應(yīng)用免疫熒光技術(shù)對(duì)眼瘢痕性類天皰瘡的研究
作者：趙普寧 Thanh Hoang-xuan Hervé Robin
單位：趙普寧(570311 �？�，海南省人民醫(yī)院眼科)；Thanh Hoang-Xuan(法國(guó)巴黎國(guó)立BICHAT大學(xué)醫(yī)院中心)；Hervé Robin(法國(guó)巴黎國(guó)立BICHAT大學(xué)醫(yī)院中心)
關(guān)鍵詞：免疫熒光；眼瘢痕性類天皰瘡
眼科研究000210 摘要 目的探討免疫熒光技術(shù)對(duì)眼瘢痕性類天皰瘡(OCP)的實(shí)驗(yàn)診斷意義。方法應(yīng)用直接免疫熒光(DIF)檢測(cè)16例OCP患者的結(jié)膜和應(yīng)用間接免疫熒光(IIF)以鼠食道和正常人結(jié)膜為基質(zhì)檢測(cè)34例OCP患者的血清。結(jié)果DIF證實(shí)6例結(jié)膜上皮細(xì)胞基底膜上有免疫復(fù)合物(IgG和/或IgA)和/或C3呈線狀沉積。以結(jié)膜為基質(zhì)的IIF證實(shí)血清中抗基底膜(BMZ)抗體4例，抗細(xì)胞間物質(zhì)(IIS)抗體14例，總陽(yáng)性率為52.9%，而以鼠食道為基質(zhì)的IIF陽(yáng)性率為38.2%。結(jié)論DIF對(duì)診斷眼瘢痕性類天皰瘡是有用的；IIF也有助于眼瘢痕性類天皰瘡的診斷及療效評(píng)估；孤立的上皮內(nèi)自身免疫瘢痕性結(jié)膜炎可能為一新的類型。
, 百拇醫(yī)藥
分類號(hào) R 770.3
Immunofluorescent studies on ocular cicatricial pemphigoid
Zhao Puning，Thanh Hoang-Xuan，Hervé Robin.
Department of Ophthalmology，People’s Hospital of Hainan Province，Haikou 570311
Abstract ObjectiveTo study the usefulness of immunofluorescent technique for the diagnosis of ocular cicatricial pemphigoid. M ethodsThirty-four patients with ocular cicatr icial pemphigoid were studied by indirect immunofluorescence(IIF)on their sera with rat esophagus and normal human conjunctiva as tissue substrates.Direct immunofluorescence (DIF) was performed on the conjunctival biopsy specimens of 16 patients.ResultsIn 6 cases of the 16 patients，DIF of conjunctiva showed a linear deposition of immunoreactants (IgG and/or IgA) and/or C3 on the basement membrane zone (BMZ).Of the 34 patients，4 had detectable circulating anti-BMZ antibodies，14 and 7 patients demonstrated antibodies binding to the intraepithelial intercellular substance (IIS) of human conjunctiva and rat esophagus，respectively.The positive rate of IIF on human conjunctiva is 52.9% and on rat esophagus 38.2%.ConclusionsDIF is useful for the diagnosis of ocular cicatricial pemphigoid.IIF also can help for the diagnosis and the evaluation of the treatment of ocular cicatricial pemphigoid.Isolated intraepithelial autoimmune fibrozing conjunctivitis may be a new entity.
