國(guó)產(chǎn)卡維地洛片藥代動(dòng)力學(xué)及相對(duì)生物利用度研究
作者：陳匯 顧世芬 肖宙 曾繁典 鄭意端
單位：陳匯 顧世芬 肖宙 鄭意端(同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)臨床藥理研究所，武漢，430030)；曾繁典(深圳市源政藥業(yè)有限公司，深圳)
關(guān)鍵詞：卡維地洛；藥代動(dòng)力學(xué)；生物利用度；高效液相色譜法
中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志000314 摘 要 10名健康志愿者隨機(jī)交叉單劑量口服20mg國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口卡維地洛片進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)和相對(duì)生物利用度研究。采用高效液相色譜-熒光法測(cè)定其血藥濃度。結(jié)果表明，卡維地洛口服后體內(nèi)動(dòng)力學(xué)過程符合二房室模型，國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口片劑的Tmax分別為1.15±0.88和1.15±0.78 h，Cmax分別為72.5±27.3和71.4±27.9 m g.L-1，T1/2b 分別為7.57±2.61和7.74±3.22 h，AUC0~t分別為281.8±62.2和308.6±114.4 m g.L-1.h, AUC0~¥ 分別為314.9±67.1和345.8±127.9m g.L-1.h。國(guó)產(chǎn)卡維地洛片相對(duì)生物利用度為98.5±24.6%。兩種片劑的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)無顯著差異(P >0.05)。AUC0~t、AUC0~¥ 、Cmax值對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后經(jīng)方差分析，雙單側(cè)t檢驗(yàn)及90%置信區(qū)間法作等效性判定，認(rèn)為兩種片劑為生物等效制劑。
, 百拇醫(yī)藥
The Pharmacokinetics and Relative Bioavailability of Carvedilol Tablets in Healthy Volunteers
CHEN Hui, GU SHi-Fen, XIAO Zhou, ZENG Fan-Dian,ZHENG Yi-Duan
(Institute of Clinical Pharmacology,Tongji Medical University, Wuhan 430030)
Abstract The Pharmacokinetics and relative bioavailability of domestic and imported carvedilol tablets were studied following a single oral dose of 20mg given to 10 normal male volunteers in a randomized crossover design. Plasma levels were determined by HPLC-fluorescence. The time course of plasma concentration of carvedilol tablets after oral dosing was fitted to the two compartment model. The main pharmacokinetic parameters were Cmax 72.5±27.3 and 71.4±27.9 m g.L-1 at 1.15±0.88 and 1.15±0.78 h, T1/2b 7.57±2.61 and 7.74±3.22 h，AUC0~t 281.8±62.2 and 308.6±114.4 m g.L-1.h, AUC0~¥ 314.9±67.1 and 345.8±127.9 m g.L-1.h for domestic and imported tablets, respectively. The relative bioavailability of domestic tablets was 98.5±24.6%. The bioequivalence of two tablets were calculated by analysis of variance, two one-sided t test and 90%-confidence intervals. The results of statistical analysis demonstrated that the two tablets were bioequivalent.
