尼麥角林及片劑的HPLC測定
作者：李建珍 趙江
單位：李建珍 趙江(普強(qiáng)蘇州制藥有限公司質(zhì)監(jiān)部 蘇州 215011)
關(guān)鍵詞：尼麥角林；HPLC；尼麥角林片
藥物分析雜志000219 摘要 目的：采用HPLC法測定尼麥角林原材料及其片劑的含量。方法：以LUNA C8為色譜柱，磷酸鹽溶液-乙腈(420∶580)為流動相，檢測波長為280 nm。結(jié)果：線性關(guān)系r=0.999 99，平均回收率為100.0%，RSD=0.75%(n=5)。結(jié)論：方法簡便，準(zhǔn)確，適合于該產(chǎn)品的質(zhì)量檢驗(yàn)分析。
HPLC Determination of Nicergoline and Its Tablets
Li Jianzhen and Zhao Jiang
, 百拇醫(yī)藥
(Upjohn Suzhou Pharmaceutical Company Limited,Suzhou 215011)
Abstract Objective：Nicergoline and its tablets were determined by a new HPLC method.Methods:The separation was performed on a LUNA C8 column.The mobile phase was composed of acetonitrile-phosphate salt solution(580∶420).The UV detector was set at 280 nm.Results:The average recovery was 100.0%,RSD=0.75%(n=5),with good linear relationship(r=0.999 99).Conclusion:The method was simple and accurate and can be used for the quality control of nicergoline and its tablets.
, 百拇醫(yī)藥
Key words nicergoline,HPLC,nicergoline tablets
尼麥角林是一種麥角林的衍生物。其化學(xué)式見圖1，分子式為C24H26O3N3Br。尼麥角林藥物在胃腸道外途徑給藥時(shí)具有拮抗α-腎上腺素的作用，主要治療急性或慢性腦血管障礙或腦血管代謝功能不良，急性或慢性周圍循環(huán)障礙。本文改進(jìn)了尼麥角林及片劑HPLC測定的色譜條件，結(jié)果滿意。
圖1 尼麥角林化學(xué)式
1 儀器與試藥
HP1050高效液相色譜儀，MWD檢測器，HP化學(xué)工作站及HP LaserJet 4 Plus打印機(jī)。
, http://www.www.srpcoatings.com
尼麥角林對照品，法瑪西亞&普強(qiáng)美國總部提供，含量99.3%(按麥角溴煙酯計(jì))；尼麥角林原料及片劑，由意大利愛寶大藥廠提供；乙腈為色譜純試劑，磷酸氫二鉀、85%磷酸、三乙胺均為分析純。
2 色譜條件
色譜柱：LUNA C8柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流動相：乙腈-磷酸鹽溶液(取磷酸氫二鉀1.74 g，溶解于900 mL水中，用85%磷酸調(diào)pH為6，再用水稀釋到1 000 mL(580∶420)；流速：1.0 mL.min-1；檢測波長：280 nm；進(jìn)樣量：10 μL。在本色譜條件下得到的主藥與雜質(zhì)色譜圖見圖2-A、B，按麥角溴煙酯計(jì)算理論板數(shù)為11 181。
圖2 色譜圖
, http://www.www.srpcoatings.com
A.尼麥角林 B.原料藥有關(guān)物質(zhì)檢查 C.空白輔料
1. 甲基光麥角醇(3.03 min) 2. 1-去甲基尼麥角林(4.04 min)
3. 尼麥角林(5.01 min) 4. 去甲氧基尼麥角林(8.12 min)
3 專屬性
3.1 原料 根據(jù)生產(chǎn)工藝，其可能引入的雜質(zhì)主要有1-去甲基尼麥角林，甲基光麥角醇，去甲氧基尼麥角林。取該3種雜質(zhì)照含量測定項(xiàng)下方法進(jìn)樣，記錄色譜圖。保留時(shí)間1-去甲基尼麥角林為4.03 min，甲基光麥角醇為3.03 min，去甲氧基尼麥角林為8.12 min。在該色譜條件下尼麥角林(保留時(shí)間為5.0 min)與這3種雜質(zhì)能完全分離。
3.2 高溫試驗(yàn) 樣品在120 ℃加熱6 h，在4.03 min產(chǎn)生一分解產(chǎn)物，即1-去甲基尼麥角林，與主峰完全分離。
, 百拇醫(yī)藥
3.3 光照試驗(yàn) 樣品在澄明度測定儀下，以3 000 lx光照度放置1 d，在保留時(shí)間為4.07 min處產(chǎn)生一分解產(chǎn)物，即1-去甲基尼麥角林，與主峰完全分離。