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Key word simmunofluorescence ocular cicatricial pemphigoid
眼瘢痕性類天皰瘡(ocular cicatricial pemphigoid，OCP)是以慢性進(jìn)行性結(jié)膜瘢痕形成為特征的自身免疫性疾病[1，2]，它可引起結(jié)膜穹隆縮短，內(nèi)翻倒睫，附屬淚腺損害，角膜和結(jié)膜角化，瞼球粘連，最終導(dǎo)致失明，法國(guó)稱之為眼假性天皰瘡或Lortat-Jacob病。該病沒(méi)有地理和種族差異，以老人和女性患病多見(jiàn)。臨床上常根據(jù)其臨床特征而予以診斷，免疫抑制劑治療有效。近年來(lái)研究證實(shí)該病的自身免疫性特征：在皮膚和粘膜上皮細(xì)胞的基底膜有免疫球蛋白(主要是IgG)和補(bǔ)體的沉積[1～4]，但國(guó)內(nèi)對(duì)該病的認(rèn)識(shí)和文獻(xiàn)報(bào)道甚少�，F(xiàn)將作者于1996年在法國(guó)巴黎國(guó)立BICHAT大學(xué)醫(yī)院中心進(jìn)修時(shí)應(yīng)用免疫熒光技術(shù)對(duì)眼瘢痕性類天皰瘡所做的部分研究報(bào)告如下。
1 資料與方法
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1.1 病人及眼科檢查
收集1994～1996年34例符合眼瘢痕性類天皰瘡臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)者，并根據(jù)Tauber和Foster分級(jí)法予以臨床分級(jí)[5，6]。
眼瘢痕性類天皰瘡臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)：不明原因的雙眼非對(duì)稱性慢性進(jìn)展性結(jié)膜收縮，穹隆縮短，最后導(dǎo)致瞼球粘連，瞼內(nèi)翻倒睫，干眼癥和角膜混濁�？蓛H出現(xiàn)眼部病變，也可伴有全身其他部位的皮膚或粘膜損害，如口腔粘膜的水泡或大皰，可破潰形成瘢痕；頭面部的有水泡的紅斑，愈合后遺留光滑的萎縮性瘢痕；或腹股溝及肢體的復(fù)發(fā)性無(wú)瘢痕的暴發(fā)性囊皰。
眼瘢痕性類天皰瘡臨床分級(jí)(Tauber和Foster分級(jí)法)：
Ⅰ：慢性結(jié)膜炎，結(jié)膜下瘢痕和纖維化。
Ⅱ：出現(xiàn)任何程度的穹隆縮短，并根據(jù)下穹隆深度喪失的范圍細(xì)分為A(0～25%)，B(25%～50%)，C(50%～75%)，D(75%～100%)。
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Ⅲ：出現(xiàn)任何程度的瞼球粘連，并根據(jù)瞼球粘連所累及的水平范圍細(xì)分為A(0～25%)，B(25%～50%)，C(50%～75%)，D(75%～100%)，記錄瞼球粘連帶的數(shù)目。
Ⅳ：瞼緣粘連，瞼球固定。
1.2 活檢
(1)其中16例病人(男性5例，女性11例)行結(jié)膜活檢，均選擇病變較嚴(yán)重眼，于局麻下取上方角膜緣附近球結(jié)膜5 mm×2 mm，放入生理鹽水中，立即作直接免疫熒光(immunofluorescence，DIF)檢查，術(shù)眼不需縫合，涂抗生素糖皮質(zhì)激素眼膏，包眼24 h 。
(2)正常結(jié)膜取自單純老年性白內(nèi)障而無(wú)其他皮膚粘膜疾病患者，在白內(nèi)障摘出手術(shù)中，以同樣方式取球結(jié)膜，迅速包埋，作5 μm冰凍切片，-80℃低溫保存待用。
(3)取鼠內(nèi)臟組織(肝、食道等)同法作快速冰凍切片，低溫保存待用。
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1.3 血清
34例病人(男性10例，女性24例)均抽血制備血清，分裝多個(gè)小管(每管約0.5 ml)，-80℃保存，待行間接免疫熒光(IIF)檢查。
1.4 直接免疫熒光法
根據(jù)Foster的方法[1]行直接免疫熒光檢查。
將所取病人結(jié)膜迅速包埋于OCT(USA)中，作5 μm冰凍切片；應(yīng)用熒光素結(jié)合的羊抗人IgG，IgA，IgM，C3(Berhing)，滴度1∶10，室溫下30 min；PBS浸洗兩次各20 min；蓋玻片固定，立即于熒光顯微鏡下讀片，記錄結(jié)果。
1.5 間接免疫熒光法
根據(jù)常規(guī)方法行間接免疫熒光檢查[3]。
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從低溫冰箱中取出病人血清和正常人結(jié)膜切片，置室溫1 h；同時(shí)取鼠食道切片，置干燥器30 min；病人血清1∶10滴蓋正常結(jié)膜切片和鼠食道切片，室溫孵育30 min；PBS浸洗2次各10 min；熒光素標(biāo)記的羊抗人IgG，IgM，IgA(Dako)1∶10，30 min；PBS浸洗2次各10 min；蓋玻片固定，立即熒光顯微鏡下讀片，記錄結(jié)果。以正常人血清和已確診為眼瘢痕性類天皰瘡的病人血清分別作陰性和陽(yáng)性對(duì)照。
2 結(jié)果
2.1 16例患者行直接免疫熒光法和間接免疫熒光法兩種檢查，且已查到詳細(xì)的病歷資料，見(jiàn)表1。其 中男性(M)5人，女性(F)11人；年齡37歲至90歲不等，平均年齡72歲；單純結(jié)膜受累(C)9例，合并皮膚(S)或口腔(O)粘膜受累7例；臨床分級(jí)均在Ⅱ級(jí)以上。
直接免疫熒光法證實(shí)結(jié)膜上皮細(xì)胞基底膜上有免疫復(fù)合物呈線狀沉積(主要是IgG，其次為IgA，C3，IgM)有6例，陽(yáng)性率占37.5%。
, 百拇醫(yī)藥
表1 16例DIF與IIF檢查結(jié)果一覽
Tab.1 The results of DIF and IIF in 16 cases No.
