高效液相色譜法測(cè)定人血漿中酮洛芬濃度
作者：黃英 余勤 梁茂植 何曉東 秦永平 鄒遠(yuǎn)高
單位：黃英 余勤 梁茂植 何曉東 秦永平 鄒遠(yuǎn)高(華西醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床藥理研究所 成都 610041)
關(guān)鍵詞：酮洛芬；高效液相色譜法；血藥濃度；藥代動(dòng)力學(xué)
藥物分析雜志000209 摘要 目的：采用高效液相色譜法測(cè)定人血漿中酮洛芬濃度。方法：用石油醚-乙醚(1∶1)提取血漿樣品中酮洛芬及萘普生(內(nèi)標(biāo))，在Spherisorb C18柱上，以甲醇-50 mmol*L-1 磷酸二氫鈉(63∶37)為流動(dòng)相進(jìn)行分離，于255 nm檢測(cè)。結(jié)果：線性范圍為0.04～12 μg*mL-1，萃取回收率為85.2%～89.9%，加樣回收率為97.0%～100.1%，日內(nèi)RSD為0.45%～2.72%，日間RSD為1.31%～4.40%。結(jié)論：本法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，用于測(cè)定12名健康志愿者口服酮洛芬膠囊后血藥濃度取得良好結(jié)果。
, 百拇醫(yī)藥
Determination of Ketoprofen in Human Plasma by HPLC
Huang Ying,Yu Qin,Liang Maozhi,He Xiaodong,Qin Yongping and Zou Yuangao
(Institute of Clinical Pharmacology,First University Hospital,West China University of Medical Sciences,Chengdu 610041)
Abstract Objective：A simple HPLC method is established for the determination of ketoprofen in human plasma.Method:Ketoprofen and the internal standard(naproxen)were first extracted into the mixture of petroleum ether and ether and then separated on C18 column with a mobile phase consisting of methanol and 50 mmol*L-1 phosphate buffer(63∶37).Result:The calibration curve was linear within 0.04～12 μg*mL-1.The extraction recoveries of ketoprofen were 85.2%～89.9%.The recoveries of methodology were 97.0%～100.1%.Inter-day and intra-day RSD were 0.45%～2.72% and 1.31%～4.40% respectively.Conclusion:This method is simple,accurate and reproducible.It has been applied successfully to the determination of ketoprofen in human plasma for pharmacokinetic studies.
, 百拇醫(yī)藥
Key words ketoprofen,HPLC,drug concentration in plasma,pharmacokinetics
酮洛芬(Ketoprofen)是一良好非甾體抗炎藥物，臨床用于解熱、鎮(zhèn)痛及治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。該藥口服吸收迅速，但消除較快，一般口服每日需3～4次，且對(duì)胃腸道有一定刺激性[1]。國(guó)外對(duì)酮洛芬緩釋制劑研制較早，國(guó)內(nèi)迄今尚無(wú)酮洛芬緩釋制劑產(chǎn)品上市。我們參考國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道[2，3]，建立人血漿酮洛芬濃度測(cè)定的反相高效液相色譜法，旨在用于研究國(guó)產(chǎn)酮洛芬緩釋制劑的人體藥動(dòng)學(xué)及其相對(duì)生物利用度。
1 儀器與試藥
美國(guó)Waters公司高效液相色譜儀：510型泵，486型紫外檢測(cè)器。日本Shimadzu公司C-R7Ae色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)。
酮洛芬對(duì)照品(西南合成制藥股份有限公司，含量100.1%)，萘普生原料(西南合成制藥二廠)。酮洛芬腸溶膠囊(西南合成制藥股份有限公司，批號(hào)961101，規(guī)格為每粒50 mg)，酮洛芬緩釋膠囊(成都華西藥業(yè)有限公司，批號(hào)971008，規(guī)格為每粒100 mg)。其余試劑均為分析純。
, http://www.www.srpcoatings.com
