晚期妊娠引產(chǎn)產(chǎn)婦及其新生兒血漿中的米非司酮濃度測定
作者：高晨 趙志剛 王越 羅勁松 任淑萍
單位：高晨 趙志剛 王越 羅勁松 任淑萍(北京天壇醫(yī)院 100050)
關(guān)鍵詞：米非司酮；HPLC；妊娠晚期；新生兒
藥物分析雜志000217 摘要 目的：研究米非司酮用于晚期妊娠引產(chǎn)對新生兒的影響，評(píng)價(jià)其對母嬰的安全性。方法：采用高效液相色譜法測定產(chǎn)婦及新生兒血漿中的米非司酮濃度。結(jié)果：服藥組產(chǎn)婦產(chǎn)程活躍期血漿中的米非司酮濃度為(323±137)ng.mL-1、臍血濃度為(95.9±51.0)ng.mL-1，其新生兒出生后24 h的血藥濃度為(39.8±20.7)ng.mL-1，均與對照組有顯著差異(P<0.05)，且臍血濃度與產(chǎn)婦產(chǎn)程活躍期血漿中的米非司酮濃度成正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.72，臍/母血藥濃度比值為0.30。出生后72 h血藥濃度(27.7±9.9)ng.mL-1與對照組比無顯著差異(P>0.05)。結(jié)論：該研究為米非司酮用于晚期妊娠引產(chǎn)的安全性提供一定的科學(xué)依據(jù)。
, 百拇醫(yī)藥
HPLC Assay for Mifepristone in Plasma of Parturient and Their Newborns
Gao Chen, Zhao Zhigang, Wang Yue and Ren Shuping
(Tiantan Hospital, Beijing 100050)
Abstract Objective：To study the effect upon the newborns after the parturient treatment with mifepristone.Methods:The concentration of mifepristone in the plasma of parturient，their newborns and umbilical cord was assayed with HPLC.Results:After administrated with mifepristone, the parturient, umbilical plasma level and their newborns’ plasma concentration 24 h and 72 h after their birth were detected to be (323±137)ng.mL-1, (95.9±51.0)ng.mL-1，(39.8±20.7)ng.mL-1;compared with control group, the difference were statistically significant; and 72 h after their birth was (27.7±9.9)ng.mL-1, there wasnt significant difference with control group ；the umbilical plasma concentration had positive correlation with the maternal, the ratio of umbilical/maternal mifepristone level was 0.30,the correlation coefficient was 0.72.Conclusion:This study will provide a scientific basis for the safety of using mifepristone on parturient.
, 百拇醫(yī)藥
Key words mifepristone, HPLC, newborn, parturient
米非司酮用于晚期妊娠引產(chǎn)現(xiàn)已得到較廣泛的研究[1,2]，但關(guān)于米非司酮用于晚期妊娠引產(chǎn)對新生兒的安全性是主要待研究問題[3]。本文用HPLC法測定產(chǎn)婦靜脈血、臍血、新生兒血漿中的米非司酮濃度，通過隨機(jī)對照研究闡述了3者之間的關(guān)系，并對服用與未服用米非司酮產(chǎn)婦所生新生兒血漿中米非司酮的濃度進(jìn)行了比較，為評(píng)價(jià)藥物安全性及臨床用藥提供參考。
1 藥品與試劑
米非司酮對照品(北京第三制藥廠，含量85.0% ，批號(hào)971115)；米非司酮片(北京第三制藥廠，每片50 mg)；米索前列醇片(西爾大藥廠 每片200 μg)；甲醇(色譜純 )；乙腈(色譜純)；正己烷、二氯甲烷(分析純)重蒸后使用。