Sex
Age
Stage
Diagnosis
Tissue
DIF
IIF
R
L
Conjunctiva
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Esophagus
Conjunctiva
IgA
IgG
IgM
C3
IgA
IgG
IgM
IgA
IgG
IgM
1
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M
37
IIAIIIA1
IIAIIIA1
CP
C+S
-
-
-
+
-
-
-
-
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BMZ+
-
2
F
66
IIBIIA2
IIAIIIA2
CP
C+S
++
++
-
-
, 百拇醫(yī)藥 -
-
-
-
IIS+
-
3
M
74
IIAIIIA2
IIAIIIA1
OCP
C
++
, 百拇醫(yī)藥
++
+
-
-
-
-
-
-
-
4
F
67
IIAIIIB3
IICIIIA1
, 百拇醫(yī)藥
OCP
C
-
+
-
-
-
IIS++
-
-
IIS+
-
5
M
, 百拇醫(yī)藥
83
IIDIIIA2
IIDIIIA2-B3
CP
C+S
+
++
-
++
-
BMZ+/-
-
-
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-
-
6
F
73
IIAIIIA1
IIAIIIA2
OCP
C
-
-
-
-
-
, http://www.www.srpcoatings.com
-
-
-
-
-
7
M
82
IIAIIIA1
IIBIIIA1
OCP
C
-
-
, http://www.www.srpcoatings.com
-
-
-
BMZ++
IIS++
-
-
IIS+
BMZ+/-
-
8
F
61
IICIIIA1
, 百拇醫(yī)藥
IIBIIIA3
OCP
C
-
-
-
-
-
IIS++
-
-
IIS++
-
9
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F
78
IIAIIIA-B
IIA2
CP
C+S
-
-
-
-
-
-
-
BMZ+
, 百拇醫(yī)藥
BMZ++
-
10
F
72
IV
IIA
OCP
C
-
-
-
-
-
, http://www.www.srpcoatings.com
-
-
-
-
-
11
F
90
IIBIIIB3
IICIIIB3
OCP
C
-
-
, 百拇醫(yī)藥
-
-
-
BMZ++
-
IIS+
IIS ++
-
12
F
72
IIBIIIB1
IICIIIB2
, 百拇醫(yī)藥
OCP
C
-
-
-
-
-
IIS+
-
-
-
-
13
F
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69
IIBIIIA1
IICIIIB3
CP
C+O
+
++
-
-
-
-
-
-
, http://www.www.srpcoatings.com -
-
14
M
83
IICIIIB3
IICIIIB2
OCP
C
-
-
-
-
-
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-
-
-
-
-
15
F
75
IIBIIIC4
IIAIIIB2
CP
C+S
-
, 百拇醫(yī)藥 -
-
-
-
IIS+
-
-
IIS+
-
16
F
70
IIBIIB
IICIIIA1
, 百拇醫(yī)藥
CP
C+S
+
+
-
+
-
BMZ+
-
BMZ+
BMZ++
-
間接免疫熒光法檢測(cè)血清中抗基底膜(basement membrane zone，BMZ)抗體陽(yáng)性3例(18.7%)，抗細(xì)胞間基質(zhì)(intraepithelial intercellular substance，IIS)抗體陽(yáng)性6例(37.5%)，主要是IgG，其次為IgA，總陽(yáng)性率為56.25%。
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直接免疫熒光法與間接免疫熒光法間無(wú)明顯對(duì)應(yīng)關(guān)系。
