高效液相色譜法測(cè)定制霉滅滴膠囊中鹽酸小檗堿的含量
作者：李寶明 何麗一
單位：李寶明 何麗一(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)藥物研究所 北京 100050)
關(guān)鍵詞：制霉滅滴膠囊；高效液相色譜法；鹽酸小檗堿
藥物分析雜志00221 摘要 目的：為控制制霉滅滴膠囊中鹽酸小檗堿的含量，建立了反相高效液相色譜測(cè)定法。方法：色譜柱為T(mén)SKgel-ODS-80TS(250 mm×4.6 mm)，流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.05 mol.L-1磷酸二氫鈉(20∶30∶55)，流速：0.5 mL.min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為346 nm。結(jié)果：鹽酸小檗堿在18～150 ng范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r=0.999 9，回收率為99.0%。結(jié)論：本文建立的高效液相色譜法為測(cè)定制霉滅滴膠囊中鹽酸小檗堿的含量提供了可靠的分析方法。
, 百拇醫(yī)藥
Determination of Berberine Hydrochloride
in Zhimei Miedi Capsules by RP-HPLC
Li Baoming and He Liyi
(Institute of Materia Medica，Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College,Beijing 100050)
Abstract Objective：To establish a HPLC method for determining berberine in Zhimei Miedi capsules.Method:The reversed-phase system consisted of ODS silica gel column and methanol-acetonitrile-0.05 mol.L-1 sodium primary phosphate (20∶30∶55) as the mobile phase. The eluate with a flow rate of 0.5 mL.min-1 was detected at the wavelength of 346 nm.Results:The calibration curves were linear within the range of 18～150 ng (r=0.999 9),the average recovery was 99.0%.Conclusion:This method is simple,rapid,accurate and is suitable for the determination of berberine in Zhimei Miedi capsules.
, 百拇醫(yī)藥
Key words Zhimei Miedi capsules,HPLC,berberine
制霉滅滴膠囊是由蒲公英、白鮮皮、黃柏等13味中藥加工而成的純中藥復(fù)方制劑。用于治療霉菌性陰道炎、滴蟲(chóng)性陰道炎。文獻(xiàn)報(bào)道測(cè)定鹽酸小檗堿含量的方法很多，本文采用的HPLC法陰性對(duì)照對(duì)測(cè)定無(wú)影響，方法靈敏、快速。
1 儀器
島津LC-6A高效液相色譜儀；SPD-6A檢測(cè)器；美國(guó)HP-3394積分儀；固定相：C18硅膠(5 μm)，色譜柱：日本TSKgel-80TS(250 mm×4.6 mm)。
2 試藥
鹽酸小檗堿對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；甲醇：優(yōu)級(jí)純；無(wú)水乙醇：分析純；制霉滅滴膠囊及陰性對(duì)照由廣東永康藥業(yè)股份公司提供；關(guān)黃柏(Phellodendron amurense Rupr.)購(gòu)自廣州市藥材公司。
, 百拇醫(yī)藥
3 色譜條件
流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.05 mol。L-1磷酸二氫鈉(20∶30∶55)；檢測(cè)波長(zhǎng)：346 nm。流速：0.5 mL。min-1；AUFS：0.04。
4 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
4.1 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備 精密稱(chēng)取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解，配制成0.124 mg。mL-1儲(chǔ)備液。
4.2 可行性試驗(yàn) 精密量取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，用流動(dòng)相稀釋制成74.4 μg。mL-1的溶液，搖勻，進(jìn)樣10 μL；稱(chēng)取制霉滅滴膠囊內(nèi)容物及陰性對(duì)照樣品適量，按樣品測(cè)定方法提取，進(jìn)樣，色譜圖見(jiàn)圖1。由圖可知鹽酸小檗堿的保留時(shí)間約為16 min，制霉滅滴膠囊中其它成分對(duì)測(cè)定鹽酸小檗堿沒(méi)有影響。
, 百拇醫(yī)藥
圖1 制霉滅滴膠囊中鹽酸小檗堿的HPLC色譜圖
A.巴馬汀 B.鹽酸小檗堿
C.制霉滅滴膠囊黃柏陰性對(duì)照 D.制霉滅滴膠囊
1.巴馬汀 2.鹽酸小檗堿