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Key words carvedilol; pharmacokinetics; bioavailability; HPLC
卡維地洛(carvedilol)為一新型有多種藥理活性的抗高血壓藥物，具有非選擇性b 受體阻滯作用及選擇性a 1受體阻滯作用，高濃度尚有鈣拮抗作用，同時(shí)具有心肌保護(hù)及血管保護(hù)作用[ 1，2] 。臨床主要治療輕、中度原發(fā)性高血壓，用于心絞痛、充血性心力衰竭及原發(fā)性擴(kuò)大型心肌病的臨床試驗(yàn)觀察，亦獲較好療效。近兩年，國(guó)內(nèi)已開始研究和應(yīng)用卡維地洛，但有關(guān)藥物的動(dòng)力學(xué)資料尚欠缺。為此，本文擬進(jìn)行國(guó)產(chǎn)卡維地洛片的藥代動(dòng)力學(xué)研究，并以日本卡維地洛片作為對(duì)照制劑，研究國(guó)產(chǎn)制劑的相對(duì)生物利用度，并作出生物等效性評(píng)價(jià)，以期為卡維地洛的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。材料與方法
1.藥品與儀器
1.1藥品與試劑
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試驗(yàn)藥：卡維地洛片，深圳市源政藥業(yè)有限公司研制,每片10 mg，批號(hào)970711。對(duì)照藥：卡維地洛片，日本第一制藥株式會(huì)社提供，每片10 mg，批號(hào)A4010�？ňS地洛標(biāo)準(zhǔn)品由深圳市源政藥業(yè)有限公司提供。試劑：內(nèi)標(biāo)b -萘酚系德國(guó)進(jìn)口分裝，甲醇為色譜純(天津四友產(chǎn)品)，硫酸為優(yōu)級(jí)純，其余試劑均為分析純。實(shí)驗(yàn)用水為去離子亞沸重蒸水。
1.2儀器
高效液相色譜儀：Merck-Hitachi L-6000 泵，Merck-Hitachi F-1000 熒光檢測(cè)器，Gilson 201-401 自動(dòng)進(jìn)樣器，Shimadzu CR-3A 積分儀。
2. 試驗(yàn)方案
2.1 受試對(duì)象
10名男性健康志愿者，年齡20.5± 1.2歲，體重57.6± 4.6 kg，身高166± 4.4 cm。受試者無心、肝、腎病史，無低血壓史。試驗(yàn)期間不用任何其他藥物。經(jīng)全面體檢, 血尿常規(guī)、肝腎功能、血壓及心電圖均正常。受試者均簽署知情同意書。
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2.2 試驗(yàn)方法
受試者隨機(jī)分為兩組，每組5人，并隨機(jī)確定服藥順序，進(jìn)行自身對(duì)照交叉試驗(yàn)。禁食過夜后，于次日清晨7：30～8：00分別空腹口服試驗(yàn)藥或?qū)φ账幐?0 mg，用150 ml溫開水送服。服藥后4 h進(jìn)食統(tǒng)一食譜的飲食，晚餐仍統(tǒng)一用餐。試驗(yàn)期間固定飲水時(shí)間和飲水量，禁飲各種飲料。停藥清洗期為一周。
2.3 血樣采集
于服藥前和服藥后0.25，0.5，1，2，3，4，6，8，10，12，24 h肘靜脈采血4 ml，血樣置于肝素化采血管，離心后分離血漿，于-20℃以下貯存待測(cè)。
3 血藥濃度測(cè)定
3.1色譜條件
本試驗(yàn)改良文獻(xiàn)方法[3] 。流動(dòng)相：甲醇-0.03 mol.L-1 磷酸二氫鉀(70:30)，流速1 ml.min-1。Crom Hypersil ODS 柱 5 m m 250×4.6 mm。熒光檢測(cè)器激發(fā)波長(zhǎng)285 nm，發(fā)射波長(zhǎng)340 nm。
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3.2 樣品處理
取1 ml血漿，加入70 m l(1 mg.L-1)內(nèi)標(biāo)溶液，0.1 mol.L-1 硼酸緩沖液(pH 8.0)0.5 ml，乙醚5 ml，振蕩混合10 min，離心10 min(3000 r.min-1)。吸取有機(jī)相，加入0.05 mol.L-1的硫酸300 m l，振蕩離心后,取水相50 m l進(jìn)入HPLC系統(tǒng)。
3.3 方法學(xué)考察
取1 ml人空白血漿，準(zhǔn)確加入卡維地洛標(biāo)準(zhǔn)液，使其濃度分別為1.56, 3.12, 6.25, 12.5, 25, 50, 100 m g.L-1，按樣品處理項(xiàng)下操作，得血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線。在1.56～100 m g.L-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程：R = - 0.1029+0.04206C(R：卡維地洛與內(nèi)標(biāo)峰高比值，C：濃度)，r = 0.9988。最低檢測(cè)濃度為1.0 m g.L-1。測(cè)得本法低、中、高濃度(5、20、50 m g.L-1)的提取回收率為79.64%、75.84%和74.0%，見表1。精密度試驗(yàn)的日內(nèi)、日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差分別<4%和<6%(表2)，符合生物樣品分析的要求。藥物血漿色譜圖見圖1，卡維地洛與內(nèi)標(biāo)分離良好，血漿中雜質(zhì)對(duì)測(cè)定無干擾。內(nèi)標(biāo)與卡維地洛的Rt分別為5.22 min和6.81min，二者的分離度Rs為2.2。