3.4 空白輔料 根據(jù)尼麥角林片的處方，制備不含尼麥角林測定空白片，照含量測定項(xiàng)下方法處理，進(jìn)樣，結(jié)果表明輔料不干擾尼麥角林的測定，見圖2-C。
4 雜質(zhì)峰歸屬
前述專屬性試驗(yàn)表明，原料樣品中保留時(shí)間為4.03 min的雜質(zhì)與1-去甲基尼麥角林的保留時(shí)間一致，證明此雜質(zhì)為1-去甲基尼麥角林。
5 線性關(guān)系
取尼麥角林對照品適量，精密稱定，加流動相制成0.83 mg.mL-1的溶液，分別精密量取此液1，2，3，4，5 mL，用流動相稀釋到25 mL，精密量取10 μL注入色譜儀，測定。在30～200 μg.mL-1范圍內(nèi)色譜峰面積(A)與對照品濃度(X)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程：
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A=-0.38+1.5×104X r=0.999 99
6 重復(fù)性試驗(yàn)
取同一樣品，分別進(jìn)行樣品溶液的制備、測定，重復(fù)6次，結(jié)果RSD為0.18%。
7 回收率試驗(yàn)
取尼麥角林適量，精密稱定，按照尼麥角林片處方制備模擬樣品5份。各份均依片劑含量測定項(xiàng)下方法操作，計(jì)算回收率。平均回收率為100.0%，RSD為0.75%(n=5)。
8 原料藥有關(guān)物質(zhì)及其含量測定
取尼麥角林原料藥適量，精密稱定，加流動相制成每1 mL中約含0.8 mg的溶液，照前述色譜條件進(jìn)行分離測定，記錄色譜圖至主峰保留時(shí)間的1倍。結(jié)果見表1。
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表1 原料藥有關(guān)物質(zhì)及其含量(%，n=2) 批號
有關(guān)物質(zhì)
主藥(按麥角溴煙酯計(jì))
1998-132
0.64
100.8
1998-061
0.72
96.0
1998-062
0.70
100.0
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9 片劑含量測定
取本品20片，精密稱定，碾細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于麥角溴煙酯30 mg)，置50 mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋到刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液進(jìn)行HPLC測定，外標(biāo)法計(jì)算。3批樣品測定結(jié)果(標(biāo)示量%)分別為98.9%，102.0%，100.7%。
10 討論
10.1 本品合成過程中可能會帶進(jìn)原料、中間體、副產(chǎn)物等雜質(zhì)，且本品遇光、遇熱均不穩(wěn)定，易產(chǎn)生分解產(chǎn)物。據(jù)知主要的雜質(zhì)為1-去甲基尼麥角林、甲基光麥角醇、去甲氧基尼麥角林和未知雜質(zhì)[1]。專屬性研究表明，本法能有效分離這些雜質(zhì)，原料、中間體、分解產(chǎn)物均不干擾尼麥角林測定。
10.2 本法色譜條件簡單，在乙腈-磷酸鹽溶液流動相中，色譜峰擴(kuò)散、拖尾，加入三乙胺1 mL于每1 000 mL流動相中后，色譜峰變窄，拖尾現(xiàn)象消失。
, 百拇醫(yī)藥
10.3 本品用流動相溶解后立即進(jìn)樣，測定主峰峰面積為12 696.5，24 h后再進(jìn)樣測定主峰峰面積為12 842.6，表明用本流動相配制的樣品溶液穩(wěn)定。
10.4 尼麥角林的活性是通過吸收水解成麥角溴煙酯進(jìn)入體內(nèi)后起作用的，含量應(yīng)以有效部分麥角溴煙酯計(jì)，因此原料藥的含量及片劑的規(guī)格均按麥角溴煙酯計(jì)。原料藥的含量為含麥角溴煙酯不得低于95%，其片劑的含量應(yīng)為標(biāo)示量的90%到120%(如標(biāo)示量為10 mg，則含量為9 mg到12 mg，如標(biāo)示量為30 mg，則含量為27 mg到36 mg)。
10.5 尼麥角林含量的測定在開發(fā)的早期采用紫外分光光度法，在280 nm處的吸收度與濃度成線性關(guān)系，其雜質(zhì)的測定采用TLC法[2]。因尼麥角林的雜質(zhì)在280 nm處有較大的吸收度，對含量的測定有較大的影響，測定結(jié)果的準(zhǔn)確度較差。本文采用HPLC法能有效地分離雜質(zhì)，測定結(jié)果的準(zhǔn)確度較好。
參考文獻(xiàn)
1，尼麥角林進(jìn)口藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn).BX19990006
2，USP.Ⅹ Ⅹ Ⅲ.621
(本文于1999年9月6日收到), http://www.www.srpcoatings.com