2.2 34例病人行人結(jié)膜和鼠食道為基質(zhì)的間接免疫熒光檢查，男性10例，女性24例，以結(jié)膜為基質(zhì)的血清中抗基底膜抗體陽(yáng)性4例(11.76%)，抗細(xì)胞間物質(zhì)抗體陽(yáng)性14例(41.17%)，總陽(yáng)性率為52.9%，主要是IgG，其次是IgA，而IgM均為陰性。以鼠食道為基質(zhì)的陽(yáng)性率為38.2%，陽(yáng)性間有一定的對(duì)應(yīng)關(guān)系。3 討論
瘢痕性類天皰瘡(cicatricial pemphigoid，CP)是一種上皮下自身免疫性大皰病，常同時(shí)累及皮膚和粘膜，約70%的瘢痕性類天皰瘡出現(xiàn)眼部病變，故臨床上常以O(shè)CP來(lái)統(tǒng)稱自身免疫性結(jié)膜炎。眼瘢痕性類天皰瘡生物顯微鏡下可以觀察到，并可根據(jù)下穹隆深度喪失及瞼球粘連水平累及范圍及粘連帶數(shù)目進(jìn)行臨床分級(jí)，以評(píng)價(jià)收縮程度、進(jìn)展及治療效果[6]�，F(xiàn)在臨床上非典型病例逐漸增多，尤其是單純結(jié)膜病變的病例(本文中占56.25%)，很難鑒別診斷。國(guó)外近年已開(kāi)展應(yīng)用直接 免疫熒光法作為眼瘢痕性類天皰瘡的實(shí)驗(yàn)診斷方法，陽(yáng)性率為20%～84%[3，4，7]，而國(guó)內(nèi)眼科界對(duì)此病的研究?jī)H限于臨床個(gè)例報(bào)告。本文應(yīng)用直接免疫熒光技術(shù)檢測(cè)結(jié)膜上皮細(xì)胞基底膜上免疫球蛋白的沉積，陽(yáng)性率為37.5%，與文獻(xiàn)報(bào)道相符。
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間接免疫熒光法可以證實(shí)血清中抗皮膚或粘膜(包括結(jié)膜)的抗體，簡(jiǎn)便靈活，且可避免活檢的繁瑣和避免加重結(jié)膜瘢痕的形成，但研 究結(jié)果常為陰性或不穩(wěn)定[1，3，6，8，9]。極可能的解釋是所用于間接免疫熒光技術(shù)中的基質(zhì)較差，而理想的基質(zhì)應(yīng)是人結(jié)膜組織[8]。本文應(yīng)用人結(jié)膜為基質(zhì)的間接免疫熒光法檢測(cè)血清中抗結(jié)膜抗體，陽(yáng)性率高達(dá)52.9%，且與以鼠食道為基質(zhì)的IIF陽(yáng)性之間有相應(yīng)關(guān)系，重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定，與合作課題皮膚組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符，而目前國(guó)際上尚無(wú)應(yīng)用人結(jié)膜為基質(zhì)的間接免疫熒光法檢測(cè)自身免疫性結(jié)膜疾病的研究報(bào)道。作者認(rèn)為在有可能獲得正常人結(jié)膜的條件下，將間接免疫熒光技術(shù)作為眼瘢痕性類天皰瘡的實(shí)驗(yàn)診斷方法之一是可行的，并可在疾病和治療的不同階段進(jìn)行多次檢測(cè)，以觀察治療效果及疾病的發(fā)展，判斷預(yù)后。
值得注意的是應(yīng)用間接免疫熒光技術(shù)，有相當(dāng)一部分是抗細(xì)胞間物質(zhì)抗體陽(yáng)性，以前也有類似報(bào)道[10]，分析可能是由嚴(yán)重受損的上皮產(chǎn)生的天皰瘡樣抗體(抗細(xì)胞間物質(zhì)抗體)；也有可能這些病人患的是尋常型天皰瘡而眼部表現(xiàn)為眼瘢痕性類天皰瘡(尋常型天皰瘡為上皮內(nèi)自身免疫性大皰病，一般只影響皮膚)；還極有可能是存在一種新的類型，即不伴有自身免疫性皮膚病的上皮內(nèi)自身免疫性瘢痕性結(jié)膜炎。事實(shí)上，僅憑眼科臨床表現(xiàn)是很難區(qū)分不同類型的自身免疫性結(jié)膜炎的，而且其抗原特性和發(fā)病機(jī)理尚不 清楚，均有待于進(jìn)一步深入研究。
, 百拇醫(yī)藥
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(收稿：1999-01-15 修回：1999-11-22), http://www.www.srpcoatings.com
