反相高效液相色譜法同時(shí)測定金馬通絡(luò)膠囊中東茛菪堿及士的寧含量
作者：卞俊 蔡定國 顧明娟 饒光立 曾華武
單位：卞俊 蔡定國 顧明娟 饒光立 曾華武(海軍藥學(xué)�？浦行� 上海 200434)
關(guān)鍵詞：反相高效液相色譜法；金馬通絡(luò)膠囊、東莨菪堿；士的寧
藥物分析雜志000118 摘 要：目的：建立一種反相高效液相色譜法檢測金馬通絡(luò)膠囊中東莨菪堿及士的寧含量。方法：用C18ODS柱為固定相。甲醇-水(58∶42)(水相含0.05 mol.L-1醋酸鹽緩沖液及0.002 5 mol.L-1十二烷基硫酸鈉)為流動相。檢測波長226 nm。結(jié)果：該方法回收率氫溴酸東莨菪堿為100.5%，RSD=2.3%(n=5)；士的寧為97.5%，RSD=2.4%(n=5)。結(jié)論：該方法操作簡便、快捷、專一、準(zhǔn)確性好，可用于金馬通絡(luò)膠囊質(zhì)量控制。
, 百拇醫(yī)藥
Determination Scopolamine and Strychnine
in Jin Ma Tong Luo Capsules by RP-HPLC
Bian Jun Cai Dingguo Gu Mingjuan Rao Guanli Zeng Huawu
(Research Center of Pharmacy,PLA Navy,Shanghai 200434)
Abstract：Objective：A RP-HPLC method in the separation and determination scopolamine and strychnine was developed.Method:The chromatographic conditions are listed below:Zorbax ODS C18 Column,UV detector at wavelength 226 nm,and a mobile phase MeOH-H2O(0.05 mol.L-1 acetate buffer solution with 0.002 5 mol.L-1 sodium lauryl sulfate,58∶42).Results:The recoveries for scopolamine and strychnine of the method are 100.5%(RSD 2.3%,n=5)and 97.5%(RSD 2.4%,n=5),respectively.Conclusion:The method is simple,rapid,accurate and precise.
, 百拇醫(yī)藥
Key words：RP-HPLC,Jin Ma Tong Luo capsules,scopolamine,strychnine▲
金馬通絡(luò)膠囊是由洋金花、馬錢子、淫羊藿、西洋參等數(shù)味中藥組成的復(fù)方制劑。具有祛風(fēng)除濕、溫經(jīng)通絡(luò)之功效，臨床上用于強(qiáng)直性脊椎炎等癥的治療。因洋金花中東莨菪堿及馬錢子中士的寧均為主要有效且有毒成分，必須嚴(yán)格控制其含量。HPLC法用于洋金花藥材中東莨菪堿及馬錢子藥材及其制劑中士的寧的含量測定，已有文獻(xiàn)報(bào)道[1～3]，但在同一制劑中采用HPLC法同時(shí)測定東莨菪堿及士的寧含量未見文獻(xiàn)報(bào)道。本文建立了反相HPLC法測定金馬通絡(luò)膠囊中東莨菪堿及士的寧含量，獲得了滿意結(jié)果，為金馬通絡(luò)膠囊的質(zhì)量控制及安全用藥提供了有效手段。
1 儀器與試藥
日本島津LC-6A高效液相色譜儀；SPD-6AV紫外檢測器；C-R3A數(shù)據(jù)處理機(jī)；CTO-6A柱溫箱；7125型進(jìn)樣器。
, 百拇醫(yī)藥
氫溴酸東莨菪堿和士的寧對照品(定量用)由中國藥品生物制品檢定所提供；洋金花、馬錢子、淫羊藿、西洋參等藥材品種符合中國藥典規(guī)定，購自上海市藥材公司；樣品金馬通絡(luò)膠囊(自制)，每1 g含東莨菪堿0.45 mg、士的寧2.0 mg。
十二烷基硫酸鈉為化學(xué)純，其余試劑均為分析純。
2 色譜條件
分析柱：Zorbax ODS C18柱(150 mm×6.0 mm，粒徑5 μm)，流動相：甲醇-水(58∶42)，水相含0.05 mol.L-1醋酸鹽緩沖液(pH 4.60)及0.002 5 mol.L-1十二烷基硫酸鈉；流速：1 mL.min-1；檢測波長：226 nm；記錄靈敏度：AUFS=0.08；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣體積：20 μL。在此色譜條件下，東莨菪堿及士的寧色譜圖峰形對稱，供試品色譜圖中東莨菪堿及士的寧能相互達(dá)到基線分離，其它雜質(zhì)成分對其測定結(jié)果不產(chǎn)生干擾。見色譜圖1-A、B。