, 百拇醫(yī)藥
2 儀器和色譜條件
Waters 510泵；Waters 484 UV檢測器；色譜柱 :OUYA-RP18(4.6 mm×150 mm)；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-水(42∶28∶30)，pH=4.7；流速1.0 mL。min-1；檢測波長302 nm；進(jìn)樣量20 μL。
3 對照品儲(chǔ)備液
取米非司酮對照品適量,用甲醇溶解制成100 μg。mL-1的溶液, 4 ℃冷藏備用。臨用時(shí)，用甲醇配制成所需濃度的標(biāo)準(zhǔn)液。
4 受試者
38名健康初產(chǎn)婦及其新生兒。經(jīng)產(chǎn)婦同意，隨機(jī)將38名健康初產(chǎn)婦分為服藥組和對照組各19名。產(chǎn)婦年齡24～30歲，妊娠38～41周，經(jīng)體檢肝、腎和心功能正常。單胎頭位，有引產(chǎn)指征。
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5 給藥方法和標(biāo)本收集
服藥組產(chǎn)婦服用米非司酮100 mg,qd, 連服2 d,第4 d加米索前列醇片。于服用米非司酮前、產(chǎn)程活躍期(宮口開大3 cm以上)、嬰兒出生時(shí)、出生后24及72 h抽取產(chǎn)婦靜脈血、臍血、新生兒靜脈血各3 mL，置于肝素管中，分離血漿后置-30 ℃冰箱中待測。對照組不給予米非司酮,于產(chǎn)程活躍期(宮口開大3 cm以上)及嬰兒出生時(shí)、出生后24 h、72 h抽取產(chǎn)婦靜脈血、臍血、新生兒靜脈血,處理同上。
6 樣品處理方法
取血漿樣品1 mL，加入正己烷-二氯甲烷(7∶4)的處理液5 mL，振蕩，離心。吸取上清液，下層重復(fù)處理。合并上清液，于68 ℃揮干， 殘?jiān)?00 μL甲醇溶解后進(jìn)樣20 μL。
7 結(jié)果
7.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立 取空白血漿1 mL加入米非司酮標(biāo)準(zhǔn)液使血漿米非司酮濃度分別為10，100，200，300， 400，500 ng。mL-1。處理同樣品，測定所得數(shù)據(jù)以峰面積為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，經(jīng)計(jì)算機(jī)回歸得到線性回歸方程為：
, 百拇醫(yī)藥
Y=171.7X-373.2 r=0.998 7
色譜圖見圖1。
圖1 色譜圖
A.空白血漿 B.空白血漿+米非司酮
1.米非司酮
7.2 米非司酮的回收率測定和精密度試驗(yàn) 取空白血漿1 mL加入米非司酮標(biāo)準(zhǔn)液使血漿藥物含量分別為50，200，400 ng。mL-1。處理同樣品，處理后每個(gè)濃度分別在日內(nèi)、日間重復(fù)進(jìn)樣，根據(jù)經(jīng)血漿處理后的米非司酮標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算其相對回收率以及測定日內(nèi)差和日間差，結(jié)果見表1。
表1 米非司酮相對回收率和精密度(n=4) 理論濃度
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/ng。mL-1
實(shí)測濃度
/ng。mL-1
相對回收率
±RSD/%
日內(nèi)
RSD/%
日間
RSD/%
100
96.81
96.81±2.34
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1.4
3.4
200
202.1
101.0±1.76
1.5
3.2
400
394.1
98.52±1.60
1.3
2.3
7.3 米非司酮血藥濃度 服藥前靜脈血中米非司酮濃度為(23.2±13.0)ng。mL-1，服藥組活躍期產(chǎn)婦靜脈血中藥物濃度為(323±137) ng。mL-1，對照組為(112±51.0)ng。mL-1；服藥組臍血中藥物濃度為(95.9±49.3)ng。mL-1，對照組為(35.0±20.0)ng。mL-1；服藥組產(chǎn)婦的新生兒出生后24 h血藥濃度為(39.8±20.7)ng。mL-1，對照組為(26.7±11.6)ng。mL-1；服藥組新生兒出生后72 h血藥濃度為(27.7±9.9)ng。mL-1， 對照組為(21.5±11.9)ng。mL-1。服藥組產(chǎn)婦活躍期、臍血及其新生兒出生后24 h血藥濃度與對照組有顯著差異(P<0.05), 出生后72 h血藥濃度與對照組無顯著差異。臍血濃度與產(chǎn)程活躍期血漿中的米非司酮濃度呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.72，臍/母血藥比值為0.30。以出生時(shí)間t為橫坐標(biāo)，以米非司酮濃度C為縱坐標(biāo)作圖，見圖2。