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Table 1. Extraction recovery of method
Added
Extraction recovery
RSD
m g.L-1
%
%
5
79.64± 1.71
2.15
20
75.84± 2.74
, 百拇醫(yī)藥
3.56
50
74.00± 5.04
6.81
mean± SD, n=5
Table 2. precision of method
Concentration
Within-day
Between-day
m g.L-1
RSD %
, 百拇醫(yī)藥 RSD %
5
2.41
5.03
20
3.18
4.75
50
2.68
4.22
n=5
Fig1. HPLC chromatograms of catvedilol A:carvedilol standard;B:blank plasma;C:blank plasma with internal standard;D:plasma containing carveddilol and internal standarrd(1.internal standard;2.carvedilol)
, 百拇醫(yī)藥
4. 數(shù)據(jù)分析
采用3p87藥代動(dòng)力學(xué)程序進(jìn)行藥時(shí)曲線擬合及參數(shù)計(jì)算，Tmax和Cmax用實(shí)測(cè)值，AUC0～t和AUC0～∞ 運(yùn)用梯形法計(jì)算，相對(duì)生物利用度按下列公式計(jì)算：Fr = AUC0～t(國(guó)產(chǎn)) ×100%/AUC0～t(進(jìn)口)。對(duì)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)采用配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，并對(duì)AUC0～t、AUC0～∞和Cmax值進(jìn)行方差分析、雙單側(cè)t檢驗(yàn)及90%置信區(qū)間估計(jì)，對(duì)兩種片劑作出生物等效性評(píng)價(jià)。
結(jié)果
1.藥代動(dòng)力學(xué)研究
10名健康志愿者單劑量交叉口服國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口卡維地洛片20 mg ，其血藥濃度經(jīng)時(shí)過程見圖2，兩種片劑的體內(nèi)動(dòng)力學(xué)曲線變化趨勢(shì)基本一致，符合血管外給藥二房室模型。所得藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見表3，兩種片劑的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)，均無顯著性差異(P >0.05)。方差分析顯示，AUC0～t、AUC0～∞ 和Cmax在受試者個(gè)體間差異極其顯著(P<0.01)。本試驗(yàn)測(cè)得藥時(shí)曲線下面積殘余部分(AUC0～∞)<11%。
, 百拇醫(yī)藥
Table 3. The pharmacokinetic parameters of carvedilol tablets
after a single oral dose of 20 mg in 10 volunteers
Parameters
Domestic
Imported
T1/2Ka (h)
0.44± 0.39
0.60± 0.97
T1/2a (h)
, 百拇醫(yī)藥 1.06± 0.34
1.07± 0.52
T1/2b (h)
7.57± 2.61
7.74± 3.22
V/F (L)
212.7± 93.2
214.6± 107.3
CL/F (l.h-1)
72.4± 21.4
71.3± 33.6
, 百拇醫(yī)藥 Tmax (h)
1.15± 0.88
1.15± 0.78
Cmax (m g.L-1)
72.5± 27.3
71.4± 27.9
AUC0~ t ((m g.L-1.h)
281.8± 62.2
308.6± 114.4
AUC0~ ¥ ((m g.L-1.h)
314.9± 67.1
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345.8± 127.9
mean± SD
Fig2. Mean plasma concentration-time curves of catvedilol tablets after a single oral dose of 20mg in voluteers
2.國(guó)產(chǎn)片的相對(duì)生物利用度研究