單位：李建珍 趙江(普強(qiáng)蘇州制藥有限公司質(zhì)監(jiān)部 蘇州 215011)
關(guān)鍵詞：尼麥角林；HPLC；尼麥角林片
藥物分析雜志000219 摘要 目的：采用HPLC法測定尼麥角林原材料及其片劑的含量。方法：以LUNA C8為色譜柱，磷酸鹽溶液-乙腈(420∶580)為流動相，檢測波長為280 nm。結(jié)果：線性關(guān)系r=0.999 99，平均回收率為100.0%，RSD=0.75%(n=5)。結(jié)論：方法簡便，準(zhǔn)確，適合于該產(chǎn)品的質(zhì)量檢驗(yàn)分析。
HPLC Determination of Nicergoline and Its Tablets
Li Jianzhen and Zhao Jiang
, 百拇醫(yī)藥
(Upjohn Suzhou Pharmaceutical Company Limited,Suzhou 215011)
Abstract Objective：Nicergoline and its tablets were determined by a new HPLC method.Methods:The separation was performed on a LUNA C8 column.The mobile phase was composed of acetonitrile-phosphate salt solution(580∶420).The UV detector was set at 280 nm.Results:The average recovery was 100.0%,RSD=0.75%(n=5),with good linear relationship(r=0.999 99).Conclusion:The method was simple and accurate and can be used for the quality control of nicergoline and its tablets.
, 百拇醫(yī)藥
Key words nicergoline,HPLC,nicergoline tablets
尼麥角林是一種麥角林的衍生物。其化學(xué)式見圖1，分子式為C24H26O3N3Br。尼麥角林藥物在胃腸道外途徑給藥時(shí)具有拮抗α-腎上腺素的作用，主要治療急性或慢性腦血管障礙或腦血管代謝功能不良，急性或慢性周圍循環(huán)障礙。本文改進(jìn)了尼麥角林及片劑HPLC測定的色譜條件，結(jié)果滿意。
圖1 尼麥角林化學(xué)式
1 儀器與試藥
HP1050高效液相色譜儀，MWD檢測器，HP化學(xué)工作站及HP LaserJet 4 Plus打印機(jī)。
, http://www.www.srpcoatings.com
尼麥角林對照品，法瑪西亞&普強(qiáng)美國總部提供，含量99.3%(按麥角溴煙酯計(jì))；尼麥角林原料及片劑，由意大利愛寶大藥廠提供；乙腈為色譜純試劑，磷酸氫二鉀、85%磷酸、三乙胺均為分析純。
2 色譜條件
色譜柱：LUNA C8柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流動相：乙腈-磷酸鹽溶液(取磷酸氫二鉀1.74 g，溶解于900 mL水中，用85%磷酸調(diào)pH為6，再用水稀釋到1 000 mL(580∶420)；流速：1.0 mL.min-1；檢測波長：280 nm；進(jìn)樣量：10 μL。在本色譜條件下得到的主藥與雜質(zhì)色譜圖見圖2-A、B，按麥角溴煙酯計(jì)算理論板數(shù)為11 181。
圖2 色譜圖
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A.尼麥角林 B.原料藥有關(guān)物質(zhì)檢查 C.空白輔料
1. 甲基光麥角醇(3.03 min) 2. 1-去甲基尼麥角林(4.04 min)
3. 尼麥角林(5.01 min) 4. 去甲氧基尼麥角林(8.12 min)
3 專屬性
3.1 原料 根據(jù)生產(chǎn)工藝，其可能引入的雜質(zhì)主要有1-去甲基尼麥角林，甲基光麥角醇，去甲氧基尼麥角林。取該3種雜質(zhì)照含量測定項(xiàng)下方法進(jìn)樣，記錄色譜圖。保留時(shí)間1-去甲基尼麥角林為4.03 min，甲基光麥角醇為3.03 min，去甲氧基尼麥角林為8.12 min。在該色譜條件下尼麥角林(保留時(shí)間為5.0 min)與這3種雜質(zhì)能完全分離。
3.2 高溫試驗(yàn) 樣品在120 ℃加熱6 h，在4.03 min產(chǎn)生一分解產(chǎn)物，即1-去甲基尼麥角林，與主峰完全分離。
, 百拇醫(yī)藥
3.3 光照試驗(yàn) 樣品在澄明度測定儀下，以3 000 lx光照度放置1 d，在保留時(shí)間為4.07 min處產(chǎn)生一分解產(chǎn)物，即1-去甲基尼麥角林，與主峰完全分離。