酮洛芬標(biāo)準(zhǔn)液：精密稱取酮洛芬對(duì)照品6 mg，加入0.1 mol。L-1 氫氧化鈉 1 mL溶解，再用水稀釋并定容至50 mL，于冰箱4 ℃保存。臨用時(shí)以水稀釋成24，16，8，2，0.4，0.08 μg。mL-1酮洛芬標(biāo)準(zhǔn)液。
內(nèi)標(biāo)工作液：精密稱取萘普生5 mg，按酮洛芬標(biāo)準(zhǔn)液同法配制。臨用時(shí)以水稀釋成25 μg。mL-1萘普生工作液。
2 色譜條件
色譜柱：Spherisorb C18,150 mm×4.6 mm，10 μm(中科院大連化學(xué)物理所)；流動(dòng)相：甲醇-50 mmol。L-1 磷酸二氫鈉(63∶37,磷酸調(diào)緩沖液pH至2.2)，用前經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾；流速1.0 mL。min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)255 nm。
, 百拇醫(yī)藥
3 血樣處理
空白血漿200 μL，加酮洛芬標(biāo)準(zhǔn)液100 μL(或待測(cè)血漿200 μL，加水100 μL)，加入內(nèi)標(biāo)工作液100 μL(含萘普生2.5 μg)，加1 mol。L-1 鹽酸 100 μL，混勻，加石油醚-乙醚(1∶1)1.5 mL，混旋提取5 min，3 000 r。min-1離心5 min。將有機(jī)相轉(zhuǎn)入離心管，置50 ℃水浴通空氣流揮干。殘?jiān)昧鲃?dòng)相50 μL溶解，吸取20 μL在前述色譜條件下分離測(cè)定。血漿樣品色譜圖見(jiàn)圖1。酮洛芬及萘普生保留時(shí)間分別為5.3 min及6.5 min。色譜峰理論塔板數(shù)按酮洛芬計(jì)算為2 700，酮洛芬峰與萘普生峰分離度為2.25。
圖1 酮洛芬血漿樣品色譜圖
, 百拇醫(yī)藥
A.空白血漿 B.血漿樣品
1.酮洛芬 2.萘普生(內(nèi)標(biāo))
4 線性關(guān)系
于空白血漿中加入酮洛芬標(biāo)準(zhǔn)液，使其血漿藥濃分別為0.04，0.2，1，4，8，12 μg。mL-1，按前述血樣處理法操作測(cè)定。以酮洛芬與內(nèi)標(biāo)峰高比值(Y)對(duì)酮洛芬血漿濃度(X)作回歸計(jì)算，其直線方程：
Y=0.351 2 X+0.008 4 r=0.999 9
當(dāng)信噪比為3時(shí)，血漿酮洛芬最低檢測(cè)濃度為0.01 μg。mL-1。
5 萃取回收率
取空白血漿200 μL，加酮洛芬標(biāo)準(zhǔn)液100 μL，按血樣處理法操作測(cè)定(不加內(nèi)標(biāo))，所得酮洛芬峰高與同濃度酮洛芬標(biāo)準(zhǔn)液100 μL置50 ℃水浴揮干后，用流動(dòng)相50 μL溶解進(jìn)樣之峰高比值，即萃取回收率。濃度為0.2，4，8 μg。mL-1的血漿樣品，酮洛芬萃取回收率(n=6)分別為88.4%，85.2%，89.9%。
, http://www.www.srpcoatings.com
6 加樣回收率
取空白血漿200 μL，加入不同濃度的酮洛芬標(biāo)準(zhǔn)液100 μL，按血樣處理法操作測(cè)定，并求出實(shí)測(cè)量與加入量之比值，即酮洛芬加樣回收率(表1)。
表1 酮洛芬加樣回收率(n=6) 加入量
/μg。mL-1
實(shí)測(cè)量
/μg。mL-1
回收率
/%
RSD
/%
, 百拇醫(yī)藥
0.2
0.194
97.0
2.67
4.0
4.004
100.1
0.88
8.0
7.923
99.0
0.46
7 方法精密度
, 百拇醫(yī)藥
分別取濃度為0.2，4，8 μg。mL-1的酮洛芬血漿樣品各數(shù)份，按血樣處理法操作于1 d內(nèi)測(cè)定，其日內(nèi)RSD(n=6)分別為2.72%，0.89%，0.45%；于不同日反復(fù)測(cè)定，其日間RSD(n=6)分別為4.40%，2.64%，1.31%。
8 藥動(dòng)學(xué)研究應(yīng)用
12名男性健康志愿者單劑隨機(jī)交叉口服酮洛芬腸溶膠囊或緩釋膠囊100 mg，分別于服藥后0，1，1.5，2，3，5，7，9，14 h采血，用本法測(cè)定血漿酮洛芬濃度。采用中國(guó)藥理學(xué)會(huì)制訂3P87藥動(dòng)學(xué)程序，計(jì)算酮洛芬藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(表2)，其均值藥-時(shí)曲線見(jiàn)圖2。
表2 12名健康志愿者口服酮洛芬100 mg后藥動(dòng)學(xué)參數(shù) 劑型
Tmax
, http://www.www.srpcoatings.com
/h
Cmax
/μg。mL-1
T1/2
/h
AUC
/μg。mL-1.h
腸溶膠囊
2.29±0.54
7.75±1.13
2.42±0.58
, 百拇醫(yī)藥
21.90±3.75
緩釋膠囊
3.08±0.67
4.99±1.16
2.55±0.64
22.13±4.90
圖2 12名健康志愿者口服酮洛芬100 mg后藥時(shí)曲線
1.腸溶膠囊 2.緩釋膠囊
9 討論
與文獻(xiàn)報(bào)道[4～6]相比，本法取血量少，試劑節(jié)省，血樣處理步驟簡(jiǎn)短，為國(guó)內(nèi)酮洛芬新劑型人體藥動(dòng)學(xué)及其相對(duì)生物利用度研究提供了可靠的方法，對(duì)新藥質(zhì)量評(píng)價(jià)及指導(dǎo)臨床合理用藥具有實(shí)際意義。
