HPLC法測定連翹和銀甲婦康液中連翹苷的含量
作者：王雪 王大果 晁若冰
單位：王大果(華西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院 成都 610041 深圳市人民醫(yī)院藥劑科)；晁若冰(華西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院 成都 610041)；王雪(華西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院 成都 610041 成都軍區(qū)總醫(yī)院藥學(xué)部 郵編 610083)
關(guān)鍵詞：連翹苷；高效液相色譜法；銀甲婦康液
藥物分析雜志000206 摘要 目的：用反相高效液相色譜法測定連翹[Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl.] 生藥及銀甲婦康液等含連翹制劑中連翹苷的含量。方法：樣品用氧化鋁柱凈化后在ODS柱上分析,流動(dòng)相為乙腈-水(22∶78),紫外檢測波長為230 nm。結(jié)果：該方法的線性范圍為0.15～1.95 μg,方法回收率為101.3%,RSD為1.3%。結(jié)論：該方法能消除中藥制劑中復(fù)雜組分的干擾,準(zhǔn)確地對(duì)連翹苷進(jìn)行含量測定。
, http://www.www.srpcoatings.com
Determination of Phillyrin in Forsythia suspensa (Thunb.) and in Chinese Medicine Yinjia Fukang Solution by HPLC
Wang Xue, Wang Daguo and Chao Ruobing
(Department of Pharmacy, West China University of Medical Sciences, Chengdu 610041)
Abstract Objective：To determine the content of phillyrin in Crude Forsythia suspensa (Thumb.) and in Chinese Medicine Yinjia Fukang solution, Huanglian Shangqing pill, VC Yinqiao tablet by RP-HPLC.Method:Samples were purified by an Al2O3 column, then analyzed by RP-HPLC. The mobile phase was acetonitrile-water(22∶78). The UV detection wavelength was 230 nm.Result:A good linearity was obtained in the range of 0.15～1.95 μg (r=0.999 6), the average recovery was 101.3%(RSD=1.3%，n=15).Conclusion:This method can eliminate the interference of the complex components in the Chinese medicine, and results in an accuracy quantitative analysis of phillyrin.
, 百拇醫(yī)藥
Key words phillyrin, HPLC, Yinjia Fukang solution
銀甲婦康液是由連翹、銀花、鱉甲、草紅藤等多味中藥，經(jīng)科學(xué)方法提取有效成分精制而成，是治療盆腔炎、外陰道炎、尿路感染等疾病的中藥口服制劑。其中的主藥連翹具有清熱止嘔、清利肝膽、除濕退黃、通調(diào)三焦等多種作用[1]。連翹中的主要生物活性成分連翹苷(phillyrin)具有較強(qiáng)的抗菌作用,并能抑制CAMP磷酸二酯酶的活性[2],故以連翹苷作為指標(biāo)成分,進(jìn)行了含量測定。
以往的文獻(xiàn)對(duì)連翹中連翹苷的測定方法有薄層色譜法[3]、梯度洗脫的RP-HPLC法[4]等。中藥制劑中連翹苷的測定未曾報(bào)道過。我們用氧化鋁柱層析對(duì)樣品進(jìn)行凈化處理后,采用ODS柱、乙腈-水(22∶78)為流動(dòng)相的RP-HPLC法,能夠準(zhǔn)確地對(duì)銀甲婦康液中的連翹苷含量進(jìn)行測定,陰性對(duì)照不干擾。我們還同時(shí)對(duì)連翹生藥及其他含連翹的中藥制劑黃連上清丸、維C銀翹片中的連翹苷進(jìn)行了測定,均取得較為滿意的結(jié)果。
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1 儀器與試藥
