高效液相色譜法測定頭孢氨芐膠囊的含量
作者：明金蘭 朱會(huì)琴
單位：明金蘭 朱會(huì)琴(寧夏藥品檢驗(yàn)所 銀川 750004)
關(guān)鍵詞：
藥物分析雜志000222 頭孢氨芐(cefalexin)為半合成抗生素，口服吸收良好，體內(nèi)穩(wěn)定，毒副作用較小，蛋白結(jié)合率低，對葡萄球菌產(chǎn)生的青霉素酶穩(wěn)定；對革蘭氏陽性菌產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶有一定耐受性[1]，在臨床上廣為使用。其含量測定中國藥典(1995年版)采用碘量法[2]。但此法操作繁瑣，費(fèi)工費(fèi)時(shí)，影響因素多；還有采用高效液相色譜法的報(bào)道[3]，但內(nèi)標(biāo)物保留時(shí)間過長。本文采用高效液相色譜法，以乙酰苯胺為內(nèi)標(biāo)測定其含量，方法簡便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，靈敏度高。獲得了較為滿意的結(jié)果。
1 儀器與試藥
, 百拇醫(yī)藥 日立L-6200A高效液相色譜儀，L-4200H檢測器，D-2500數(shù)據(jù)處理器。頭孢氨芐對照品(含量91.7%)、乙酰苯胺(內(nèi)標(biāo)物)、α-苯甘氨酸、7-氨基去乙酰胺基頭孢烷酸(7-ADCA)，由中國藥品生物制品檢定所提供。
2 色譜條件
色譜柱：YWG C18(250 mm×4.6 mm,10 μm)，流動(dòng)相：0.015 mol。L-1醋酸鹽緩沖液(稱取無水醋酸鈉1.23 g，加水至1 000 mL，用醋酸調(diào)pH為4.0)-乙腈-甲醇(60∶6∶34)，檢測波長：254 nm，流速：1.0 mL。min-1。
3 線性范圍
精密稱取頭孢氨芐對照品約60 mg，置25 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取10 mL置50 mL量瓶中，稀釋成約為450 μg。mL-1的溶液作為對照品溶液。另精密稱取乙酰苯胺適量，置25 mL量瓶中，加水溶解并稀釋成約為550 μg。mL-1的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。精密量取對照品溶液0.1，0.5，0.75，1.0，1.5，3.0 mL，分別加入內(nèi)標(biāo)溶液2 mL，以流動(dòng)相稀釋至25 mL使內(nèi)標(biāo)最終濃度為44 μg。mL-1[3]，搖勻，取20 μL進(jìn)樣，色譜圖見圖1-A。試驗(yàn)表明頭孢氨芐濃度在18～535 μg。mL-1范圍內(nèi)與對照品峰面積和內(nèi)標(biāo)物峰面積比呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：
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A=0.015 81+0.009 83C r=0.999 9
圖1 對照品(A)與樣品(B)高效液相色譜圖
1.頭孢氨芐(3.98 min) 2.乙酰苯胺(8.56 min)
4 重復(fù)性和穩(wěn)定性試驗(yàn)
用樣品進(jìn)行6次試驗(yàn)測得平均含量為99.8%，RSD為1.7%。樣品溶液在24 h內(nèi)頭孢氨芐主峰與內(nèi)標(biāo)峰面積比值基本不變。
5 校正因子
精密量取對照品溶液0.75 mL與內(nèi)標(biāo)溶液2 mL置25 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，取20 μL注入液相色譜儀，按頭孢氨芐峰面積計(jì)算校正因子為2.149 89，RSD為0.3%，n=4。
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6 回收率試驗(yàn)
精密稱取按處方量配制的頭孢氨芐膠囊粉末適量(約含頭孢氨芐0.125 g)置50 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液2 mL加入內(nèi)標(biāo)溶液2 mL，置25 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。取20 μL注入液相色譜儀，計(jì)算，求得平均回收率為100.1%，RSD為0.95%，n=6。
7 干擾試驗(yàn)