, http://www.www.srpcoatings.com
圖1 色譜圖
A.東莨菪堿及士的寧對照品 B.樣品
C.缺洋金花、馬錢子 D.缺馬錢子 E.缺洋金花
1.東莨菪堿 2.士的寧
3 供試品溶液制備
取樣品內(nèi)容物1.1 g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入氯仿50 mL，濃氨試液3 mL，輕輕振搖數(shù)分鐘，室溫放置12 h以上，濾過，棄去初濾液，精密吸取續(xù)濾液30 mL，置分液漏斗中，用0.25 mol.L-1硫酸提取3次，每次20 mL，合并提取液，加濃氨試液中和后，再多加2 mL，迅速用氯仿分次振搖提取(20，15，15，15，10 mL)，合并氯仿液，回收氯仿至干，殘?jiān)蛹状既芙�，轉(zhuǎn)移置5.0 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.5 μm)過濾即得。
, 百拇醫(yī)藥
4 加樣回收率實(shí)驗(yàn)
取已知含量的制劑樣品，分別定量加入氫溴酸東莨菪堿及士的寧對照品，按上述擬定方法測定，5次測定的平均回收率分別為100.5%，97.5%；RSD分別為2.3%，2.4%。
5 樣品測定
取樣品3批，按上述擬定方法及色譜條件，分別吸取20 μL進(jìn)樣測定，按外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果見表1。
表1 3批樣品含量測定結(jié)果(n=5) 樣品
氫溴酸東莨菪堿
士的寧
相當(dāng)標(biāo)示量/%
RSD/%
, 百拇醫(yī)藥
相當(dāng)標(biāo)示量/%
RSD/%
951214
102.9
5.0
99.78
4.5
951216
99.73
3.1
98.66
2.3
951218
, 百拇醫(yī)藥
104.8
4.7
99.94
4.8
6 討論6.1 檢測波長的選擇 經(jīng)紫外掃描測得，氫溴酸東莨菪堿甲醇液最大吸收波長為226 nm。士的寧甲醇液最大吸收波長為255 nm，東莨菪堿在此波長沒有吸收，而士的寧在226 nm測定不受影響，故選擇226 nm作為檢測波長同步檢測金馬通絡(luò)膠囊中東莨菪堿及士的寧的含量。
6.2 流動相選擇 本文在流動相中加入十二烷基硫酸鈉作為配對離子，在酸性條件下與生物堿類成分結(jié)合成中性離子對，增加其保留值，使性質(zhì)相似的生物堿類物質(zhì)東莨菪堿和士的寧及其它雜質(zhì)成分在反相系統(tǒng)中相互達(dá)到基線分離。
6.3 提取方法及條件的選擇 樣品經(jīng)加熱回流(1，2，3 h)提取，超聲處理20，30 min提取及冷浸提取比較，結(jié)果表明采用冷浸法提取，氯仿為溶媒，加濃氨試液使生物堿在堿性條件下充分游離并轉(zhuǎn)入氯仿，并對不同冷浸時(shí)間(12，24，36 h)的萃取效果進(jìn)行研究，冷浸12 h即可將制劑樣品中待測成分提取出來。
, 百拇醫(yī)藥
6.4 線性關(guān)系的考察 精密稱取氫溴酸東莨菪堿對照品10 mg，士的寧對照品15 mg，置100 mL容量瓶中，加適量甲醇溶解，稀釋至刻度，制成含氫溴酸東莨菪堿0.1 mg.mL-1及士的寧0.15 mg.mL-1的對照品溶液，分別吸取0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL至5.0 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別吸取上述各溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣20 μL，各濃度溶液分別進(jìn)樣3次，以峰面積對進(jìn)樣量(μg)進(jìn)行線性回歸，得氫溴酸東莨菪堿和士的寧的回歸方程分別為：
Y=6.174X+0.048 2 r=0.999 7
Y=16.36X-0.045 r=0.999 4
可見進(jìn)樣量氫溴酸東莨菪堿在0.8～10 μg、士的寧在1.66～8.30 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
, 百拇醫(yī)藥