日本島津LC-6A高效液相色譜儀,SPD-6AV紫外檢測器,C-R4A數(shù)據(jù)處理機(jī)。
連翹苷對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所),銀甲婦康液(四川天府藥業(yè)集團(tuán)公司),維C銀翹片(宜昌民康藥業(yè)有限公司),黃連上清丸(成都軍區(qū)總醫(yī)院), 連翹(由四川天府藥業(yè)集團(tuán)公司命名,由成都軍區(qū)總醫(yī)院中醫(yī)科孟海霞主管藥師鑒定)。
乙腈(色譜用),重蒸餾水。
2 實(shí)驗(yàn)方法
2.1 供試品溶液的制備
2.1.1 銀甲婦康液 精密量取銀甲婦康液25 mL于水浴上揮至約10 mL,加甲醇10 mL,充分?jǐn)嚢韬筮^氧化鋁柱(17 cm×2 cm,中性氧化鋁20 g),用50%的甲醇35 mL少量多次洗脫,收集洗脫液于水浴上揮干,殘?jiān)?0%的甲醇溶解后轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中,加50%甲醇稀釋至刻度,過濾,棄去初濾液,收集續(xù)濾液備用。
, 百拇醫(yī)藥
2.1.2 銀甲婦康液陰性對(duì)照 去掉處方中的連翹生藥后，照生產(chǎn)工藝制備得到銀甲婦康空白溶液(由天府藥業(yè)集團(tuán)有限公司提供)，然后按“2.1.1”項(xiàng)的方法制備得到陰性對(duì)照液。
2.1.3 連翹 取適量連翹生藥粉碎后,精密稱取生藥粉末約0.5 g,加甲醇15 mL超聲提取30 min后,轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻后過濾,棄去初濾液,取續(xù)濾液備用。
2.1.4 黃連上清丸 精密稱取黃連上清丸細(xì)粉約6.0 g,精密加入甲醇25 mL,超聲提取30 min,過濾,精密量取續(xù)濾液15 mL過氧化鋁柱(17 cm×2 cm,中性氧化鋁20 g),用50%的甲醇35 mL少量多次洗脫,收集洗脫液,水浴揮干后,精密加入50%的甲醇10 mL溶解,過濾,取續(xù)濾液即得。
2.1.5 維C銀翹片 取維C銀翹片20片,去糖衣后,精密稱定。研細(xì),精密稱取片粉適量(約相當(dāng)于維C銀翹片5片),精密加入甲醇25 mL,超聲提取30 min,以下操作同“2.1.4”項(xiàng)。
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2.2 連翹苷對(duì)照品溶液的配制 精密稱取連翹苷對(duì)照品約25 mg,置50 mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得濃度約為0.50 mg。mL-1的對(duì)照品貯備液。精密量取對(duì)照品貯備液15 mL于50 mL容量瓶中,用50%的甲醇稀釋到刻度,搖勻,即得濃度約為0.15mg。mL-1的對(duì)照品溶液。
2.3 色譜條件 經(jīng)試驗(yàn)后選定的色譜條件為色譜柱:Shim-Pack CLC ODS柱(150 mm×6.0 mm),柱溫:30 ℃;流動(dòng)相:乙腈-水(22∶78),流速:1.0 mL。min-1;檢測波長為230 nm。
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.1 色譜圖 在選定條件下, 連翹苷對(duì)照品、銀甲婦康液、連翹以及銀甲婦康液連翹陰性對(duì)照的色譜圖見圖1�？梢�, 連翹苷出峰處陰性對(duì)照無干擾。
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圖1 連翹苷和銀甲婦康液的色譜圖
a.連翹苷對(duì)照品 b.連翹苷陰性對(duì)照
c.銀甲婦康液 d.連翹藥材
1.連翹苷(23.06 min)
3.2 線性與范圍 分別取連翹苷對(duì)照品溶液1，3，5，7，9，11，13 μL進(jìn)樣，樣品平行操作，記錄色譜圖,以峰面積對(duì)連翹苷的進(jìn)樣量X(μg)作線性回歸，得到線性方程為:
A=8.446+759.6 X r=0.999 6
說明連翹苷進(jìn)樣量在0.15～1.95 μg范圍內(nèi)線性較好。
3.3 回收試驗(yàn)
, 百拇醫(yī)藥 3.3.1 凈化回收率 分別精密量取連翹苷對(duì)照品溶液2 mL,分別加水2 mL,照銀甲婦康液樣品預(yù)處理方法制備試驗(yàn)溶液。另精密量取同一對(duì)照品貯備液2 mL,置25 mL容量瓶中,用50%的甲醇稀釋到刻度,即得對(duì)照溶液。供試溶液和對(duì)照溶液分別進(jìn)樣10 μL,記錄色譜圖,根據(jù)所得峰面積,計(jì)算凈化回收率。平均凈化回收率為99.1%(n=6),RSD=0.74%。說明采用選定方法凈化樣品有很好的凈化回收率。
