高效液相色譜法測定氟嗎西尼及其注射液的含量
作者：李寶明 何麗一
單位：李寶明 何麗一(中國醫(yī)學科學院 中國協(xié)和醫(yī)科大學藥物研究所 北京 100050)
關鍵詞：高效液相色譜法；氟嗎西尼；注射液
藥物分析雜志000220 摘要 目的：建立氟嗎西尼及其注射液的含量測定方法。方法：反相高效液相色譜法。色譜柱為TURNER的Kromasil-ODS柱，200 mm×4.6 mm；流動相：甲醇-水(50∶50)；流速：1.0 mL*min-1，檢測波長為243 nm；內標：香草醛。結果：氟嗎西尼在80～400 ng范圍內呈良好的線性關系，r=0.999 9。制劑的回收率為98.6%，RSD=1.5%(n=5)。結論：本文建立的高效液相色譜法為測定氟嗎西尼及其制劑的含量提供了可靠的分析方法。
Determination of Flumazenil and Injection by RP-HPLC
, 百拇醫(yī)藥
Li Baoming and He Liyi
(Institute of Materia Medica,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College,Beijing 100050)
Abstract Objective：A HPLC method was established for the determination of flumazenil and injection.Method:The ODS reversed-phase column was used,mobile phase:methanol-water (50∶50),flow rate of 1.0 mL*min-1 and vanillin as internal standard.The detection was carried out with an UV detector (λ=243 nm).Results:The calibration curves were linear between 80～400 ng (r=0.999 9),the average recovery was 98.6%.Conclusion:This RP-HPLC method is simple,rapid,accurate and is suitable for the determination of flumazenil and injection.
, 百拇醫(yī)藥
Key words HPLC,flumazenil,injection
氟嗎西尼(8-氟-5，6-二氫-5-甲基-6-氧代-4H-咪唑并[1，5-α][1，4]苯并二氮NFDA1-3-甲酸乙酯，Flumazenil)是苯二氮NFDA1類藥物的拮抗劑，它能抑制苯二氮NFDA1類藥物與受體結合，而阻斷其中樞作用。臨床上用于逆轉全身麻醉手術使用苯二氮NFDA1類藥物所致的中樞鎮(zhèn)靜和催眠。本文用香草醛為內標，采用反相高效液相色譜法測定氟嗎西尼及其制劑的含量，試驗結果表明，本法操作簡便，重現性好，結果準確可靠。
1 儀器與試藥
島津LC-6A高效液相色譜儀；SPD-6A可調波長檢測器；HP 3394積分儀。
氟嗎西尼對照品(含量為99.5%)、原料、氟嗎西尼注射液，中國醫(yī)學科學院藥物研究所；香草醛為分析純；甲醇為優(yōu)級純；水為重蒸水。
, 百拇醫(yī)藥
2 色譜條件
色譜柱：TURNER的Kromasil-ODS柱，200 mm×4.6 mm；流動相：甲醇-水(50∶50)，流速：1.0 mL.min-1；檢測波長：243 nm。
3 線性關系
精密稱取氟嗎西尼對照品適量，加甲醇制成0.8 mg.mL-1的對照品溶液；精密稱取內標香草醛適量，加甲醇制成0.4 mg.mL-1的內標溶液。精密量取對照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL分別置于50 mL量瓶中，各精密加入內標溶液5.0 mL，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，進樣5 μL。結果表明，氟嗎西尼濃度在16～80 μg.mL-1范圍內與對照品和內標峰面積比呈良好的線性關系，其回歸方程為：
, 百拇醫(yī)藥
Y=1.0×10-3+6.08×10-3X r=0.999 9
4 精密度
精密吸取對照品溶液3.0 mL置50 mL量瓶中，加入內標溶液5 mL，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，連續(xù)進樣7次，每次5 μL，求得峰面積RSD為1.2%。
5 可行性試驗
取氟嗎西尼合成過程中的中間體1(mp.156～158 ℃)、2(mp.230～232 ℃)、3(mp.268～270 ℃)少許，加甲醇溶解，分別注入液相色譜儀，按色譜條件分離，它們的保留時間與分離度見表1。
表1 氟嗎西尼及其中間體的保留時間及分離度 樣品
保留時間/min
, 百拇醫(yī)藥
分離度
中間體3
8.17
中間體2
10.08
1.75