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圖2 新生兒米非司酮血藥濃度比較圖
1.服藥組 2.對照組
7.4 引產(chǎn)效果及新生兒結(jié)局 服藥組及對照組促宮頸成熟有效率分別為100%和80%，引產(chǎn)總有效率分別為 92.10%和76.66% ，2組間比較差異具顯著性(P<0.05)。2組產(chǎn)后出血，新生兒平均體重，Apgar評(píng)分及羊水性狀比較均無顯著差異(P>0.05)。
8 討論
8.1 文獻(xiàn)〔4,5〕報(bào)道過多種米非司酮HPLC測定方法,多數(shù)采用干冰-丙酮浴冷凍的方法提取米非司酮及其代謝產(chǎn)物，操作復(fù)雜。以正己烷-二氯甲烷的混合液提取米非司酮及其代謝產(chǎn)物的改進(jìn)方法操作簡便，且同樣可以得到較好的精密度,保證待測樣品中藥物濃度在線性范圍內(nèi)。
8.2 并用藥物米索前列醇劑量小、藥物代謝快、血漿藥物濃度很低，本實(shí)驗(yàn)條件無法檢出該劑量下血漿中的米索前列醇[6]。
, 百拇醫(yī)藥
8.3 未服藥產(chǎn)婦在分娩時(shí)體內(nèi)產(chǎn)生少量內(nèi)源性米非司酮，其濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于服藥組，服藥組的促宮頸成熟有效率和引產(chǎn)有效率均顯著高于對照組，說明服藥組產(chǎn)婦血漿米非司酮濃度為有效藥物作用濃度，米非司酮具有促宮頸成熟及引產(chǎn)作用。
8.4 結(jié)果顯示產(chǎn)婦口服米非司酮可透過胎盤屏障，與文獻(xiàn)[7，8]報(bào)道相符，透過量與產(chǎn)程活躍期的血藥濃度呈正相關(guān)，并影響新生兒的血藥濃度，使臍血和新生兒的24 h血藥濃度明顯高于對照組， 72 h血藥濃度降至與對照組無顯著差異, 新生兒結(jié)局良好，但對新生兒是否有遠(yuǎn)期影響，尚待進(jìn)一步研究、隨訪。
參考文獻(xiàn)
1，F(xiàn)rydman R, Baton C, Lelaidier C, et al. Mifepristone for induction of labor .Lancet, 1991,337：488
, http://www.www.srpcoatings.com 2，Lelaidier C, Baton C, Benifla JI, et al. Mifepristone for labor induction after previous casarean section. Br J Obstet Gynecol, 1994,101:501
3，蘇慧，李莪，翁梨駒等. 米非司酮用于足月妊娠引產(chǎn)的臨床觀察.中華婦產(chǎn)科雜志,1996,31(11):676
4，葉智厚，張國慶，白秀梅等. 高效液相色譜法測定人體血液中RU486含量.色譜,1987,5(3):179
5，邵慶翔，桑國衛(wèi)，姜麗霞等 .抗孕激素米非司酮及其代謝產(chǎn)物的藥代動(dòng)力學(xué).中國臨床藥理學(xué)雜志, 1993,9 (3):144
6，Karim MJ .Antiulcer prostaglandin misoprostol ：single multiple dose pharmacokinetic prafile .Prostaglandins,1987,33(Suppl):40
, http://www.www.srpcoatings.com
7， Hill NCW, Selinger M , Feroguson J, et al. The placental transfer of mifepristone during the second trimester and its influence upon maternal and fetal steroid concentration .Br J Obstet gynecol, 1990,97:406
8，F(xiàn)rydman R，Taylor S，Ulmann A. Transplacental passage of mifepristone. Lancet, 1985, 2:1019