精密稱取7-ADCA、α-苯甘氨酸適量(約為10 mg)置50 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，精密量取2 mL加到“回收率試驗(yàn)”所用溶液中，取20 μL注入液相色譜儀，結(jié)果見圖2。
圖2 雜質(zhì)與樣品的高效液相色譜圖
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1. 7-ADCA(2.58 min) 2. α-苯甘氨酸(2.93 min)
3. 頭孢氨芐(3.98 min) 4. 乙酰苯胺(8.56 min)
8 樣品測定
精密稱取裝量差異項(xiàng)下混合均勻的膠囊粉末適量(約相當(dāng)于頭孢氨芐0.125 g)，置50 mL量瓶中，照“回收率試驗(yàn)”項(xiàng)操作，結(jié)果見表1，色譜圖見圖1-B。
表1 2種含量測定方法的比較(標(biāo)示量%，n=3) 生產(chǎn)廠
批號
碘量法[2]
本法
A
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980701
96.9
98.2
B
971207
94.7
94.0
C
980112
90.8
89.2
D
980603
, http://www.www.srpcoatings.com
90.8
91.2
E
971106
90.4
90.3
9 小結(jié)
用本法測定頭孢氨芐膠囊的含量，快速，影響因素少，結(jié)果準(zhǔn)確。與碘量法比較，經(jīng)方差分析無顯著差異(P>0.05)。重復(fù)性試驗(yàn)RSD為1.7%，回收率試驗(yàn)RSD為0.95%。頭孢氨芐與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)乙酰苯胺能實(shí)現(xiàn)良好的分離。通過干擾性試驗(yàn)可知，乙酰苯胺、頭孢氨芐、α-苯甘氨酸、7-ADCA的保留時(shí)間分別為8.56，3.98，2.93，2.58 min，因此，樣品中可能存在的α-苯甘氨酸、7-ADCA雜質(zhì)，不影響頭孢氨芐含量的測定。
參考文獻(xiàn)
1，中國藥典1990年版二部藥典注釋.170
2，中國藥典.1995.二部：177
3，周明昊.高效液相色譜法測定頭孢氨芐的含量.藥物分析雜志，1997，17(6)：407
(本文于1999年3月26日收到), 百拇醫(yī)藥
單位：明金蘭 朱會(huì)琴(寧夏藥品檢驗(yàn)所 銀川 750004)
關(guān)鍵詞：
藥物分析雜志000222 頭孢氨芐(cefalexin)為半合成抗生素，口服吸收良好，體內(nèi)穩(wěn)定，毒副作用較小，蛋白結(jié)合率低，對葡萄球菌產(chǎn)生的青霉素酶穩(wěn)定；對革蘭氏陽性菌產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶有一定耐受性[1]，在臨床上廣為使用。其含量測定中國藥典(1995年版)采用碘量法[2]。但此法操作繁瑣，費(fèi)工費(fèi)時(shí)，影響因素多；還有采用高效液相色譜法的報(bào)道[3]，但內(nèi)標(biāo)物保留時(shí)間過長。本文采用高效液相色譜法，以乙酰苯胺為內(nèi)標(biāo)測定其含量，方法簡便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，靈敏度高。獲得了較為滿意的結(jié)果。
1 儀器與試藥
, 百拇醫(yī)藥 日立L-6200A高效液相色譜儀，L-4200H檢測器，D-2500數(shù)據(jù)處理器。頭孢氨芐對照品(含量91.7%)、乙酰苯胺(內(nèi)標(biāo)物)、α-苯甘氨酸、7-氨基去乙酰胺基頭孢烷酸(7-ADCA)，由中國藥品生物制品檢定所提供。
2 色譜條件
色譜柱：YWG C18(250 mm×4.6 mm,10 μm)，流動(dòng)相：0.015 mol。L-1醋酸鹽緩沖液(稱取無水醋酸鈉1.23 g，加水至1 000 mL，用醋酸調(diào)pH為4.0)-乙腈-甲醇(60∶6∶34)，檢測波長：254 nm，流速：1.0 mL。min-1。
3 線性范圍