單位：趙普寧(570311 �？�，海南省人民醫(yī)院眼科)；Thanh Hoang-Xuan(法國(guó)巴黎國(guó)立BICHAT大學(xué)醫(yī)院中心)；Hervé Robin(法國(guó)巴黎國(guó)立BICHAT大學(xué)醫(yī)院中心)
關(guān)鍵詞：免疫熒光；眼瘢痕性類天皰瘡
眼科研究000210 摘要 目的探討免疫熒光技術(shù)對(duì)眼瘢痕性類天皰瘡(OCP)的實(shí)驗(yàn)診斷意義。方法應(yīng)用直接免疫熒光(DIF)檢測(cè)16例OCP患者的結(jié)膜和應(yīng)用間接免疫熒光(IIF)以鼠食道和正常人結(jié)膜為基質(zhì)檢測(cè)34例OCP患者的血清。結(jié)果DIF證實(shí)6例結(jié)膜上皮細(xì)胞基底膜上有免疫復(fù)合物(IgG和/或IgA)和/或C3呈線狀沉積。以結(jié)膜為基質(zhì)的IIF證實(shí)血清中抗基底膜(BMZ)抗體4例，抗細(xì)胞間物質(zhì)(IIS)抗體14例，總陽(yáng)性率為52.9%，而以鼠食道為基質(zhì)的IIF陽(yáng)性率為38.2%。結(jié)論DIF對(duì)診斷眼瘢痕性類天皰瘡是有用的；IIF也有助于眼瘢痕性類天皰瘡的診斷及療效評(píng)估；孤立的上皮內(nèi)自身免疫瘢痕性結(jié)膜炎可能為一新的類型。
, 百拇醫(yī)藥
分類號(hào) R 770.3
Immunofluorescent studies on ocular cicatricial pemphigoid
Zhao Puning，Thanh Hoang-Xuan，Hervé Robin.
Department of Ophthalmology，People’s Hospital of Hainan Province，Haikou 570311
Abstract ObjectiveTo study the usefulness of immunofluorescent technique for the diagnosis of ocular cicatricial pemphigoid. M ethodsThirty-four patients with ocular cicatr icial pemphigoid were studied by indirect immunofluorescence(IIF)on their sera with rat esophagus and normal human conjunctiva as tissue substrates.Direct immunofluorescence (DIF) was performed on the conjunctival biopsy specimens of 16 patients.ResultsIn 6 cases of the 16 patients，DIF of conjunctiva showed a linear deposition of immunoreactants (IgG and/or IgA) and/or C3 on the basement membrane zone (BMZ).Of the 34 patients，4 had detectable circulating anti-BMZ antibodies，14 and 7 patients demonstrated antibodies binding to the intraepithelial intercellular substance (IIS) of human conjunctiva and rat esophagus，respectively.The positive rate of IIF on human conjunctiva is 52.9% and on rat esophagus 38.2%.ConclusionsDIF is useful for the diagnosis of ocular cicatricial pemphigoid.IIF also can help for the diagnosis and the evaluation of the treatment of ocular cicatricial pemphigoid.Isolated intraepithelial autoimmune fibrozing conjunctivitis may be a new entity.