6.5 方法精密度測定 在同一天內(nèi)5個(gè)不同時(shí)間及5個(gè)不同日期對同一供試品溶液進(jìn)行測定，分別計(jì)算，東莨菪堿日內(nèi)精密度為RSD=1.4%,日間精密度為RSD=2.3%；士的寧日內(nèi)精密度為RSD=1.4%，日間精密度為RSD=2.4%。
6.6 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取制劑樣品，按上述所擬定方法平行測定6次，結(jié)果表明，本方法重現(xiàn)性好，氫溴酸東莨菪堿RSD為3.6%，士的寧RSD為2.8%。
6.7 空白試驗(yàn) 取制劑樣品，缺洋金花的空白樣品，缺馬錢子的空白樣品和缺洋金花、馬錢子粉的空白樣品，制成相同濃度的溶液，在相同色譜條件下分別進(jìn)樣，比較以上樣品HPLC色譜圖，空白試驗(yàn)結(jié)果表明，本法測定對待測成分無干擾，專屬性好。見圖1-C、D、E。
6.8 制備供試品 其樣品氨性氯仿萃取液經(jīng)硫酸提取后，經(jīng)氨水堿化用氯仿回流萃取時(shí)，氯仿萃取的次數(shù)不應(yīng)少于5次，這樣才能充分保證萃取液中士的寧成分充分轉(zhuǎn)移至氯仿中，以減少測定結(jié)果的誤差。
, 百拇醫(yī)藥
6.9 本文建立的方法，經(jīng)同一型號不同色譜柱及不同型號液相色譜儀對同一批號制劑樣品檢測，其結(jié)果基本相符。實(shí)驗(yàn)表明，該方法準(zhǔn)確、快速、專一且重現(xiàn)性好�！�
參考文獻(xiàn)：
[1]于霖匯，楊德柱，胡淑賢.反相高效液相色譜法測定洋金花中東莨菪堿含量.中成藥，1992，14(8)：35
[2]金斌，金蓉鸞，何宏賢.反相離子對HPLC法測定洋金花類生藥中的東莨菪堿和阿托品.中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1991，22(3)：181
[3]李海生，周靜遠(yuǎn).馬錢子及其制劑中士的寧的HPLC測定法.藥物分析雜志，1982，2(6)：326
收稿日期：1999-04-27, http://www.www.srpcoatings.com
單位：卞俊 蔡定國 顧明娟 饒光立 曾華武(海軍藥學(xué)�？浦行� 上海 200434)
關(guān)鍵詞：反相高效液相色譜法；金馬通絡(luò)膠囊、東莨菪堿；士的寧
藥物分析雜志000118 摘 要：目的：建立一種反相高效液相色譜法檢測金馬通絡(luò)膠囊中東莨菪堿及士的寧含量。方法：用C18ODS柱為固定相。甲醇-水(58∶42)(水相含0.05 mol.L-1醋酸鹽緩沖液及0.002 5 mol.L-1十二烷基硫酸鈉)為流動相。檢測波長226 nm。結(jié)果：該方法回收率氫溴酸東莨菪堿為100.5%，RSD=2.3%(n=5)；士的寧為97.5%，RSD=2.4%(n=5)。結(jié)論：該方法操作簡便、快捷、專一、準(zhǔn)確性好，可用于金馬通絡(luò)膠囊質(zhì)量控制。
, 百拇醫(yī)藥
Determination Scopolamine and Strychnine
in Jin Ma Tong Luo Capsules by RP-HPLC
Bian Jun Cai Dingguo Gu Mingjuan Rao Guanli Zeng Huawu
(Research Center of Pharmacy,PLA Navy,Shanghai 200434)
Abstract：Objective：A RP-HPLC method in the separation and determination scopolamine and strychnine was developed.Method:The chromatographic conditions are listed below:Zorbax ODS C18 Column,UV detector at wavelength 226 nm,and a mobile phase MeOH-H2O(0.05 mol.L-1 acetate buffer solution with 0.002 5 mol.L-1 sodium lauryl sulfate,58∶42).Results:The recoveries for scopolamine and strychnine of the method are 100.5%(RSD 2.3%,n=5)and 97.5%(RSD 2.4%,n=5),respectively.Conclusion:The method is simple,rapid,accurate and precise.