4.3 線性關(guān)系考察 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.15，0.3，0.6，0.9，1.2 mL于10 mL量瓶中，分別用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣10 μL，以峰面積對(duì)對(duì)照品溶液濃度進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為：
Y=16 763X-12 010 r=0.999 9
鹽酸小檗堿的線性范圍為18～150 ng。
4.4 精密度測(cè)定 精密量取同一對(duì)照品儲(chǔ)備液0.6 mL于10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣10 μL，測(cè)定，其峰面積的RSD為1.6%(n=6)。
, http://www.www.srpcoatings.com
4.5 回收率測(cè)定 精密稱(chēng)取制霉滅滴膠囊內(nèi)容物1 g共5份，分別加入鹽酸小檗堿對(duì)照品儲(chǔ)備液2 mL，各份依照樣品含量測(cè)定項(xiàng)下方法操作，計(jì)算回收率，5次測(cè)定結(jié)果平均值為99.0%(RSD=2.7%)。
4.6 樣品測(cè)定 精密稱(chēng)取制霉滅滴膠囊內(nèi)容物2 g(平均每粒膠囊內(nèi)容物為450 mg)于圓底燒瓶中，精密加入無(wú)水乙醇50 mL，稱(chēng)重，于90 ℃回流提取3 h，放置室溫，加無(wú)水乙醇補(bǔ)至回流前的重量，搖勻，過(guò)濾，收集濾液，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇洗滌3次，與濾液合并后減壓蒸干，殘?jiān)昧鲃?dòng)相溶解并定容至10 mL，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)過(guò)濾，進(jìn)樣10 μL，記錄色譜峰面積，用外標(biāo)法計(jì)算含量。測(cè)定3批樣品，結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 3批制霉滅滴膠囊中鹽酸小檗堿每粒含量
測(cè)定結(jié)果(n=3) 批號(hào)
每粒含量/μg
, 百拇醫(yī)藥
RSD/%
960501
155.2
2.25
960502
210.1
1.25
960503
169.2
2.46
5 討論
流動(dòng)相中不含乙腈時(shí)，達(dá)不到基線分離。試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)乙腈為30%時(shí)，鹽酸小檗堿能與其它成分分開(kāi)。
提取后的樣品殘?jiān)昧鲃?dòng)相溶解，基線較好，并且沒(méi)有拖尾峰。
經(jīng)過(guò)提取方法、提取溶劑、提取時(shí)間及樣品與溶劑的比例等條件的比較，用優(yōu)化的條件進(jìn)行了加樣回收率測(cè)定，說(shuō)明在本文提取條件下，被測(cè)定成分能夠提取完全。
(本文于1999年9月16日收到), 百拇醫(yī)藥
單位：李寶明 何麗一(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)藥物研究所 北京 100050)
關(guān)鍵詞：制霉滅滴膠囊；高效液相色譜法；鹽酸小檗堿
藥物分析雜志00221 摘要 目的：為控制制霉滅滴膠囊中鹽酸小檗堿的含量，建立了反相高效液相色譜測(cè)定法。方法：色譜柱為T(mén)SKgel-ODS-80TS(250 mm×4.6 mm)，流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.05 mol.L-1磷酸二氫鈉(20∶30∶55)，流速：0.5 mL.min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為346 nm。結(jié)果：鹽酸小檗堿在18～150 ng范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r=0.999 9，回收率為99.0%。結(jié)論：本文建立的高效液相色譜法為測(cè)定制霉滅滴膠囊中鹽酸小檗堿的含量提供了可靠的分析方法。
, 百拇醫(yī)藥
Determination of Berberine Hydrochloride
in Zhimei Miedi Capsules by RP-HPLC
Li Baoming and He Liyi
(Institute of Materia Medica，Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College,Beijing 100050)
Abstract Objective：To establish a HPLC method for determining berberine in Zhimei Miedi capsules.Method:The reversed-phase system consisted of ODS silica gel column and methanol-acetonitrile-0.05 mol.L-1 sodium primary phosphate (20∶30∶55) as the mobile phase. The eluate with a flow rate of 0.5 mL.min-1 was detected at the wavelength of 346 nm.Results:The calibration curves were linear within the range of 18～150 ng (r=0.999 9),the average recovery was 99.0%.Conclusion:This method is simple,rapid,accurate and is suitable for the determination of berberine in Zhimei Miedi capsules.