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Key word simmunofluorescence ocular cicatricial pemphigoid
眼瘢痕性類天皰瘡(ocular cicatricial pemphigoid，OCP)是以慢性進(jìn)行性結(jié)膜瘢痕形成為特征的自身免疫性疾病[1，2]，它可引起結(jié)膜穹隆縮短，內(nèi)翻倒睫，附屬淚腺損害，角膜和結(jié)膜角化，瞼球粘連，最終導(dǎo)致失明，法國(guó)稱之為眼假性天皰瘡或Lortat-Jacob病。該病沒(méi)有地理和種族差異，以老人和女性患病多見(jiàn)。臨床上常根據(jù)其臨床特征而予以診斷，免疫抑制劑治療有效。近年來(lái)研究證實(shí)該病的自身免疫性特征：在皮膚和粘膜上皮細(xì)胞的基底膜有免疫球蛋白(主要是IgG)和補(bǔ)體的沉積[1～4]，但國(guó)內(nèi)對(duì)該病的認(rèn)識(shí)和文獻(xiàn)報(bào)道甚少�，F(xiàn)將作者于1996年在法國(guó)巴黎國(guó)立BICHAT大學(xué)醫(yī)院中心進(jìn)修時(shí)應(yīng)用免疫熒光技術(shù)對(duì)眼瘢痕性類天皰瘡所做的部分研究報(bào)告如下。
1 資料與方法
, http://www.www.srpcoatings.com
1.1 病人及眼科檢查
收集1994～1996年34例符合眼瘢痕性類天皰瘡臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)者，并根據(jù)Tauber和Foster分級(jí)法予以臨床分級(jí)[5，6]。
眼瘢痕性類天皰瘡臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)：不明原因的雙眼非對(duì)稱性慢性進(jìn)展性結(jié)膜收縮，穹隆縮短，最后導(dǎo)致瞼球粘連，瞼內(nèi)翻倒睫，干眼癥和角膜混濁�？蓛H出現(xiàn)眼部病變，也可伴有全身其他部位的皮膚或粘膜損害，如口腔粘膜的水泡或大皰，可破潰形成瘢痕；頭面部的有水泡的紅斑，愈合后遺留光滑的萎縮性瘢痕；或腹股溝及肢體的復(fù)發(fā)性無(wú)瘢痕的暴發(fā)性囊皰。
眼瘢痕性類天皰瘡臨床分級(jí)(Tauber和Foster分級(jí)法)：
Ⅰ：慢性結(jié)膜炎，結(jié)膜下瘢痕和纖維化。
Ⅱ：出現(xiàn)任何程度的穹隆縮短，并根據(jù)下穹隆深度喪失的范圍細(xì)分為A(0～25%)，B(25%～50%)，C(50%～75%)，D(75%～100%)。
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Ⅲ：出現(xiàn)任何程度的瞼球粘連，并根據(jù)瞼球粘連所累及的水平范圍細(xì)分為A(0～25%)，B(25%～50%)，C(50%～75%)，D(75%～100%)，記錄瞼球粘連帶的數(shù)目。
Ⅳ：瞼緣粘連，瞼球固定。
1.2 活檢
(1)其中16例病人(男性5例，女性11例)行結(jié)膜活檢，均選擇病變較嚴(yán)重眼，于局麻下取上方角膜緣附近球結(jié)膜5 mm×2 mm，放入生理鹽水中，立即作直接免疫熒光(immunofluorescence，DIF)檢查，術(shù)眼不需縫合，涂抗生素糖皮質(zhì)激素眼膏，包眼24 h 。
(2)正常結(jié)膜取自單純老年性白內(nèi)障而無(wú)其他皮膚粘膜疾病患者，在白內(nèi)障摘出手術(shù)中，以同樣方式取球結(jié)膜，迅速包埋，作5 μm冰凍切片，-80℃低溫保存待用。
(3)取鼠內(nèi)臟組織(肝、食道等)同法作快速冰凍切片，低溫保存待用。
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1.3 血清
34例病人(男性10例，女性24例)均抽血制備血清，分裝多個(gè)小管(每管約0.5 ml)，-80℃保存，待行間接免疫熒光(IIF)檢查。
1.4 直接免疫熒光法
根據(jù)Foster的方法[1]行直接免疫熒光檢查。
將所取病人結(jié)膜迅速包埋于OCT(USA)中，作5 μm冰凍切片；應(yīng)用熒光素結(jié)合的羊抗人IgG，IgA，IgM，C3(Berhing)，滴度1∶10，室溫下30 min；PBS浸洗兩次各20 min；蓋玻片固定，立即于熒光顯微鏡下讀片，記錄結(jié)果。
1.5 間接免疫熒光法
根據(jù)常規(guī)方法行間接免疫熒光檢查[3]。
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從低溫冰箱中取出病人血清和正常人結(jié)膜切片，置室溫1 h；同時(shí)取鼠食道切片，置干燥器30 min；病人血清1∶10滴蓋正常結(jié)膜切片和鼠食道切片，室溫孵育30 min；PBS浸洗2次各10 min；熒光素標(biāo)記的羊抗人IgG，IgM，IgA(Dako)1∶10，30 min；PBS浸洗2次各10 min；蓋玻片固定，立即熒光顯微鏡下讀片，記錄結(jié)果。以正常人血清和已確診為眼瘢痕性類天皰瘡的病人血清分別作陰性和陽(yáng)性對(duì)照。
2 結(jié)果
2.1 16例患者行直接免疫熒光法和間接免疫熒光法兩種檢查，且已查到詳細(xì)的病歷資料，見(jiàn)表1。其 中男性(M)5人，女性(F)11人；年齡37歲至90歲不等，平均年齡72歲；單純結(jié)膜受累(C)9例，合并皮膚(S)或口腔(O)粘膜受累7例；臨床分級(jí)均在Ⅱ級(jí)以上。
直接免疫熒光法證實(shí)結(jié)膜上皮細(xì)胞基底膜上有免疫復(fù)合物呈線狀沉積(主要是IgG，其次為IgA，C3，IgM)有6例，陽(yáng)性率占37.5%。
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表1 16例DIF與IIF檢查結(jié)果一覽
Tab.1 The results of DIF and IIF in 16 cases No.