按每名受試者單劑量口服20 mg卡維地洛兩種片劑的AUC0～t，計(jì)算國(guó)產(chǎn)片劑的相對(duì)生物利用度為98.5± 24.6%。將兩種片劑的AUC0～t、AUC0～∞ 和Cmax值經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后方差分析顯示，在兩種制劑及給藥周期間均無顯著差異(P >0.05)。生物等效性統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表4。雙單側(cè)t檢驗(yàn)表明，AUC0～t、AUC0～∞ 和Cmax的檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量t1、t2均大于t0.05(1.860)值，故接受兩種片劑生物等效的假設(shè)；AUC0｀t90%置信區(qū)間為83.1～110.8%，AUC0～∞ 為82.2～111.8%，Cmax為87.4～ 121.3%，按照生物等效性判定標(biāo)準(zhǔn)，試驗(yàn)制劑AUC的90%置信區(qū)間落在標(biāo)準(zhǔn)參比制劑的80～125%之間，Cmax90% 置信區(qū)間落在70~ 145%之間，即可認(rèn)為生物等效[ 4] ，根據(jù)本試驗(yàn)結(jié)果，可以認(rèn)為兩制劑生物等效。
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Table 4. Results of bioequivalent analysis
Parameters
Two one-sided t test
t1 t2
90%-confidence
interval
lnAUC0~ t
2.3558*
3.4166*
83.13~ 110.82
lnAUC0~ ¥
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2.1864*
3.2155*
82.19~ 111.75
lnCmax
2.8714*
2.2048*
87.44~ 121.26
*P<0.05, T0.05(8)=1.860
3.臨床觀察
試驗(yàn)期間同時(shí)觀察血壓及脈率變化，結(jié)果表明，健康人服用卡維地洛20 mg后，約0.5 h血壓開始下降，2～4 h血壓下降達(dá)最大值，收縮壓及舒張壓最大下降幅度分別為14.3± 9.7/11.8± 8.6 mmHg，12～24 h血壓基本回復(fù)至用藥前水平。卡維地洛口服對(duì)脈率的影響不大。
, 百拇醫(yī)藥
試驗(yàn)過程中，10名受試者未出現(xiàn)任何藥物不良反應(yīng)。
討論
本文采用HPLC-熒光法測(cè)定卡維地洛血漿濃度，選擇甲醇-磷酸二氫鉀系統(tǒng)為流動(dòng)相，能達(dá)到良好的分離效果，血漿中內(nèi)源性雜質(zhì)對(duì)卡維地洛及內(nèi)標(biāo)均無干擾，且分析周期短，靈敏度高。我們?cè)囉谜和楹投燃淄樽鳛樘崛∪軇�，但正己烷提取物雜質(zhì)太多，干擾測(cè)定；二氯甲烷提取物乳化現(xiàn)象嚴(yán)重，不易分離。采用血樣經(jīng)乙醚提取，再以硫酸反提，該法提取物即無雜質(zhì)干擾，也易于分離。血漿中加入pH 8.0的緩沖液，可提高提取效率并減少雜質(zhì)干擾。
研究表明，口服卡維地洛片的體內(nèi)動(dòng)力學(xué)過程符合血管外給藥二房室模型�？诜笪蛰^為迅速，平均1.15 h血藥濃度達(dá)峰值，與文獻(xiàn)報(bào)道接近[ 5，6] ，其末端相消除半衰期約7.5 h，與文獻(xiàn)[ 6，7] 值6.4~ 7.9 h基本一致，而與另外報(bào)告[ 5] 的1.8 h差距較大，其原因可能與擬合房室數(shù)不同或末端相取點(diǎn)及參數(shù)計(jì)算方法不同等有關(guān)[ 1] 。此外，研究發(fā)現(xiàn)，兩種片劑的經(jīng)時(shí)血藥濃度和藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)在不同受試者間存在較大差異，此現(xiàn)象符合多數(shù)b 受體阻滯劑的藥代動(dòng)力學(xué)特征，可能與該類藥物有較高的“首過效應(yīng)”有關(guān)。故建議臨床使用本制劑時(shí)，應(yīng)根據(jù)病人的具體情況調(diào)整給藥劑量，以保證用藥的有效性與安全性。
, 百拇醫(yī)藥
卡維地洛國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口片的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)無顯著差異，表明兩種制劑在人體內(nèi)的動(dòng)力學(xué)過程及吸收、分布、消除性質(zhì)相似。國(guó)產(chǎn)片與進(jìn)口片比較的相對(duì)生物利用度為98.5± 24.6%，經(jīng)生物等效性統(tǒng)計(jì)分析，兩種制劑為生物等效制劑。試驗(yàn)期間，同時(shí)觀察了健康受試者血壓、脈率變化，未發(fā)生任何藥物不良反應(yīng)，本項(xiàng)研究結(jié)果為國(guó)產(chǎn)卡維地洛片劑的臨床應(yīng)用提供了必要的依據(jù)。
參考文獻(xiàn)
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4，魏樹禮，主編. 生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué). 北京: 北京醫(yī)科大學(xué)、中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1997; 138.