(本文于1999年4月16日收到), 百拇醫(yī)藥
單位：高晨 趙志剛 王越 羅勁松 任淑萍(北京天壇醫(yī)院 100050)
關(guān)鍵詞：米非司酮；HPLC；妊娠晚期；新生兒
藥物分析雜志000217 摘要 目的：研究米非司酮用于晚期妊娠引產(chǎn)對新生兒的影響，評(píng)價(jià)其對母嬰的安全性。方法：采用高效液相色譜法測定產(chǎn)婦及新生兒血漿中的米非司酮濃度。結(jié)果：服藥組產(chǎn)婦產(chǎn)程活躍期血漿中的米非司酮濃度為(323±137)ng.mL-1、臍血濃度為(95.9±51.0)ng.mL-1，其新生兒出生后24 h的血藥濃度為(39.8±20.7)ng.mL-1，均與對照組有顯著差異(P<0.05)，且臍血濃度與產(chǎn)婦產(chǎn)程活躍期血漿中的米非司酮濃度成正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.72，臍/母血藥濃度比值為0.30。出生后72 h血藥濃度(27.7±9.9)ng.mL-1與對照組比無顯著差異(P>0.05)。結(jié)論：該研究為米非司酮用于晚期妊娠引產(chǎn)的安全性提供一定的科學(xué)依據(jù)。
, 百拇醫(yī)藥
HPLC Assay for Mifepristone in Plasma of Parturient and Their Newborns
Gao Chen, Zhao Zhigang, Wang Yue and Ren Shuping
(Tiantan Hospital, Beijing 100050)
Abstract Objective：To study the effect upon the newborns after the parturient treatment with mifepristone.Methods:The concentration of mifepristone in the plasma of parturient，their newborns and umbilical cord was assayed with HPLC.Results:After administrated with mifepristone, the parturient, umbilical plasma level and their newborns’ plasma concentration 24 h and 72 h after their birth were detected to be (323±137)ng.mL-1, (95.9±51.0)ng.mL-1，(39.8±20.7)ng.mL-1;compared with control group, the difference were statistically significant; and 72 h after their birth was (27.7±9.9)ng.mL-1, there wasnt significant difference with control group ；the umbilical plasma concentration had positive correlation with the maternal, the ratio of umbilical/maternal mifepristone level was 0.30,the correlation coefficient was 0.72.Conclusion:This study will provide a scientific basis for the safety of using mifepristone on parturient.
, 百拇醫(yī)藥
Key words mifepristone, HPLC, newborn, parturient
米非司酮用于晚期妊娠引產(chǎn)現(xiàn)已得到較廣泛的研究[1,2]，但關(guān)于米非司酮用于晚期妊娠引產(chǎn)對新生兒的安全性是主要待研究問題[3]。本文用HPLC法測定產(chǎn)婦靜脈血、臍血、新生兒血漿中的米非司酮濃度，通過隨機(jī)對照研究闡述了3者之間的關(guān)系，并對服用與未服用米非司酮產(chǎn)婦所生新生兒血漿中米非司酮的濃度進(jìn)行了比較，為評(píng)價(jià)藥物安全性及臨床用藥提供參考。
1 藥品與試劑
米非司酮對照品(北京第三制藥廠，含量85.0% ，批號(hào)971115)；米非司酮片(北京第三制藥廠，每片50 mg)；米索前列醇片(西爾大藥廠 每片200 μg)；甲醇(色譜純 )；乙腈(色譜純)；正己烷、二氯甲烷(分析純)重蒸后使用。