3.3.2 加樣回收率 取銀甲婦康空白溶液(銀甲婦康液的處方中去掉連翹，但制備工藝相同)25 mL,分別準(zhǔn)確加入一定量的連翹苷對(duì)照品,照銀甲婦康液樣品預(yù)處理方法制備得試驗(yàn)溶液。進(jìn)樣10 μL,另取連翹苷對(duì)照溶液1，3，5，7，9，11，13 μL進(jìn)樣,按標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定并計(jì)算加樣回收率,結(jié)果見表1。平均回收率為101.3%，RSD=1.3%，n=15。
表1 回收率測定結(jié)果(n=3) 加入量/mg
, 百拇醫(yī)藥 回收率/%
RSD/%
0.492
102.3
1.15
0.98
100.6
1.62
1.48
100.8
1.25
1.97
100.3
, 百拇醫(yī)藥
0.76
2.46
102.3
0.23
3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 分別精密量取同一供試品溶液25 mL,照預(yù)處理項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備試驗(yàn)溶液,取10 μL進(jìn)樣,測得平均峰面積值為A=552 180,RSD為0.54%(n=6)。
3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 于0，2，4，6，8，12 h取同一供試品溶液和對(duì)照品溶液各10 μL,分別進(jìn)樣2次,計(jì)算日內(nèi)RSD分別為1.11%和0.91%。再于第1，2，3，4 d分別取同一供試品溶液和對(duì)照品溶液各10 μL,進(jìn)樣2次,計(jì)算日間RSD分別為2.54%和0.84%。
3.6 進(jìn)樣精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液,重復(fù)進(jìn)樣6次,根據(jù)峰面積值,計(jì)算得平均峰面積A=737 880,RSD為0.85%。
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3.7 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 照“2.1.1”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，照“2.3”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣1次，以連翹苷峰計(jì)算，測得柱效為9.2×103，連翹苷與其前后雜質(zhì)的分離度分別為8.85和5.31。
3.8 樣品測定 采用前述的樣品預(yù)處理方法和色譜條件,分別測定了5個(gè)批號(hào)的銀甲婦康液中連翹苷的含量以及連翹生藥中連翹苷含量,結(jié)果見表2。表2 不同樣品中連翹苷的含量(n=3) 樣品
平均含量/mg。mL-1
RSD/%
銀甲婦康液970901
0.584
1.11
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970904
0.512
0.15
971001
0.757
1.19
971002
0.892
0.42
950903
0.255
0.61
連翹
, 百拇醫(yī)藥
0.0120(mg。mg-1)
1.35
4 討論
4.1 我們?cè)?jīng)采用過甲醇(含1%的四氫呋喃)-水(含0.01 mol。L-1磷酸二氫鈉,pH 3.2)(40∶60)的系統(tǒng),不同比例的乙腈-甲醇-水系統(tǒng),以及不同比例的乙腈-水系統(tǒng),結(jié)果表明：乙腈-水為22∶78時(shí), 連翹苷峰形對(duì)稱,分離完全,陰性對(duì)照不干擾。我們同時(shí)還發(fā)現(xiàn),乙腈比例微小的變化會(huì)較顯著地影響連翹苷的保留時(shí)間。
4.2 我們還嘗試采用選定的方法對(duì)連翹苷的其它2種制劑:黃連上清丸、維C銀翹片中的連翹苷進(jìn)行了分離、測定。色譜圖見圖2,測定結(jié)果見表3。可知, 連翹苷的峰形對(duì)稱,與其他峰的分離較好,達(dá)到基線分離。說明實(shí)驗(yàn)方法可用于此類制劑中的連翹苷含量測定。
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圖2 連翹制劑的色譜圖
a.黃連上清丸 b.維C銀翹片
1.連翹苷(23.15 min)
表3 其它連翹制劑中連翹苷的測定結(jié)果(n=3) 樣品
平均含量