3.4 空白輔料 根據(jù)尼麥角林片的處方，制備不含尼麥角林測定空白片，照含量測定項(xiàng)下方法處理，進(jìn)樣，結(jié)果表明輔料不干擾尼麥角林的測定，見圖2-C。
4 雜質(zhì)峰歸屬
前述專屬性試驗(yàn)表明，原料樣品中保留時(shí)間為4.03 min的雜質(zhì)與1-去甲基尼麥角林的保留時(shí)間一致，證明此雜質(zhì)為1-去甲基尼麥角林。
5 線性關(guān)系
取尼麥角林對照品適量，精密稱定，加流動相制成0.83 mg.mL-1的溶液，分別精密量取此液1，2，3，4，5 mL，用流動相稀釋到25 mL，精密量取10 μL注入色譜儀，測定。在30～200 μg.mL-1范圍內(nèi)色譜峰面積(A)與對照品濃度(X)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程：
, http://www.www.srpcoatings.com
A=-0.38+1.5×104X r=0.999 99
6 重復(fù)性試驗(yàn)
取同一樣品，分別進(jìn)行樣品溶液的制備、測定，重復(fù)6次，結(jié)果RSD為0.18%。
7 回收率試驗(yàn)
取尼麥角林適量，精密稱定，按照尼麥角林片處方制備模擬樣品5份。各份均依片劑含量測定項(xiàng)下方法操作，計(jì)算回收率。平均回收率為100.0%，RSD為0.75%(n=5)。
8 原料藥有關(guān)物質(zhì)及其含量測定
取尼麥角林原料藥適量，精密稱定，加流動相制成每1 mL中約含0.8 mg的溶液，照前述色譜條件進(jìn)行分離測定，記錄色譜圖至主峰保留時(shí)間的1倍。結(jié)果見表1。
, http://www.www.srpcoatings.com
表1 原料藥有關(guān)物質(zhì)及其含量(%，n=2) 批號
有關(guān)物質(zhì)
主藥(按麥角溴煙酯計(jì))
1998-132
0.64
100.8
1998-061
0.72
96.0
1998-062
0.70
100.0
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9 片劑含量測定
取本品20片，精密稱定，碾細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于麥角溴煙酯30 mg)，置50 mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋到刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液進(jìn)行HPLC測定，外標(biāo)法計(jì)算。3批樣品測定結(jié)果(標(biāo)示量%)分別為98.9%，102.0%，100.7%。
10 討論
10.1 本品合成過程中可能會帶進(jìn)原料、中間體、副產(chǎn)物等雜質(zhì)，且本品遇光、遇熱均不穩(wěn)定，易產(chǎn)生分解產(chǎn)物。據(jù)知主要的雜質(zhì)為1-去甲基尼麥角林、甲基光麥角醇、去甲氧基尼麥角林和未知雜質(zhì)[1]。專屬性研究表明，本法能有效分離這些雜質(zhì)，原料、中間體、分解產(chǎn)物均不干擾尼麥角林測定。
10.2 本法色譜條件簡單，在乙腈-磷酸鹽溶液流動相中，色譜峰擴(kuò)散、拖尾，加入三乙胺1 mL于每1 000 mL流動相中后，色譜峰變窄，拖尾現(xiàn)象消失。
, 百拇醫(yī)藥
10.3 本品用流動相溶解后立即進(jìn)樣，測定主峰峰面積為12 696.5，24 h后再進(jìn)樣測定主峰峰面積為12 842.6，表明用本流動相配制的樣品溶液穩(wěn)定。
10.4 尼麥角林的活性是通過吸收水解成麥角溴煙酯進(jìn)入體內(nèi)后起作用的，含量應(yīng)以有效部分麥角溴煙酯計(jì)，因此原料藥的含量及片劑的規(guī)格均按麥角溴煙酯計(jì)。原料藥的含量為含麥角溴煙酯不得低于95%，其片劑的含量應(yīng)為標(biāo)示量的90%到120%(如標(biāo)示量為10 mg，則含量為9 mg到12 mg，如標(biāo)示量為30 mg，則含量為27 mg到36 mg)。
10.5 尼麥角林含量的測定在開發(fā)的早期采用紫外分光光度法，在280 nm處的吸收度與濃度成線性關(guān)系，其雜質(zhì)的測定采用TLC法[2]。因尼麥角林的雜質(zhì)在280 nm處有較大的吸收度，對含量的測定有較大的影響，測定結(jié)果的準(zhǔn)確度較差。本文采用HPLC法能有效地分離雜質(zhì)，測定結(jié)果的準(zhǔn)確度較好。
參考文獻(xiàn)
1，尼麥角林進(jìn)口藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn).BX19990006
2，USP.Ⅹ Ⅹ Ⅲ.621
(本文于1999年9月6日收到), http://www.www.srpcoatings.com