, 百拇醫(yī)藥
2 儀器和色譜條件
Waters 510泵；Waters 484 UV檢測器；色譜柱 :OUYA-RP18(4.6 mm×150 mm)；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-水(42∶28∶30)，pH=4.7；流速1.0 mL。min-1；檢測波長302 nm；進(jìn)樣量20 μL。
3 對照品儲(chǔ)備液
取米非司酮對照品適量,用甲醇溶解制成100 μg。mL-1的溶液, 4 ℃冷藏備用。臨用時(shí)，用甲醇配制成所需濃度的標(biāo)準(zhǔn)液。
4 受試者
38名健康初產(chǎn)婦及其新生兒。經(jīng)產(chǎn)婦同意，隨機(jī)將38名健康初產(chǎn)婦分為服藥組和對照組各19名。產(chǎn)婦年齡24～30歲，妊娠38～41周，經(jīng)體檢肝、腎和心功能正常。單胎頭位，有引產(chǎn)指征。
, http://www.www.srpcoatings.com
5 給藥方法和標(biāo)本收集
服藥組產(chǎn)婦服用米非司酮100 mg,qd, 連服2 d,第4 d加米索前列醇片。于服用米非司酮前、產(chǎn)程活躍期(宮口開大3 cm以上)、嬰兒出生時(shí)、出生后24及72 h抽取產(chǎn)婦靜脈血、臍血、新生兒靜脈血各3 mL，置于肝素管中，分離血漿后置-30 ℃冰箱中待測。對照組不給予米非司酮,于產(chǎn)程活躍期(宮口開大3 cm以上)及嬰兒出生時(shí)、出生后24 h、72 h抽取產(chǎn)婦靜脈血、臍血、新生兒靜脈血,處理同上。
6 樣品處理方法
取血漿樣品1 mL，加入正己烷-二氯甲烷(7∶4)的處理液5 mL，振蕩，離心。吸取上清液，下層重復(fù)處理。合并上清液，于68 ℃揮干， 殘?jiān)?00 μL甲醇溶解后進(jìn)樣20 μL。
7 結(jié)果
7.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立 取空白血漿1 mL加入米非司酮標(biāo)準(zhǔn)液使血漿米非司酮濃度分別為10，100，200，300， 400，500 ng。mL-1。處理同樣品，測定所得數(shù)據(jù)以峰面積為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，經(jīng)計(jì)算機(jī)回歸得到線性回歸方程為：
, 百拇醫(yī)藥
Y=171.7X-373.2 r=0.998 7
色譜圖見圖1。
圖1 色譜圖
A.空白血漿 B.空白血漿+米非司酮
1.米非司酮
7.2 米非司酮的回收率測定和精密度試驗(yàn) 取空白血漿1 mL加入米非司酮標(biāo)準(zhǔn)液使血漿藥物含量分別為50，200，400 ng。mL-1。處理同樣品，處理后每個(gè)濃度分別在日內(nèi)、日間重復(fù)進(jìn)樣，根據(jù)經(jīng)血漿處理后的米非司酮標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算其相對回收率以及測定日內(nèi)差和日間差，結(jié)果見表1。
表1 米非司酮相對回收率和精密度(n=4) 理論濃度
, http://www.www.srpcoatings.com
/ng。mL-1
實(shí)測濃度
/ng。mL-1
相對回收率
±RSD/%
日內(nèi)
RSD/%
日間
RSD/%
100
96.81
96.81±2.34
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1.4
3.4
200
202.1
101.0±1.76
1.5
3.2
400
394.1
98.52±1.60
1.3
2.3
7.3 米非司酮血藥濃度 服藥前靜脈血中米非司酮濃度為(23.2±13.0)ng。mL-1，服藥組活躍期產(chǎn)婦靜脈血中藥物濃度為(323±137) ng。mL-1，對照組為(112±51.0)ng。mL-1；服藥組臍血中藥物濃度為(95.9±49.3)ng。mL-1，對照組為(35.0±20.0)ng。mL-1；服藥組產(chǎn)婦的新生兒出生后24 h血藥濃度為(39.8±20.7)ng。mL-1，對照組為(26.7±11.6)ng。mL-1；服藥組新生兒出生后72 h血藥濃度為(27.7±9.9)ng。mL-1， 對照組為(21.5±11.9)ng。mL-1。服藥組產(chǎn)婦活躍期、臍血及其新生兒出生后24 h血藥濃度與對照組有顯著差異(P<0.05), 出生后72 h血藥濃度與對照組無顯著差異。臍血濃度與產(chǎn)程活躍期血漿中的米非司酮濃度呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.72，臍/母血藥比值為0.30。以出生時(shí)間t為橫坐標(biāo)，以米非司酮濃度C為縱坐標(biāo)作圖，見圖2。