, http://www.www.srpcoatings.com
何曉東 貴州省安順地區(qū)醫(yī)院藥劑科進(jìn)修生
參考文獻(xiàn)
1，徐傳福，劉仁明，鄭奇.酮基布洛芬的藥物動(dòng)力學(xué)研究.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，1986，6(2)：49
2，Wong Chiyin,Yeh Mingkung,Wang Dapeng.High-performance liquid chromatographic determination of ketoprofen in pharmaceutical dosage forms and plasma.J Liq Chomatogr,1992,15(8):1215
3，戚海亮，隋小平，高崇凱等.酮洛芬緩釋膠囊生物利用度研究.中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，1998，29(3)：108
4，Wanwimolruk S,Wanwimolruk S Z,Zoest A R.Sensitive HPLC assay for ketoprofen in human plasma and its application to pharmacokinetic study.J Liq Chromatogr,1991,14(20)：3685
5，葛慶華，張炎，陳慶華.緩釋微丸及血漿中酮溶芬的HPLC測(cè)定.中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，1994，25(11)：505
6，曹文瑾，屠錫德，呂萬(wàn)良等.酮洛芬速溶顆粒劑人體藥物動(dòng)力學(xué)研究.中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，29(2)：105
(本文于1998年12月29日收到), 百拇醫(yī)藥
單位：黃英 余勤 梁茂植 何曉東 秦永平 鄒遠(yuǎn)高(華西醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床藥理研究所 成都 610041)
關(guān)鍵詞：酮洛芬；高效液相色譜法；血藥濃度；藥代動(dòng)力學(xué)
藥物分析雜志000209 摘要 目的：采用高效液相色譜法測(cè)定人血漿中酮洛芬濃度。方法：用石油醚-乙醚(1∶1)提取血漿樣品中酮洛芬及萘普生(內(nèi)標(biāo))，在Spherisorb C18柱上，以甲醇-50 mmol*L-1 磷酸二氫鈉(63∶37)為流動(dòng)相進(jìn)行分離，于255 nm檢測(cè)。結(jié)果：線性范圍為0.04～12 μg*mL-1，萃取回收率為85.2%～89.9%，加樣回收率為97.0%～100.1%，日內(nèi)RSD為0.45%～2.72%，日間RSD為1.31%～4.40%。結(jié)論：本法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，用于測(cè)定12名健康志愿者口服酮洛芬膠囊后血藥濃度取得良好結(jié)果。
, 百拇醫(yī)藥
Determination of Ketoprofen in Human Plasma by HPLC
Huang Ying,Yu Qin,Liang Maozhi,He Xiaodong,Qin Yongping and Zou Yuangao
(Institute of Clinical Pharmacology,First University Hospital,West China University of Medical Sciences,Chengdu 610041)
Abstract Objective：A simple HPLC method is established for the determination of ketoprofen in human plasma.Method:Ketoprofen and the internal standard(naproxen)were first extracted into the mixture of petroleum ether and ether and then separated on C18 column with a mobile phase consisting of methanol and 50 mmol*L-1 phosphate buffer(63∶37).Result:The calibration curve was linear within 0.04～12 μg*mL-1.The extraction recoveries of ketoprofen were 85.2%～89.9%.The recoveries of methodology were 97.0%～100.1%.Inter-day and intra-day RSD were 0.45%～2.72% and 1.31%～4.40% respectively.Conclusion:This method is simple,accurate and reproducible.It has been applied successfully to the determination of ketoprofen in human plasma for pharmacokinetic studies.