, 百拇醫(yī)藥
Key words：RP-HPLC,Jin Ma Tong Luo capsules,scopolamine,strychnine▲
金馬通絡(luò)膠囊是由洋金花、馬錢子、淫羊藿、西洋參等數(shù)味中藥組成的復(fù)方制劑。具有祛風(fēng)除濕、溫經(jīng)通絡(luò)之功效，臨床上用于強(qiáng)直性脊椎炎等癥的治療。因洋金花中東莨菪堿及馬錢子中士的寧均為主要有效且有毒成分，必須嚴(yán)格控制其含量。HPLC法用于洋金花藥材中東莨菪堿及馬錢子藥材及其制劑中士的寧的含量測定，已有文獻(xiàn)報(bào)道[1～3]，但在同一制劑中采用HPLC法同時(shí)測定東莨菪堿及士的寧含量未見文獻(xiàn)報(bào)道。本文建立了反相HPLC法測定金馬通絡(luò)膠囊中東莨菪堿及士的寧含量，獲得了滿意結(jié)果，為金馬通絡(luò)膠囊的質(zhì)量控制及安全用藥提供了有效手段。
1 儀器與試藥
日本島津LC-6A高效液相色譜儀；SPD-6AV紫外檢測器；C-R3A數(shù)據(jù)處理機(jī)；CTO-6A柱溫箱；7125型進(jìn)樣器。
, 百拇醫(yī)藥
氫溴酸東莨菪堿和士的寧對照品(定量用)由中國藥品生物制品檢定所提供；洋金花、馬錢子、淫羊藿、西洋參等藥材品種符合中國藥典規(guī)定，購自上海市藥材公司；樣品金馬通絡(luò)膠囊(自制)，每1 g含東莨菪堿0.45 mg、士的寧2.0 mg。
十二烷基硫酸鈉為化學(xué)純，其余試劑均為分析純。
2 色譜條件
分析柱：Zorbax ODS C18柱(150 mm×6.0 mm，粒徑5 μm)，流動相：甲醇-水(58∶42)，水相含0.05 mol.L-1醋酸鹽緩沖液(pH 4.60)及0.002 5 mol.L-1十二烷基硫酸鈉；流速：1 mL.min-1；檢測波長：226 nm；記錄靈敏度：AUFS=0.08；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣體積：20 μL。在此色譜條件下，東莨菪堿及士的寧色譜圖峰形對稱，供試品色譜圖中東莨菪堿及士的寧能相互達(dá)到基線分離，其它雜質(zhì)成分對其測定結(jié)果不產(chǎn)生干擾。見色譜圖1-A、B。
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圖1 色譜圖
A.東莨菪堿及士的寧對照品 B.樣品
C.缺洋金花、馬錢子 D.缺馬錢子 E.缺洋金花
1.東莨菪堿 2.士的寧
3 供試品溶液制備
取樣品內(nèi)容物1.1 g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入氯仿50 mL，濃氨試液3 mL，輕輕振搖數(shù)分鐘，室溫放置12 h以上，濾過，棄去初濾液，精密吸取續(xù)濾液30 mL，置分液漏斗中，用0.25 mol.L-1硫酸提取3次，每次20 mL，合并提取液，加濃氨試液中和后，再多加2 mL，迅速用氯仿分次振搖提取(20，15，15，15，10 mL)，合并氯仿液，回收氯仿至干，殘?jiān)蛹状既芙�，轉(zhuǎn)移置5.0 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.5 μm)過濾即得。
, 百拇醫(yī)藥
4 加樣回收率實(shí)驗(yàn)
取已知含量的制劑樣品，分別定量加入氫溴酸東莨菪堿及士的寧對照品，按上述擬定方法測定，5次測定的平均回收率分別為100.5%，97.5%；RSD分別為2.3%，2.4%。
5 樣品測定
取樣品3批，按上述擬定方法及色譜條件，分別吸取20 μL進(jìn)樣測定，按外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果見表1。
表1 3批樣品含量測定結(jié)果(n=5) 樣品
氫溴酸東莨菪堿
士的寧
相當(dāng)標(biāo)示量/%
RSD/%
, 百拇醫(yī)藥
相當(dāng)標(biāo)示量/%
RSD/%
951214
102.9
5.0
99.78
4.5
951216
99.73
3.1
98.66
2.3
951218
, 百拇醫(yī)藥
104.8
4.7
99.94
4.8
6 討論6.1 檢測波長的選擇 經(jīng)紫外掃描測得，氫溴酸東莨菪堿甲醇液最大吸收波長為226 nm。士的寧甲醇液最大吸收波長為255 nm，東莨菪堿在此波長沒有吸收，而士的寧在226 nm測定不受影響，故選擇226 nm作為檢測波長同步檢測金馬通絡(luò)膠囊中東莨菪堿及士的寧的含量。