中間體1
14.75
2.70
氟嗎西尼
15.70
1.0
6 樣品測定
, 百拇醫(yī)藥
6.1 原料的含量測定 精密稱取氟嗎西尼50 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。精密量取2 mL置50 mL量瓶中，精密加入內標溶液5 mL，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，進樣5 μL，用內標法計算含量。7批原料含量測定結果見表2。色譜圖見圖1-A。
表2 原料含量測定結果(n=4) 樣品批號
含量/%
RSD/%
919401
99.55
0.95
919402
99.68
, http://www.www.srpcoatings.com
0.36
919403
99.24
0.47
960501
99.63
0.45
960502
99.75
0.20
960503
99.45
0.62
, 百拇醫(yī)藥
960504
100.1
0.78
6.2 注射劑的含量測定
回收率的測定：按氟嗎西尼注射液處方比例稱取氟嗎西尼對照品及輔料配制溶液，進行回收率試驗，5次測定結果的平均值為98.6%，RSD為1.5%。
圖1 氟嗎西尼及內標物的HPLC色譜圖
A.氟嗎西尼原料 B.氟嗎西尼注射液 C.賦型劑
1.內標(香草醛) 2.氟嗎西尼
注射劑的測定：取0.5 mg∶5 mL及1.0 mg∶10 mL 2種規(guī)格的注射液各5支，分別測定裝量后混勻，精密吸取20 mL置50 mL量瓶中，加內標溶液5 mL，加甲醇至刻度，搖勻，進樣5 μL測定。2種規(guī)格的6批樣品測定結果見表3。色譜圖見圖1-B。
, http://www.www.srpcoatings.com
表3 注射劑含量測定結果(n=4) 樣品規(guī)格
樣品批號
標示量 %
RSD/%
1.0 mg∶10 mL
950101
99.05
0.36
950102
98.35
0.58
950103
, http://www.www.srpcoatings.com
99.68
0.73
0.5 mg∶5 mL
950201
99.25
0.20
950202
99.32
0.52
950203
99.10
0.31
7 討論
對制劑的回收率的考察結果表明，賦型劑對測定無干擾(圖1-C)。
中間體1為N-(4-氟苯基)-α-羥亞胺基乙酰胺，中間體2為5-氟靛紅，中間體3為7-氟-3，4-二氫-4-甲基-2H-1，4-苯并二氮NFDA1-2，5(1H)-二酮，其確定另文發(fā)表。
(本文于1999年9月16日收到), http://www.www.srpcoatings.com
單位：李寶明 何麗一(中國醫(yī)學科學院 中國協(xié)和醫(yī)科大學藥物研究所 北京 100050)
關鍵詞：高效液相色譜法；氟嗎西尼；注射液
藥物分析雜志000220 摘要 目的：建立氟嗎西尼及其注射液的含量測定方法。方法：反相高效液相色譜法。色譜柱為TURNER的Kromasil-ODS柱，200 mm×4.6 mm；流動相：甲醇-水(50∶50)；流速：1.0 mL*min-1，檢測波長為243 nm；內標：香草醛。結果：氟嗎西尼在80～400 ng范圍內呈良好的線性關系，r=0.999 9。制劑的回收率為98.6%，RSD=1.5%(n=5)。結論：本文建立的高效液相色譜法為測定氟嗎西尼及其制劑的含量提供了可靠的分析方法。
Determination of Flumazenil and Injection by RP-HPLC
, 百拇醫(yī)藥
Li Baoming and He Liyi
(Institute of Materia Medica,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College,Beijing 100050)
Abstract Objective：A HPLC method was established for the determination of flumazenil and injection.Method:The ODS reversed-phase column was used,mobile phase:methanol-water (50∶50),flow rate of 1.0 mL*min-1 and vanillin as internal standard.The detection was carried out with an UV detector (λ=243 nm).Results:The calibration curves were linear between 80～400 ng (r=0.999 9),the average recovery was 98.6%.Conclusion:This RP-HPLC method is simple,rapid,accurate and is suitable for the determination of flumazenil and injection.