RSD/%
黃連上清丸
0.42 mg。g-1
1.35
維C銀翹片
0.58 mg每片
, 百拇醫(yī)藥
1.26
4.3 在樣品預(yù)處理方法中,我們?cè)鴩L試采用過液液萃取法和硅膠柱作為層析柱的方法。前者由于凈化不完全,引入雜質(zhì)多而放棄。后者則會(huì)使連翹苷在柱上的保留性較強(qiáng),不易被完全洗脫。采用中性氧化鋁柱,連翹苷能很容易地被50%甲醇洗脫，而中藥制劑中黃酮類等干擾組分能夠有效地被保留在柱上,用于以上幾個(gè)品種的預(yù)處理,凈化效果好,故確定采用氧化鋁柱。
4.4 在對(duì)不同批號(hào)的銀甲婦康液中連翹苷測定時(shí),發(fā)現(xiàn)其含量差異較大。
參考文獻(xiàn)
1，丁岡，劉延澤.中藥連翹甙及其同屬植物的研究近況.中藥材,1994,17(10)：42
2，劉東雷，李會(huì)輕，徐綏緒. 連翹屬植物化學(xué)成分的研究進(jìn)展.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào),1995,12(4)：301
3，梁文藻，董慧，涂國士. 連翹成分分析Ⅰ.連翹甙和連翹脂素的分離鑒定和測定.藥物分析雜志,1985,5(1)：1
4，崔燕巖，馮少勇，趙光等. 連翹有效成分的HPLC法測定.藥學(xué)學(xué)報(bào),1992,27(8)：603
(本文于1999年7月26日修改回), 百拇醫(yī)藥
單位：王大果(華西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院 成都 610041 深圳市人民醫(yī)院藥劑科)；晁若冰(華西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院 成都 610041)；王雪(華西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院 成都 610041 成都軍區(qū)總醫(yī)院藥學(xué)部 郵編 610083)
關(guān)鍵詞：連翹苷；高效液相色譜法；銀甲婦康液
藥物分析雜志000206 摘要 目的：用反相高效液相色譜法測定連翹[Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl.] 生藥及銀甲婦康液等含連翹制劑中連翹苷的含量。方法：樣品用氧化鋁柱凈化后在ODS柱上分析,流動(dòng)相為乙腈-水(22∶78),紫外檢測波長為230 nm。結(jié)果：該方法的線性范圍為0.15～1.95 μg,方法回收率為101.3%,RSD為1.3%。結(jié)論：該方法能消除中藥制劑中復(fù)雜組分的干擾,準(zhǔn)確地對(duì)連翹苷進(jìn)行含量測定。
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Determination of Phillyrin in Forsythia suspensa (Thunb.) and in Chinese Medicine Yinjia Fukang Solution by HPLC
Wang Xue, Wang Daguo and Chao Ruobing
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Abstract Objective：To determine the content of phillyrin in Crude Forsythia suspensa (Thumb.) and in Chinese Medicine Yinjia Fukang solution, Huanglian Shangqing pill, VC Yinqiao tablet by RP-HPLC.Method:Samples were purified by an Al2O3 column, then analyzed by RP-HPLC. The mobile phase was acetonitrile-water(22∶78). The UV detection wavelength was 230 nm.Result:A good linearity was obtained in the range of 0.15～1.95 μg (r=0.999 6), the average recovery was 101.3%(RSD=1.3%，n=15).Conclusion:This method can eliminate the interference of the complex components in the Chinese medicine, and results in an accuracy quantitative analysis of phillyrin.