, 百拇醫(yī)藥
Key words ketoprofen,HPLC,drug concentration in plasma,pharmacokinetics
酮洛芬(Ketoprofen)是一良好非甾體抗炎藥物，臨床用于解熱、鎮(zhèn)痛及治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。該藥口服吸收迅速，但消除較快，一般口服每日需3～4次，且對(duì)胃腸道有一定刺激性[1]。國(guó)外對(duì)酮洛芬緩釋制劑研制較早，國(guó)內(nèi)迄今尚無(wú)酮洛芬緩釋制劑產(chǎn)品上市。我們參考國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道[2，3]，建立人血漿酮洛芬濃度測(cè)定的反相高效液相色譜法，旨在用于研究國(guó)產(chǎn)酮洛芬緩釋制劑的人體藥動(dòng)學(xué)及其相對(duì)生物利用度。
1 儀器與試藥
美國(guó)Waters公司高效液相色譜儀：510型泵，486型紫外檢測(cè)器。日本Shimadzu公司C-R7Ae色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)。
酮洛芬對(duì)照品(西南合成制藥股份有限公司，含量100.1%)，萘普生原料(西南合成制藥二廠)。酮洛芬腸溶膠囊(西南合成制藥股份有限公司，批號(hào)961101，規(guī)格為每粒50 mg)，酮洛芬緩釋膠囊(成都華西藥業(yè)有限公司，批號(hào)971008，規(guī)格為每粒100 mg)。其余試劑均為分析純。
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酮洛芬標(biāo)準(zhǔn)液：精密稱取酮洛芬對(duì)照品6 mg，加入0.1 mol。L-1 氫氧化鈉 1 mL溶解，再用水稀釋并定容至50 mL，于冰箱4 ℃保存。臨用時(shí)以水稀釋成24，16，8，2，0.4，0.08 μg。mL-1酮洛芬標(biāo)準(zhǔn)液。
內(nèi)標(biāo)工作液：精密稱取萘普生5 mg，按酮洛芬標(biāo)準(zhǔn)液同法配制。臨用時(shí)以水稀釋成25 μg。mL-1萘普生工作液。
2 色譜條件
色譜柱：Spherisorb C18,150 mm×4.6 mm，10 μm(中科院大連化學(xué)物理所)；流動(dòng)相：甲醇-50 mmol。L-1 磷酸二氫鈉(63∶37,磷酸調(diào)緩沖液pH至2.2)，用前經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾；流速1.0 mL。min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)255 nm。
, 百拇醫(yī)藥
3 血樣處理
空白血漿200 μL，加酮洛芬標(biāo)準(zhǔn)液100 μL(或待測(cè)血漿200 μL，加水100 μL)，加入內(nèi)標(biāo)工作液100 μL(含萘普生2.5 μg)，加1 mol。L-1 鹽酸 100 μL，混勻，加石油醚-乙醚(1∶1)1.5 mL，混旋提取5 min，3 000 r。min-1離心5 min。將有機(jī)相轉(zhuǎn)入離心管，置50 ℃水浴通空氣流揮干。殘?jiān)昧鲃?dòng)相50 μL溶解，吸取20 μL在前述色譜條件下分離測(cè)定。血漿樣品色譜圖見(jiàn)圖1。酮洛芬及萘普生保留時(shí)間分別為5.3 min及6.5 min。色譜峰理論塔板數(shù)按酮洛芬計(jì)算為2 700，酮洛芬峰與萘普生峰分離度為2.25。
圖1 酮洛芬血漿樣品色譜圖
, 百拇醫(yī)藥
A.空白血漿 B.血漿樣品
1.酮洛芬 2.萘普生(內(nèi)標(biāo))
4 線性關(guān)系
于空白血漿中加入酮洛芬標(biāo)準(zhǔn)液，使其血漿藥濃分別為0.04，0.2，1，4，8，12 μg。mL-1，按前述血樣處理法操作測(cè)定。以酮洛芬與內(nèi)標(biāo)峰高比值(Y)對(duì)酮洛芬血漿濃度(X)作回歸計(jì)算，其直線方程：
Y=0.351 2 X+0.008 4 r=0.999 9
當(dāng)信噪比為3時(shí)，血漿酮洛芬最低檢測(cè)濃度為0.01 μg。mL-1。
5 萃取回收率
取空白血漿200 μL，加酮洛芬標(biāo)準(zhǔn)液100 μL，按血樣處理法操作測(cè)定(不加內(nèi)標(biāo))，所得酮洛芬峰高與同濃度酮洛芬標(biāo)準(zhǔn)液100 μL置50 ℃水浴揮干后，用流動(dòng)相50 μL溶解進(jìn)樣之峰高比值，即萃取回收率。濃度為0.2，4，8 μg。mL-1的血漿樣品，酮洛芬萃取回收率(n=6)分別為88.4%，85.2%，89.9%。