6.2 流動相選擇 本文在流動相中加入十二烷基硫酸鈉作為配對離子，在酸性條件下與生物堿類成分結(jié)合成中性離子對，增加其保留值，使性質(zhì)相似的生物堿類物質(zhì)東莨菪堿和士的寧及其它雜質(zhì)成分在反相系統(tǒng)中相互達(dá)到基線分離。
6.3 提取方法及條件的選擇 樣品經(jīng)加熱回流(1，2，3 h)提取，超聲處理20，30 min提取及冷浸提取比較，結(jié)果表明采用冷浸法提取，氯仿為溶媒，加濃氨試液使生物堿在堿性條件下充分游離并轉(zhuǎn)入氯仿，并對不同冷浸時(shí)間(12，24，36 h)的萃取效果進(jìn)行研究，冷浸12 h即可將制劑樣品中待測成分提取出來。
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6.4 線性關(guān)系的考察 精密稱取氫溴酸東莨菪堿對照品10 mg，士的寧對照品15 mg，置100 mL容量瓶中，加適量甲醇溶解，稀釋至刻度，制成含氫溴酸東莨菪堿0.1 mg.mL-1及士的寧0.15 mg.mL-1的對照品溶液，分別吸取0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL至5.0 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別吸取上述各溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣20 μL，各濃度溶液分別進(jìn)樣3次，以峰面積對進(jìn)樣量(μg)進(jìn)行線性回歸，得氫溴酸東莨菪堿和士的寧的回歸方程分別為：
Y=6.174X+0.048 2 r=0.999 7
Y=16.36X-0.045 r=0.999 4
可見進(jìn)樣量氫溴酸東莨菪堿在0.8～10 μg、士的寧在1.66～8.30 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
, 百拇醫(yī)藥
6.5 方法精密度測定 在同一天內(nèi)5個(gè)不同時(shí)間及5個(gè)不同日期對同一供試品溶液進(jìn)行測定，分別計(jì)算，東莨菪堿日內(nèi)精密度為RSD=1.4%,日間精密度為RSD=2.3%；士的寧日內(nèi)精密度為RSD=1.4%，日間精密度為RSD=2.4%。
6.6 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取制劑樣品，按上述所擬定方法平行測定6次，結(jié)果表明，本方法重現(xiàn)性好，氫溴酸東莨菪堿RSD為3.6%，士的寧RSD為2.8%。
6.7 空白試驗(yàn) 取制劑樣品，缺洋金花的空白樣品，缺馬錢子的空白樣品和缺洋金花、馬錢子粉的空白樣品，制成相同濃度的溶液，在相同色譜條件下分別進(jìn)樣，比較以上樣品HPLC色譜圖，空白試驗(yàn)結(jié)果表明，本法測定對待測成分無干擾，專屬性好。見圖1-C、D、E。
6.8 制備供試品 其樣品氨性氯仿萃取液經(jīng)硫酸提取后，經(jīng)氨水堿化用氯仿回流萃取時(shí)，氯仿萃取的次數(shù)不應(yīng)少于5次，這樣才能充分保證萃取液中士的寧成分充分轉(zhuǎn)移至氯仿中，以減少測定結(jié)果的誤差。
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6.9 本文建立的方法，經(jīng)同一型號不同色譜柱及不同型號液相色譜儀對同一批號制劑樣品檢測，其結(jié)果基本相符。實(shí)驗(yàn)表明，該方法準(zhǔn)確、快速、專一且重現(xiàn)性好�！�
參考文獻(xiàn)：
[1]于霖匯，楊德柱，胡淑賢.反相高效液相色譜法測定洋金花中東莨菪堿含量.中成藥，1992，14(8)：35
[2]金斌，金蓉鸞，何宏賢.反相離子對HPLC法測定洋金花類生藥中的東莨菪堿和阿托品.中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1991，22(3)：181
[3]李海生，周靜遠(yuǎn).馬錢子及其制劑中士的寧的HPLC測定法.藥物分析雜志，1982，2(6)：326
收稿日期：1999-04-27, http://www.www.srpcoatings.com