Sex
Age
Stage
Diagnosis
Tissue
DIF
IIF
R
L
Conjunctiva
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Esophagus
Conjunctiva
IgA
IgG
IgM
C3
IgA
IgG
IgM
IgA
IgG
IgM
1
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M
37
IIAIIIA1
IIAIIIA1
CP
C+S
-
-
-
+
-
-
-
-
, http://www.www.srpcoatings.com
BMZ+
-
2
F
66
IIBIIA2
IIAIIIA2
CP
C+S
++
++
-
-
, 百拇醫(yī)藥 -
-
-
-
IIS+
-
3
M
74
IIAIIIA2
IIAIIIA1
OCP
C
++
, 百拇醫(yī)藥
++
+
-
-
-
-
-
-
-
4
F
67
IIAIIIB3
IICIIIA1
, 百拇醫(yī)藥
OCP
C
-
+
-
-
-
IIS++
-
-
IIS+
-
5
M
, 百拇醫(yī)藥
83
IIDIIIA2
IIDIIIA2-B3
CP
C+S
+
++
-
++
-
BMZ+/-
-
-
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-
-
6
F
73
IIAIIIA1
IIAIIIA2
OCP
C
-
-
-
-
-
, http://www.www.srpcoatings.com
-
-
-
-
-
7
M
82
IIAIIIA1
IIBIIIA1
OCP
C
-
-
, http://www.www.srpcoatings.com
-
-
-
BMZ++
IIS++
-
-
IIS+
BMZ+/-
-
8
F
61
IICIIIA1
, 百拇醫(yī)藥
IIBIIIA3
OCP
C
-
-
-
-
-
IIS++
-
-
IIS++
-
9
, http://www.www.srpcoatings.com
F
78
IIAIIIA-B
IIA2
CP
C+S
-
-
-
-
-
-
-
BMZ+
, 百拇醫(yī)藥
BMZ++
-
10
F
72
IV
IIA
OCP
C
-
-
-
-
-
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-
-
-
-
-
11
F
90
IIBIIIB3
IICIIIB3
OCP
C
-
-
, 百拇醫(yī)藥
-
-
-
BMZ++
-
IIS+
IIS ++
-
12
F
72
IIBIIIB1
IICIIIB2
, 百拇醫(yī)藥
OCP
C
-
-
-
-
-
IIS+
-
-
-
-
13
F
, http://www.www.srpcoatings.com
69
IIBIIIA1
IICIIIB3
CP
C+O
+
++
-
-
-
-
-
-
, http://www.www.srpcoatings.com -
-
14
M
83
IICIIIB3
IICIIIB2
OCP
C
-
-
-
-
-
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-
-
-
-
-
15
F
75
IIBIIIC4
IIAIIIB2
CP
C+S
-
, 百拇醫(yī)藥 -
-
-
-
IIS+
-
-
IIS+
-
16
F
70
IIBIIB
IICIIIA1
, 百拇醫(yī)藥
CP
C+S
+
+
-
+
-
BMZ+
-
BMZ+
BMZ++
-
間接免疫熒光法檢測(cè)血清中抗基底膜(basement membrane zone，BMZ)抗體陽(yáng)性3例(18.7%)，抗細(xì)胞間基質(zhì)(intraepithelial intercellular substance，IIS)抗體陽(yáng)性6例(37.5%)，主要是IgG，其次為IgA，總陽(yáng)性率為56.25%。
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直接免疫熒光法與間接免疫熒光法間無(wú)明顯對(duì)應(yīng)關(guān)系。