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Key words phillyrin, HPLC, Yinjia Fukang solution
銀甲婦康液是由連翹、銀花、鱉甲、草紅藤等多味中藥，經(jīng)科學(xué)方法提取有效成分精制而成，是治療盆腔炎、外陰道炎、尿路感染等疾病的中藥口服制劑。其中的主藥連翹具有清熱止嘔、清利肝膽、除濕退黃、通調(diào)三焦等多種作用[1]。連翹中的主要生物活性成分連翹苷(phillyrin)具有較強(qiáng)的抗菌作用,并能抑制CAMP磷酸二酯酶的活性[2],故以連翹苷作為指標(biāo)成分,進(jìn)行了含量測定。
以往的文獻(xiàn)對(duì)連翹中連翹苷的測定方法有薄層色譜法[3]、梯度洗脫的RP-HPLC法[4]等。中藥制劑中連翹苷的測定未曾報(bào)道過。我們用氧化鋁柱層析對(duì)樣品進(jìn)行凈化處理后,采用ODS柱、乙腈-水(22∶78)為流動(dòng)相的RP-HPLC法,能夠準(zhǔn)確地對(duì)銀甲婦康液中的連翹苷含量進(jìn)行測定,陰性對(duì)照不干擾。我們還同時(shí)對(duì)連翹生藥及其他含連翹的中藥制劑黃連上清丸、維C銀翹片中的連翹苷進(jìn)行了測定,均取得較為滿意的結(jié)果。
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1 儀器與試藥
日本島津LC-6A高效液相色譜儀,SPD-6AV紫外檢測器,C-R4A數(shù)據(jù)處理機(jī)。
連翹苷對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所),銀甲婦康液(四川天府藥業(yè)集團(tuán)公司),維C銀翹片(宜昌民康藥業(yè)有限公司),黃連上清丸(成都軍區(qū)總醫(yī)院), 連翹(由四川天府藥業(yè)集團(tuán)公司命名,由成都軍區(qū)總醫(yī)院中醫(yī)科孟海霞主管藥師鑒定)。
乙腈(色譜用),重蒸餾水。
2 實(shí)驗(yàn)方法
2.1 供試品溶液的制備
2.1.1 銀甲婦康液 精密量取銀甲婦康液25 mL于水浴上揮至約10 mL,加甲醇10 mL,充分?jǐn)嚢韬筮^氧化鋁柱(17 cm×2 cm,中性氧化鋁20 g),用50%的甲醇35 mL少量多次洗脫,收集洗脫液于水浴上揮干,殘?jiān)?0%的甲醇溶解后轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中,加50%甲醇稀釋至刻度,過濾,棄去初濾液,收集續(xù)濾液備用。
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2.1.2 銀甲婦康液陰性對(duì)照 去掉處方中的連翹生藥后，照生產(chǎn)工藝制備得到銀甲婦康空白溶液(由天府藥業(yè)集團(tuán)有限公司提供)，然后按“2.1.1”項(xiàng)的方法制備得到陰性對(duì)照液。
2.1.3 連翹 取適量連翹生藥粉碎后,精密稱取生藥粉末約0.5 g,加甲醇15 mL超聲提取30 min后,轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻后過濾,棄去初濾液,取續(xù)濾液備用。
2.1.4 黃連上清丸 精密稱取黃連上清丸細(xì)粉約6.0 g,精密加入甲醇25 mL,超聲提取30 min,過濾,精密量取續(xù)濾液15 mL過氧化鋁柱(17 cm×2 cm,中性氧化鋁20 g),用50%的甲醇35 mL少量多次洗脫,收集洗脫液,水浴揮干后,精密加入50%的甲醇10 mL溶解,過濾,取續(xù)濾液即得。
2.1.5 維C銀翹片 取維C銀翹片20片,去糖衣后,精密稱定。研細(xì),精密稱取片粉適量(約相當(dāng)于維C銀翹片5片),精密加入甲醇25 mL,超聲提取30 min,以下操作同“2.1.4”項(xiàng)。