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1999-12-05
2000-03-17, http://www.www.srpcoatings.com
單位：陳匯 顧世芬 肖宙 鄭意端(同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)臨床藥理研究所，武漢，430030)；曾繁典(深圳市源政藥業(yè)有限公司，深圳)
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中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志000314 摘 要 10名健康志愿者隨機(jī)交叉單劑量口服20mg國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口卡維地洛片進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)和相對(duì)生物利用度研究。采用高效液相色譜-熒光法測(cè)定其血藥濃度。結(jié)果表明，卡維地洛口服后體內(nèi)動(dòng)力學(xué)過程符合二房室模型，國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口片劑的Tmax分別為1.15±0.88和1.15±0.78 h，Cmax分別為72.5±27.3和71.4±27.9 m g.L-1，T1/2b 分別為7.57±2.61和7.74±3.22 h，AUC0~t分別為281.8±62.2和308.6±114.4 m g.L-1.h, AUC0~¥ 分別為314.9±67.1和345.8±127.9m g.L-1.h。國(guó)產(chǎn)卡維地洛片相對(duì)生物利用度為98.5±24.6%。兩種片劑的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)無顯著差異(P >0.05)。AUC0~t、AUC0~¥ 、Cmax值對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后經(jīng)方差分析，雙單側(cè)t檢驗(yàn)及90%置信區(qū)間法作等效性判定，認(rèn)為兩種片劑為生物等效制劑。
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CHEN Hui, GU SHi-Fen, XIAO Zhou, ZENG Fan-Dian,ZHENG Yi-Duan
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Abstract The Pharmacokinetics and relative bioavailability of domestic and imported carvedilol tablets were studied following a single oral dose of 20mg given to 10 normal male volunteers in a randomized crossover design. Plasma levels were determined by HPLC-fluorescence. The time course of plasma concentration of carvedilol tablets after oral dosing was fitted to the two compartment model. The main pharmacokinetic parameters were Cmax 72.5±27.3 and 71.4±27.9 m g.L-1 at 1.15±0.88 and 1.15±0.78 h, T1/2b 7.57±2.61 and 7.74±3.22 h，AUC0~t 281.8±62.2 and 308.6±114.4 m g.L-1.h, AUC0~¥ 314.9±67.1 and 345.8±127.9 m g.L-1.h for domestic and imported tablets, respectively. The relative bioavailability of domestic tablets was 98.5±24.6%. The bioequivalence of two tablets were calculated by analysis of variance, two one-sided t test and 90%-confidence intervals. The results of statistical analysis demonstrated that the two tablets were bioequivalent.
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Key words carvedilol; pharmacokinetics; bioavailability; HPLC
卡維地洛(carvedilol)為一新型有多種藥理活性的抗高血壓藥物，具有非選擇性b 受體阻滯作用及選擇性a 1受體阻滯作用，高濃度尚有鈣拮抗作用，同時(shí)具有心肌保護(hù)及血管保護(hù)作用[ 1，2] 。臨床主要治療輕、中度原發(fā)性高血壓，用于心絞痛、充血性心力衰竭及原發(fā)性擴(kuò)大型心肌病的臨床試驗(yàn)觀察，亦獲較好療效。近兩年，國(guó)內(nèi)已開始研究和應(yīng)用卡維地洛，但有關(guān)藥物的動(dòng)力學(xué)資料尚欠缺。為此，本文擬進(jìn)行國(guó)產(chǎn)卡維地洛片的藥代動(dòng)力學(xué)研究，并以日本卡維地洛片作為對(duì)照制劑，研究國(guó)產(chǎn)制劑的相對(duì)生物利用度，并作出生物等效性評(píng)價(jià)，以期為卡維地洛的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。材料與方法