精密稱取頭孢氨芐對照品約60 mg，置25 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取10 mL置50 mL量瓶中，稀釋成約為450 μg。mL-1的溶液作為對照品溶液。另精密稱取乙酰苯胺適量，置25 mL量瓶中，加水溶解并稀釋成約為550 μg。mL-1的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。精密量取對照品溶液0.1，0.5，0.75，1.0，1.5，3.0 mL，分別加入內(nèi)標(biāo)溶液2 mL，以流動(dòng)相稀釋至25 mL使內(nèi)標(biāo)最終濃度為44 μg。mL-1[3]，搖勻，取20 μL進(jìn)樣，色譜圖見圖1-A。試驗(yàn)表明頭孢氨芐濃度在18～535 μg。mL-1范圍內(nèi)與對照品峰面積和內(nèi)標(biāo)物峰面積比呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：
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A=0.015 81+0.009 83C r=0.999 9
圖1 對照品(A)與樣品(B)高效液相色譜圖
1.頭孢氨芐(3.98 min) 2.乙酰苯胺(8.56 min)
4 重復(fù)性和穩(wěn)定性試驗(yàn)
用樣品進(jìn)行6次試驗(yàn)測得平均含量為99.8%，RSD為1.7%。樣品溶液在24 h內(nèi)頭孢氨芐主峰與內(nèi)標(biāo)峰面積比值基本不變。
5 校正因子
精密量取對照品溶液0.75 mL與內(nèi)標(biāo)溶液2 mL置25 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，取20 μL注入液相色譜儀，按頭孢氨芐峰面積計(jì)算校正因子為2.149 89，RSD為0.3%，n=4。
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6 回收率試驗(yàn)
精密稱取按處方量配制的頭孢氨芐膠囊粉末適量(約含頭孢氨芐0.125 g)置50 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液2 mL加入內(nèi)標(biāo)溶液2 mL，置25 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。取20 μL注入液相色譜儀，計(jì)算，求得平均回收率為100.1%，RSD為0.95%，n=6。
7 干擾試驗(yàn)
精密稱取7-ADCA、α-苯甘氨酸適量(約為10 mg)置50 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，精密量取2 mL加到“回收率試驗(yàn)”所用溶液中，取20 μL注入液相色譜儀，結(jié)果見圖2。
圖2 雜質(zhì)與樣品的高效液相色譜圖
, http://www.www.srpcoatings.com
1. 7-ADCA(2.58 min) 2. α-苯甘氨酸(2.93 min)
3. 頭孢氨芐(3.98 min) 4. 乙酰苯胺(8.56 min)
8 樣品測定
精密稱取裝量差異項(xiàng)下混合均勻的膠囊粉末適量(約相當(dāng)于頭孢氨芐0.125 g)，置50 mL量瓶中，照“回收率試驗(yàn)”項(xiàng)操作，結(jié)果見表1，色譜圖見圖1-B。
表1 2種含量測定方法的比較(標(biāo)示量%，n=3) 生產(chǎn)廠
批號
碘量法[2]
本法
A
, http://www.www.srpcoatings.com
980701
96.9
98.2
B
971207
94.7
94.0
C
980112
90.8
89.2
D
980603
, http://www.www.srpcoatings.com
90.8
91.2
E
971106
90.4
90.3
9 小結(jié)
用本法測定頭孢氨芐膠囊的含量，快速，影響因素少，結(jié)果準(zhǔn)確。與碘量法比較，經(jīng)方差分析無顯著差異(P>0.05)。重復(fù)性試驗(yàn)RSD為1.7%，回收率試驗(yàn)RSD為0.95%。頭孢氨芐與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)乙酰苯胺能實(shí)現(xiàn)良好的分離。通過干擾性試驗(yàn)可知，乙酰苯胺、頭孢氨芐、α-苯甘氨酸、7-ADCA的保留時(shí)間分別為8.56，3.98，2.93，2.58 min，因此，樣品中可能存在的α-苯甘氨酸、7-ADCA雜質(zhì)，不影響頭孢氨芐含量的測定。
參考文獻(xiàn)
1，中國藥典1990年版二部藥典注釋.170
2，中國藥典.1995.二部：177
3，周明昊.高效液相色譜法測定頭孢氨芐的含量.藥物分析雜志，1997，17(6)：407
(本文于1999年3月26日收到), 百拇醫(yī)藥