, 百拇醫(yī)藥
Key words Zhimei Miedi capsules,HPLC,berberine
制霉滅滴膠囊是由蒲公英、白鮮皮、黃柏等13味中藥加工而成的純中藥復(fù)方制劑。用于治療霉菌性陰道炎、滴蟲(chóng)性陰道炎。文獻(xiàn)報(bào)道測(cè)定鹽酸小檗堿含量的方法很多，本文采用的HPLC法陰性對(duì)照對(duì)測(cè)定無(wú)影響，方法靈敏、快速。
1 儀器
島津LC-6A高效液相色譜儀；SPD-6A檢測(cè)器；美國(guó)HP-3394積分儀；固定相：C18硅膠(5 μm)，色譜柱：日本TSKgel-80TS(250 mm×4.6 mm)。
2 試藥
鹽酸小檗堿對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；甲醇：優(yōu)級(jí)純；無(wú)水乙醇：分析純；制霉滅滴膠囊及陰性對(duì)照由廣東永康藥業(yè)股份公司提供；關(guān)黃柏(Phellodendron amurense Rupr.)購(gòu)自廣州市藥材公司。
, 百拇醫(yī)藥
3 色譜條件
流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.05 mol。L-1磷酸二氫鈉(20∶30∶55)；檢測(cè)波長(zhǎng)：346 nm。流速：0.5 mL。min-1；AUFS：0.04。
4 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
4.1 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備 精密稱(chēng)取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解，配制成0.124 mg。mL-1儲(chǔ)備液。
4.2 可行性試驗(yàn) 精密量取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，用流動(dòng)相稀釋制成74.4 μg。mL-1的溶液，搖勻，進(jìn)樣10 μL；稱(chēng)取制霉滅滴膠囊內(nèi)容物及陰性對(duì)照樣品適量，按樣品測(cè)定方法提取，進(jìn)樣，色譜圖見(jiàn)圖1。由圖可知鹽酸小檗堿的保留時(shí)間約為16 min，制霉滅滴膠囊中其它成分對(duì)測(cè)定鹽酸小檗堿沒(méi)有影響。
, 百拇醫(yī)藥
圖1 制霉滅滴膠囊中鹽酸小檗堿的HPLC色譜圖
A.巴馬汀 B.鹽酸小檗堿
C.制霉滅滴膠囊黃柏陰性對(duì)照 D.制霉滅滴膠囊
1.巴馬汀 2.鹽酸小檗堿
4.3 線性關(guān)系考察 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.15，0.3，0.6，0.9，1.2 mL于10 mL量瓶中，分別用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣10 μL，以峰面積對(duì)對(duì)照品溶液濃度進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為：
Y=16 763X-12 010 r=0.999 9
鹽酸小檗堿的線性范圍為18～150 ng。
4.4 精密度測(cè)定 精密量取同一對(duì)照品儲(chǔ)備液0.6 mL于10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣10 μL，測(cè)定，其峰面積的RSD為1.6%(n=6)。
, http://www.www.srpcoatings.com
4.5 回收率測(cè)定 精密稱(chēng)取制霉滅滴膠囊內(nèi)容物1 g共5份，分別加入鹽酸小檗堿對(duì)照品儲(chǔ)備液2 mL，各份依照樣品含量測(cè)定項(xiàng)下方法操作，計(jì)算回收率，5次測(cè)定結(jié)果平均值為99.0%(RSD=2.7%)。
4.6 樣品測(cè)定 精密稱(chēng)取制霉滅滴膠囊內(nèi)容物2 g(平均每粒膠囊內(nèi)容物為450 mg)于圓底燒瓶中，精密加入無(wú)水乙醇50 mL，稱(chēng)重，于90 ℃回流提取3 h，放置室溫，加無(wú)水乙醇補(bǔ)至回流前的重量，搖勻，過(guò)濾，收集濾液，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇洗滌3次，與濾液合并后減壓蒸干，殘?jiān)昧鲃?dòng)相溶解并定容至10 mL，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)過(guò)濾，進(jìn)樣10 μL，記錄色譜峰面積，用外標(biāo)法計(jì)算含量。測(cè)定3批樣品，結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 3批制霉滅滴膠囊中鹽酸小檗堿每粒含量
測(cè)定結(jié)果(n=3) 批號(hào)
每粒含量/μg
, 百拇醫(yī)藥
RSD/%
960501
155.2
2.25
960502
210.1
1.25
960503
169.2
2.46
5 討論
流動(dòng)相中不含乙腈時(shí)，達(dá)不到基線分離。試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)乙腈為30%時(shí)，鹽酸小檗堿能與其它成分分開(kāi)。
提取后的樣品殘?jiān)昧鲃?dòng)相溶解，基線較好，并且沒(méi)有拖尾峰。
經(jīng)過(guò)提取方法、提取溶劑、提取時(shí)間及樣品與溶劑的比例等條件的比較，用優(yōu)化的條件進(jìn)行了加樣回收率測(cè)定，說(shuō)明在本文提取條件下，被測(cè)定成分能夠提取完全。
(本文于1999年9月16日收到), 百拇醫(yī)藥