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圖2 新生兒米非司酮血藥濃度比較圖
1.服藥組 2.對照組
7.4 引產(chǎn)效果及新生兒結(jié)局 服藥組及對照組促宮頸成熟有效率分別為100%和80%，引產(chǎn)總有效率分別為 92.10%和76.66% ，2組間比較差異具顯著性(P<0.05)。2組產(chǎn)后出血，新生兒平均體重，Apgar評(píng)分及羊水性狀比較均無顯著差異(P>0.05)。
8 討論
8.1 文獻(xiàn)〔4,5〕報(bào)道過多種米非司酮HPLC測定方法,多數(shù)采用干冰-丙酮浴冷凍的方法提取米非司酮及其代謝產(chǎn)物，操作復(fù)雜。以正己烷-二氯甲烷的混合液提取米非司酮及其代謝產(chǎn)物的改進(jìn)方法操作簡便，且同樣可以得到較好的精密度,保證待測樣品中藥物濃度在線性范圍內(nèi)。
8.2 并用藥物米索前列醇劑量小、藥物代謝快、血漿藥物濃度很低，本實(shí)驗(yàn)條件無法檢出該劑量下血漿中的米索前列醇[6]。
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8.3 未服藥產(chǎn)婦在分娩時(shí)體內(nèi)產(chǎn)生少量內(nèi)源性米非司酮，其濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于服藥組，服藥組的促宮頸成熟有效率和引產(chǎn)有效率均顯著高于對照組，說明服藥組產(chǎn)婦血漿米非司酮濃度為有效藥物作用濃度，米非司酮具有促宮頸成熟及引產(chǎn)作用。
8.4 結(jié)果顯示產(chǎn)婦口服米非司酮可透過胎盤屏障，與文獻(xiàn)[7，8]報(bào)道相符，透過量與產(chǎn)程活躍期的血藥濃度呈正相關(guān)，并影響新生兒的血藥濃度，使臍血和新生兒的24 h血藥濃度明顯高于對照組， 72 h血藥濃度降至與對照組無顯著差異, 新生兒結(jié)局良好，但對新生兒是否有遠(yuǎn)期影響，尚待進(jìn)一步研究、隨訪。
參考文獻(xiàn)
1，F(xiàn)rydman R, Baton C, Lelaidier C, et al. Mifepristone for induction of labor .Lancet, 1991,337：488
, http://www.www.srpcoatings.com 2，Lelaidier C, Baton C, Benifla JI, et al. Mifepristone for labor induction after previous casarean section. Br J Obstet Gynecol, 1994,101:501
3，蘇慧，李莪，翁梨駒等. 米非司酮用于足月妊娠引產(chǎn)的臨床觀察.中華婦產(chǎn)科雜志,1996,31(11):676
4，葉智厚，張國慶，白秀梅等. 高效液相色譜法測定人體血液中RU486含量.色譜,1987,5(3):179
5，邵慶翔，桑國衛(wèi)，姜麗霞等 .抗孕激素米非司酮及其代謝產(chǎn)物的藥代動(dòng)力學(xué).中國臨床藥理學(xué)雜志, 1993,9 (3):144
6，Karim MJ .Antiulcer prostaglandin misoprostol ：single multiple dose pharmacokinetic prafile .Prostaglandins,1987,33(Suppl):40
, http://www.www.srpcoatings.com
7， Hill NCW, Selinger M , Feroguson J, et al. The placental transfer of mifepristone during the second trimester and its influence upon maternal and fetal steroid concentration .Br J Obstet gynecol, 1990,97:406
8，F(xiàn)rydman R，Taylor S，Ulmann A. Transplacental passage of mifepristone. Lancet, 1985, 2:1019
(本文于1999年4月16日收到), 百拇醫(yī)藥