1.藥品與儀器
1.1藥品與試劑
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試驗(yàn)藥：卡維地洛片，深圳市源政藥業(yè)有限公司研制,每片10 mg，批號(hào)970711。對(duì)照藥：卡維地洛片，日本第一制藥株式會(huì)社提供，每片10 mg，批號(hào)A4010�？ňS地洛標(biāo)準(zhǔn)品由深圳市源政藥業(yè)有限公司提供。試劑：內(nèi)標(biāo)b -萘酚系德國(guó)進(jìn)口分裝，甲醇為色譜純(天津四友產(chǎn)品)，硫酸為優(yōu)級(jí)純，其余試劑均為分析純。實(shí)驗(yàn)用水為去離子亞沸重蒸水。
1.2儀器
高效液相色譜儀：Merck-Hitachi L-6000 泵，Merck-Hitachi F-1000 熒光檢測(cè)器，Gilson 201-401 自動(dòng)進(jìn)樣器，Shimadzu CR-3A 積分儀。
2. 試驗(yàn)方案
2.1 受試對(duì)象
10名男性健康志愿者，年齡20.5± 1.2歲，體重57.6± 4.6 kg，身高166± 4.4 cm。受試者無心、肝、腎病史，無低血壓史。試驗(yàn)期間不用任何其他藥物。經(jīng)全面體檢, 血尿常規(guī)、肝腎功能、血壓及心電圖均正常。受試者均簽署知情同意書。
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2.2 試驗(yàn)方法
受試者隨機(jī)分為兩組，每組5人，并隨機(jī)確定服藥順序，進(jìn)行自身對(duì)照交叉試驗(yàn)。禁食過夜后，于次日清晨7：30～8：00分別空腹口服試驗(yàn)藥或?qū)φ账幐?0 mg，用150 ml溫開水送服。服藥后4 h進(jìn)食統(tǒng)一食譜的飲食，晚餐仍統(tǒng)一用餐。試驗(yàn)期間固定飲水時(shí)間和飲水量，禁飲各種飲料。停藥清洗期為一周。
2.3 血樣采集
于服藥前和服藥后0.25，0.5，1，2，3，4，6，8，10，12，24 h肘靜脈采血4 ml，血樣置于肝素化采血管，離心后分離血漿，于-20℃以下貯存待測(cè)。
3 血藥濃度測(cè)定
3.1色譜條件
本試驗(yàn)改良文獻(xiàn)方法[3] 。流動(dòng)相：甲醇-0.03 mol.L-1 磷酸二氫鉀(70:30)，流速1 ml.min-1。Crom Hypersil ODS 柱 5 m m 250×4.6 mm。熒光檢測(cè)器激發(fā)波長(zhǎng)285 nm，發(fā)射波長(zhǎng)340 nm。
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3.2 樣品處理
取1 ml血漿，加入70 m l(1 mg.L-1)內(nèi)標(biāo)溶液，0.1 mol.L-1 硼酸緩沖液(pH 8.0)0.5 ml，乙醚5 ml，振蕩混合10 min，離心10 min(3000 r.min-1)。吸取有機(jī)相，加入0.05 mol.L-1的硫酸300 m l，振蕩離心后,取水相50 m l進(jìn)入HPLC系統(tǒng)。
3.3 方法學(xué)考察
取1 ml人空白血漿，準(zhǔn)確加入卡維地洛標(biāo)準(zhǔn)液，使其濃度分別為1.56, 3.12, 6.25, 12.5, 25, 50, 100 m g.L-1，按樣品處理項(xiàng)下操作，得血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線。在1.56～100 m g.L-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程：R = - 0.1029+0.04206C(R：卡維地洛與內(nèi)標(biāo)峰高比值，C：濃度)，r = 0.9988。最低檢測(cè)濃度為1.0 m g.L-1。測(cè)得本法低、中、高濃度(5、20、50 m g.L-1)的提取回收率為79.64%、75.84%和74.0%，見表1。精密度試驗(yàn)的日內(nèi)、日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差分別<4%和<6%(表2)，符合生物樣品分析的要求。藥物血漿色譜圖見圖1，卡維地洛與內(nèi)標(biāo)分離良好，血漿中雜質(zhì)對(duì)測(cè)定無干擾。內(nèi)標(biāo)與卡維地洛的Rt分別為5.22 min和6.81min，二者的分離度Rs為2.2。
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Table 1. Extraction recovery of method
Added
Extraction recovery
RSD
m g.L-1
%
%
5
79.64± 1.71
2.15
20
75.84± 2.74
, 百拇醫(yī)藥
3.56
50
74.00± 5.04
6.81
mean± SD, n=5
Table 2. precision of method
Concentration
Within-day
Between-day
m g.L-1
RSD %
, 百拇醫(yī)藥 RSD %
5
2.41
5.03
20
3.18
4.75
50
2.68
4.22
n=5