, 百拇醫(yī)藥
Key words HPLC,flumazenil,injection
氟嗎西尼(8-氟-5，6-二氫-5-甲基-6-氧代-4H-咪唑并[1，5-α][1，4]苯并二氮NFDA1-3-甲酸乙酯，Flumazenil)是苯二氮NFDA1類藥物的拮抗劑，它能抑制苯二氮NFDA1類藥物與受體結合，而阻斷其中樞作用。臨床上用于逆轉全身麻醉手術使用苯二氮NFDA1類藥物所致的中樞鎮(zhèn)靜和催眠。本文用香草醛為內標，采用反相高效液相色譜法測定氟嗎西尼及其制劑的含量，試驗結果表明，本法操作簡便，重現性好，結果準確可靠。
1 儀器與試藥
島津LC-6A高效液相色譜儀；SPD-6A可調波長檢測器；HP 3394積分儀。
氟嗎西尼對照品(含量為99.5%)、原料、氟嗎西尼注射液，中國醫(yī)學科學院藥物研究所；香草醛為分析純；甲醇為優(yōu)級純；水為重蒸水。
, 百拇醫(yī)藥
2 色譜條件
色譜柱：TURNER的Kromasil-ODS柱，200 mm×4.6 mm；流動相：甲醇-水(50∶50)，流速：1.0 mL.min-1；檢測波長：243 nm。
3 線性關系
精密稱取氟嗎西尼對照品適量，加甲醇制成0.8 mg.mL-1的對照品溶液；精密稱取內標香草醛適量，加甲醇制成0.4 mg.mL-1的內標溶液。精密量取對照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL分別置于50 mL量瓶中，各精密加入內標溶液5.0 mL，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，進樣5 μL。結果表明，氟嗎西尼濃度在16～80 μg.mL-1范圍內與對照品和內標峰面積比呈良好的線性關系，其回歸方程為：
, 百拇醫(yī)藥
Y=1.0×10-3+6.08×10-3X r=0.999 9
4 精密度
精密吸取對照品溶液3.0 mL置50 mL量瓶中，加入內標溶液5 mL，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，連續(xù)進樣7次，每次5 μL，求得峰面積RSD為1.2%。
5 可行性試驗
取氟嗎西尼合成過程中的中間體1(mp.156～158 ℃)、2(mp.230～232 ℃)、3(mp.268～270 ℃)少許，加甲醇溶解，分別注入液相色譜儀，按色譜條件分離，它們的保留時間與分離度見表1。
表1 氟嗎西尼及其中間體的保留時間及分離度 樣品
保留時間/min
, 百拇醫(yī)藥
分離度
中間體3
8.17
中間體2
10.08
1.75
中間體1
14.75
2.70
氟嗎西尼
15.70
1.0
6 樣品測定
, 百拇醫(yī)藥
6.1 原料的含量測定 精密稱取氟嗎西尼50 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。精密量取2 mL置50 mL量瓶中，精密加入內標溶液5 mL，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，進樣5 μL，用內標法計算含量。7批原料含量測定結果見表2。色譜圖見圖1-A。
表2 原料含量測定結果(n=4) 樣品批號
含量/%
RSD/%
919401
99.55
0.95
919402
99.68
, http://www.www.srpcoatings.com
0.36
919403
99.24
0.47
960501
99.63
0.45
960502
99.75
0.20
960503
99.45
0.62
, 百拇醫(yī)藥
960504
100.1
0.78
6.2 注射劑的含量測定
回收率的測定：按氟嗎西尼注射液處方比例稱取氟嗎西尼對照品及輔料配制溶液，進行回收率試驗，5次測定結果的平均值為98.6%，RSD為1.5%。
圖1 氟嗎西尼及內標物的HPLC色譜圖
A.氟嗎西尼原料 B.氟嗎西尼注射液 C.賦型劑
1.內標(香草醛) 2.氟嗎西尼
注射劑的測定：取0.5 mg∶5 mL及1.0 mg∶10 mL 2種規(guī)格的注射液各5支，分別測定裝量后混勻，精密吸取20 mL置50 mL量瓶中，加內標溶液5 mL，加甲醇至刻度，搖勻，進樣5 μL測定。2種規(guī)格的6批樣品測定結果見表3。色譜圖見圖1-B。
, http://www.www.srpcoatings.com
表3 注射劑含量測定結果(n=4) 樣品規(guī)格
樣品批號
標示量 %
RSD/%
1.0 mg∶10 mL
950101
99.05
0.36
950102
98.35
0.58
950103
, http://www.www.srpcoatings.com
99.68
0.73
0.5 mg∶5 mL
950201
99.25
0.20
950202
99.32
0.52
950203
99.10
0.31
7 討論
對制劑的回收率的考察結果表明，賦型劑對測定無干擾(圖1-C)。
中間體1為N-(4-氟苯基)-α-羥亞胺基乙酰胺，中間體2為5-氟靛紅，中間體3為7-氟-3，4-二氫-4-甲基-2H-1，4-苯并二氮NFDA1-2，5(1H)-二酮，其確定另文發(fā)表。
(本文于1999年9月16日收到), http://www.www.srpcoatings.com