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2.2 連翹苷對(duì)照品溶液的配制 精密稱取連翹苷對(duì)照品約25 mg,置50 mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得濃度約為0.50 mg。mL-1的對(duì)照品貯備液。精密量取對(duì)照品貯備液15 mL于50 mL容量瓶中,用50%的甲醇稀釋到刻度,搖勻,即得濃度約為0.15mg。mL-1的對(duì)照品溶液。
2.3 色譜條件 經(jīng)試驗(yàn)后選定的色譜條件為色譜柱:Shim-Pack CLC ODS柱(150 mm×6.0 mm),柱溫:30 ℃;流動(dòng)相:乙腈-水(22∶78),流速:1.0 mL。min-1;檢測波長為230 nm。
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.1 色譜圖 在選定條件下, 連翹苷對(duì)照品、銀甲婦康液、連翹以及銀甲婦康液連翹陰性對(duì)照的色譜圖見圖1�？梢�, 連翹苷出峰處陰性對(duì)照無干擾。
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圖1 連翹苷和銀甲婦康液的色譜圖
a.連翹苷對(duì)照品 b.連翹苷陰性對(duì)照
c.銀甲婦康液 d.連翹藥材
1.連翹苷(23.06 min)
3.2 線性與范圍 分別取連翹苷對(duì)照品溶液1，3，5，7，9，11，13 μL進(jìn)樣，樣品平行操作，記錄色譜圖,以峰面積對(duì)連翹苷的進(jìn)樣量X(μg)作線性回歸，得到線性方程為:
A=8.446+759.6 X r=0.999 6
說明連翹苷進(jìn)樣量在0.15～1.95 μg范圍內(nèi)線性較好。
3.3 回收試驗(yàn)
, 百拇醫(yī)藥 3.3.1 凈化回收率 分別精密量取連翹苷對(duì)照品溶液2 mL,分別加水2 mL,照銀甲婦康液樣品預(yù)處理方法制備試驗(yàn)溶液。另精密量取同一對(duì)照品貯備液2 mL,置25 mL容量瓶中,用50%的甲醇稀釋到刻度,即得對(duì)照溶液。供試溶液和對(duì)照溶液分別進(jìn)樣10 μL,記錄色譜圖,根據(jù)所得峰面積,計(jì)算凈化回收率。平均凈化回收率為99.1%(n=6),RSD=0.74%。說明采用選定方法凈化樣品有很好的凈化回收率。
3.3.2 加樣回收率 取銀甲婦康空白溶液(銀甲婦康液的處方中去掉連翹，但制備工藝相同)25 mL,分別準(zhǔn)確加入一定量的連翹苷對(duì)照品,照銀甲婦康液樣品預(yù)處理方法制備得試驗(yàn)溶液。進(jìn)樣10 μL,另取連翹苷對(duì)照溶液1，3，5，7，9，11，13 μL進(jìn)樣,按標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定并計(jì)算加樣回收率,結(jié)果見表1。平均回收率為101.3%，RSD=1.3%，n=15。
表1 回收率測定結(jié)果(n=3) 加入量/mg
, 百拇醫(yī)藥 回收率/%
RSD/%
0.492
102.3
1.15
0.98
100.6
1.62
1.48
100.8
1.25
1.97
100.3
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0.76
2.46
102.3
0.23
3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 分別精密量取同一供試品溶液25 mL,照預(yù)處理項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備試驗(yàn)溶液,取10 μL進(jìn)樣,測得平均峰面積值為A=552 180,RSD為0.54%(n=6)。