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6 加樣回收率
取空白血漿200 μL，加入不同濃度的酮洛芬標(biāo)準(zhǔn)液100 μL，按血樣處理法操作測(cè)定，并求出實(shí)測(cè)量與加入量之比值，即酮洛芬加樣回收率(表1)。
表1 酮洛芬加樣回收率(n=6) 加入量
/μg。mL-1
實(shí)測(cè)量
/μg。mL-1
回收率
/%
RSD
/%
, 百拇醫(yī)藥
0.2
0.194
97.0
2.67
4.0
4.004
100.1
0.88
8.0
7.923
99.0
0.46
7 方法精密度
, 百拇醫(yī)藥
分別取濃度為0.2，4，8 μg。mL-1的酮洛芬血漿樣品各數(shù)份，按血樣處理法操作于1 d內(nèi)測(cè)定，其日內(nèi)RSD(n=6)分別為2.72%，0.89%，0.45%；于不同日反復(fù)測(cè)定，其日間RSD(n=6)分別為4.40%，2.64%，1.31%。
8 藥動(dòng)學(xué)研究應(yīng)用
12名男性健康志愿者單劑隨機(jī)交叉口服酮洛芬腸溶膠囊或緩釋膠囊100 mg，分別于服藥后0，1，1.5，2，3，5，7，9，14 h采血，用本法測(cè)定血漿酮洛芬濃度。采用中國(guó)藥理學(xué)會(huì)制訂3P87藥動(dòng)學(xué)程序，計(jì)算酮洛芬藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(表2)，其均值藥-時(shí)曲線見(jiàn)圖2。
表2 12名健康志愿者口服酮洛芬100 mg后藥動(dòng)學(xué)參數(shù) 劑型
Tmax
, http://www.www.srpcoatings.com
/h
Cmax
/μg。mL-1
T1/2
/h
AUC
/μg。mL-1.h
腸溶膠囊
2.29±0.54
7.75±1.13
2.42±0.58
, 百拇醫(yī)藥
21.90±3.75
緩釋膠囊
3.08±0.67
4.99±1.16
2.55±0.64
22.13±4.90
圖2 12名健康志愿者口服酮洛芬100 mg后藥時(shí)曲線
1.腸溶膠囊 2.緩釋膠囊
9 討論
與文獻(xiàn)報(bào)道[4～6]相比，本法取血量少，試劑節(jié)省，血樣處理步驟簡(jiǎn)短，為國(guó)內(nèi)酮洛芬新劑型人體藥動(dòng)學(xué)及其相對(duì)生物利用度研究提供了可靠的方法，對(duì)新藥質(zhì)量評(píng)價(jià)及指導(dǎo)臨床合理用藥具有實(shí)際意義。
, http://www.www.srpcoatings.com
何曉東 貴州省安順地區(qū)醫(yī)院藥劑科進(jìn)修生
參考文獻(xiàn)
1，徐傳福，劉仁明，鄭奇.酮基布洛芬的藥物動(dòng)力學(xué)研究.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，1986，6(2)：49
2，Wong Chiyin,Yeh Mingkung,Wang Dapeng.High-performance liquid chromatographic determination of ketoprofen in pharmaceutical dosage forms and plasma.J Liq Chomatogr,1992,15(8):1215
3，戚海亮，隋小平，高崇凱等.酮洛芬緩釋膠囊生物利用度研究.中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，1998，29(3)：108
4，Wanwimolruk S,Wanwimolruk S Z,Zoest A R.Sensitive HPLC assay for ketoprofen in human plasma and its application to pharmacokinetic study.J Liq Chromatogr,1991,14(20)：3685
5，葛慶華，張炎，陳慶華.緩釋微丸及血漿中酮溶芬的HPLC測(cè)定.中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，1994，25(11)：505
6，曹文瑾，屠錫德，呂萬(wàn)良等.酮洛芬速溶顆粒劑人體藥物動(dòng)力學(xué)研究.中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，29(2)：105
(本文于1998年12月29日收到), 百拇醫(yī)藥