2.2 34例病人行人結(jié)膜和鼠食道為基質(zhì)的間接免疫熒光檢查，男性10例，女性24例，以結(jié)膜為基質(zhì)的血清中抗基底膜抗體陽(yáng)性4例(11.76%)，抗細(xì)胞間物質(zhì)抗體陽(yáng)性14例(41.17%)，總陽(yáng)性率為52.9%，主要是IgG，其次是IgA，而IgM均為陰性。以鼠食道為基質(zhì)的陽(yáng)性率為38.2%，陽(yáng)性間有一定的對(duì)應(yīng)關(guān)系。3 討論
瘢痕性類天皰瘡(cicatricial pemphigoid，CP)是一種上皮下自身免疫性大皰病，常同時(shí)累及皮膚和粘膜，約70%的瘢痕性類天皰瘡出現(xiàn)眼部病變，故臨床上常以O(shè)CP來(lái)統(tǒng)稱自身免疫性結(jié)膜炎。眼瘢痕性類天皰瘡生物顯微鏡下可以觀察到，并可根據(jù)下穹隆深度喪失及瞼球粘連水平累及范圍及粘連帶數(shù)目進(jìn)行臨床分級(jí)，以評(píng)價(jià)收縮程度、進(jìn)展及治療效果[6]�，F(xiàn)在臨床上非典型病例逐漸增多，尤其是單純結(jié)膜病變的病例(本文中占56.25%)，很難鑒別診斷。國(guó)外近年已開(kāi)展應(yīng)用直接 免疫熒光法作為眼瘢痕性類天皰瘡的實(shí)驗(yàn)診斷方法，陽(yáng)性率為20%～84%[3，4，7]，而國(guó)內(nèi)眼科界對(duì)此病的研究?jī)H限于臨床個(gè)例報(bào)告。本文應(yīng)用直接免疫熒光技術(shù)檢測(cè)結(jié)膜上皮細(xì)胞基底膜上免疫球蛋白的沉積，陽(yáng)性率為37.5%，與文獻(xiàn)報(bào)道相符。
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間接免疫熒光法可以證實(shí)血清中抗皮膚或粘膜(包括結(jié)膜)的抗體，簡(jiǎn)便靈活，且可避免活檢的繁瑣和避免加重結(jié)膜瘢痕的形成，但研 究結(jié)果常為陰性或不穩(wěn)定[1，3，6，8，9]。極可能的解釋是所用于間接免疫熒光技術(shù)中的基質(zhì)較差，而理想的基質(zhì)應(yīng)是人結(jié)膜組織[8]。本文應(yīng)用人結(jié)膜為基質(zhì)的間接免疫熒光法檢測(cè)血清中抗結(jié)膜抗體，陽(yáng)性率高達(dá)52.9%，且與以鼠食道為基質(zhì)的IIF陽(yáng)性之間有相應(yīng)關(guān)系，重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定，與合作課題皮膚組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符，而目前國(guó)際上尚無(wú)應(yīng)用人結(jié)膜為基質(zhì)的間接免疫熒光法檢測(cè)自身免疫性結(jié)膜疾病的研究報(bào)道。作者認(rèn)為在有可能獲得正常人結(jié)膜的條件下，將間接免疫熒光技術(shù)作為眼瘢痕性類天皰瘡的實(shí)驗(yàn)診斷方法之一是可行的，并可在疾病和治療的不同階段進(jìn)行多次檢測(cè)，以觀察治療效果及疾病的發(fā)展，判斷預(yù)后。
值得注意的是應(yīng)用間接免疫熒光技術(shù)，有相當(dāng)一部分是抗細(xì)胞間物質(zhì)抗體陽(yáng)性，以前也有類似報(bào)道[10]，分析可能是由嚴(yán)重受損的上皮產(chǎn)生的天皰瘡樣抗體(抗細(xì)胞間物質(zhì)抗體)；也有可能這些病人患的是尋常型天皰瘡而眼部表現(xiàn)為眼瘢痕性類天皰瘡(尋常型天皰瘡為上皮內(nèi)自身免疫性大皰病，一般只影響皮膚)；還極有可能是存在一種新的類型，即不伴有自身免疫性皮膚病的上皮內(nèi)自身免疫性瘢痕性結(jié)膜炎。事實(shí)上，僅憑眼科臨床表現(xiàn)是很難區(qū)分不同類型的自身免疫性結(jié)膜炎的，而且其抗原特性和發(fā)病機(jī)理尚不 清楚，均有待于進(jìn)一步深入研究。
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(收稿：1999-01-15 修回：1999-11-22), http://www.www.srpcoatings.com