3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 于0，2，4，6，8，12 h取同一供試品溶液和對(duì)照品溶液各10 μL,分別進(jìn)樣2次,計(jì)算日內(nèi)RSD分別為1.11%和0.91%。再于第1，2，3，4 d分別取同一供試品溶液和對(duì)照品溶液各10 μL,進(jìn)樣2次,計(jì)算日間RSD分別為2.54%和0.84%。
3.6 進(jìn)樣精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液,重復(fù)進(jìn)樣6次,根據(jù)峰面積值,計(jì)算得平均峰面積A=737 880,RSD為0.85%。
, 百拇醫(yī)藥
3.7 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 照“2.1.1”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，照“2.3”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣1次，以連翹苷峰計(jì)算，測得柱效為9.2×103，連翹苷與其前后雜質(zhì)的分離度分別為8.85和5.31。
3.8 樣品測定 采用前述的樣品預(yù)處理方法和色譜條件,分別測定了5個(gè)批號(hào)的銀甲婦康液中連翹苷的含量以及連翹生藥中連翹苷含量,結(jié)果見表2。表2 不同樣品中連翹苷的含量(n=3) 樣品
平均含量/mg。mL-1
RSD/%
銀甲婦康液970901
0.584
1.11
, http://www.www.srpcoatings.com
970904
0.512
0.15
971001
0.757
1.19
971002
0.892
0.42
950903
0.255
0.61
連翹
, 百拇醫(yī)藥
0.0120(mg。mg-1)
1.35
4 討論
4.1 我們?cè)?jīng)采用過甲醇(含1%的四氫呋喃)-水(含0.01 mol。L-1磷酸二氫鈉,pH 3.2)(40∶60)的系統(tǒng),不同比例的乙腈-甲醇-水系統(tǒng),以及不同比例的乙腈-水系統(tǒng),結(jié)果表明：乙腈-水為22∶78時(shí), 連翹苷峰形對(duì)稱,分離完全,陰性對(duì)照不干擾。我們同時(shí)還發(fā)現(xiàn),乙腈比例微小的變化會(huì)較顯著地影響連翹苷的保留時(shí)間。
4.2 我們還嘗試采用選定的方法對(duì)連翹苷的其它2種制劑:黃連上清丸、維C銀翹片中的連翹苷進(jìn)行了分離、測定。色譜圖見圖2,測定結(jié)果見表3。可知, 連翹苷的峰形對(duì)稱,與其他峰的分離較好,達(dá)到基線分離。說明實(shí)驗(yàn)方法可用于此類制劑中的連翹苷含量測定。
, 百拇醫(yī)藥
圖2 連翹制劑的色譜圖
a.黃連上清丸 b.維C銀翹片
1.連翹苷(23.15 min)
表3 其它連翹制劑中連翹苷的測定結(jié)果(n=3) 樣品
平均含量
RSD/%
黃連上清丸
0.42 mg。g-1
1.35
維C銀翹片
0.58 mg每片
, 百拇醫(yī)藥
1.26
4.3 在樣品預(yù)處理方法中,我們?cè)鴩L試采用過液液萃取法和硅膠柱作為層析柱的方法。前者由于凈化不完全,引入雜質(zhì)多而放棄。后者則會(huì)使連翹苷在柱上的保留性較強(qiáng),不易被完全洗脫。采用中性氧化鋁柱,連翹苷能很容易地被50%甲醇洗脫，而中藥制劑中黃酮類等干擾組分能夠有效地被保留在柱上,用于以上幾個(gè)品種的預(yù)處理,凈化效果好,故確定采用氧化鋁柱。
4.4 在對(duì)不同批號(hào)的銀甲婦康液中連翹苷測定時(shí),發(fā)現(xiàn)其含量差異較大。
參考文獻(xiàn)
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(本文于1999年7月26日修改回), 百拇醫(yī)藥