guān).這些結(jié)果的差異可能與抗體不同,檢測方法不一致及是否應(yīng)用皮質(zhì)激素治療等多因素有關(guān),對其臨床意義還需做進一步研究.
, http://www.www.srpcoatings.com
致謝 本研究得到本院流式細胞室尹格平博士及孫曉明主管技師的幫助,特此致謝!
通訊作者 江學良
參考文獻
1 江學良,權(quán)啟鎮(zhèn),孫自勤,王要軍,齊風.潰瘍性結(jié)腸炎患者粘附分子表達的變化.華人消化雜志,1998;6:54-55
2 Reinisch W,Heider KH,Oberhuber G,Dejaco C,Mullner M,Adolf GR,Gasche C.Poor diagnostic value of colonic CD44V6 expression and serum concentrations of its soluble form in the differentiation of ulcerative colitis from Crohn's disease.Gut,1998;43:375-382
, 百拇醫(yī)藥
3 Fromont Hankard G,Cezard JP,Aigrain Y,Navarro J,Peuchmaur M.CD44 variant expression in inflammatory colonic mucosa is not disease specific but associated with increased cyprt cell proliferation.Histopathology,1998;32:317-321
4 Rogler G,Andus T,Aschenbrenner E,Vogl D,F(xiàn)alk W,Scholmerich J,Gross V.Alterations of the phenotype of colonic macrophages in inflammatory bowel disease.Eur J Gastroenterol Hepatol,1997;9:893-899
5 Papadogiannakis N,Gad A,Chenard MP,Bellocq JP,Duclos B.Expression of CD44 variants in differential diagnosis of ulcerative colitis and Crohn's disease.Lancet,1996;347:1413-1414
6 Rosenberg WM,Prince C,Kaklamanis L,F(xiàn)ox SB,Jackson DG,Simmons DL,Chapman RW,Trowell JM,Jewell DP,Bell JI.Increased expression of CD44V6 and CD44V3 in ulcerative colitis but not colonic Crohn's disease.Lancet,1995;345:1205-1209
收稿日期 1999-09-22, 百拇醫(yī)藥