Fig1. HPLC chromatograms of catvedilol A:carvedilol standard;B:blank plasma;C:blank plasma with internal standard;D:plasma containing carveddilol and internal standarrd(1.internal standard;2.carvedilol)
, 百拇醫(yī)藥
4. 數(shù)據(jù)分析
采用3p87藥代動(dòng)力學(xué)程序進(jìn)行藥時(shí)曲線擬合及參數(shù)計(jì)算，Tmax和Cmax用實(shí)測(cè)值，AUC0～t和AUC0～∞ 運(yùn)用梯形法計(jì)算，相對(duì)生物利用度按下列公式計(jì)算：Fr = AUC0～t(國(guó)產(chǎn)) ×100%/AUC0～t(進(jìn)口)。對(duì)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)采用配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，并對(duì)AUC0～t、AUC0～∞和Cmax值進(jìn)行方差分析、雙單側(cè)t檢驗(yàn)及90%置信區(qū)間估計(jì)，對(duì)兩種片劑作出生物等效性評(píng)價(jià)。
結(jié)果
1.藥代動(dòng)力學(xué)研究
10名健康志愿者單劑量交叉口服國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口卡維地洛片20 mg ，其血藥濃度經(jīng)時(shí)過程見圖2，兩種片劑的體內(nèi)動(dòng)力學(xué)曲線變化趨勢(shì)基本一致，符合血管外給藥二房室模型。所得藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見表3，兩種片劑的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)，均無顯著性差異(P >0.05)。方差分析顯示，AUC0～t、AUC0～∞ 和Cmax在受試者個(gè)體間差異極其顯著(P<0.01)。本試驗(yàn)測(cè)得藥時(shí)曲線下面積殘余部分(AUC0～∞)<11%。
, 百拇醫(yī)藥
Table 3. The pharmacokinetic parameters of carvedilol tablets
after a single oral dose of 20 mg in 10 volunteers
Parameters
Domestic
Imported
T1/2Ka (h)
0.44± 0.39
0.60± 0.97
T1/2a (h)
, 百拇醫(yī)藥 1.06± 0.34
1.07± 0.52
T1/2b (h)
7.57± 2.61
7.74± 3.22
V/F (L)
212.7± 93.2
214.6± 107.3
CL/F (l.h-1)
72.4± 21.4
71.3± 33.6
, 百拇醫(yī)藥 Tmax (h)
1.15± 0.88
1.15± 0.78
Cmax (m g.L-1)
72.5± 27.3
71.4± 27.9
AUC0~ t ((m g.L-1.h)
281.8± 62.2
308.6± 114.4
AUC0~ ¥ ((m g.L-1.h)
314.9± 67.1
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345.8± 127.9
mean± SD
Fig2. Mean plasma concentration-time curves of catvedilol tablets after a single oral dose of 20mg in voluteers
2.國(guó)產(chǎn)片的相對(duì)生物利用度研究
按每名受試者單劑量口服20 mg卡維地洛兩種片劑的AUC0～t，計(jì)算國(guó)產(chǎn)片劑的相對(duì)生物利用度為98.5± 24.6%。將兩種片劑的AUC0～t、AUC0～∞ 和Cmax值經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后方差分析顯示，在兩種制劑及給藥周期間均無顯著差異(P >0.05)。生物等效性統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表4。雙單側(cè)t檢驗(yàn)表明，AUC0～t、AUC0～∞ 和Cmax的檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量t1、t2均大于t0.05(1.860)值，故接受兩種片劑生物等效的假設(shè)；AUC0｀t90%置信區(qū)間為83.1～110.8%，AUC0～∞ 為82.2～111.8%，Cmax為87.4～ 121.3%，按照生物等效性判定標(biāo)準(zhǔn)，試驗(yàn)制劑AUC的90%置信區(qū)間落在標(biāo)準(zhǔn)參比制劑的80～125%之間，Cmax90% 置信區(qū)間落在70~ 145%之間，即可認(rèn)為生物等效[ 4] ，根據(jù)本試驗(yàn)結(jié)果，可以認(rèn)為兩制劑生物等效。
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Table 4. Results of bioequivalent analysis
Parameters
Two one-sided t test
t1 t2
90%-confidence
interval
lnAUC0~ t
2.3558*
3.4166*
83.13~ 110.82
lnAUC0~ ¥
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2.1864*
3.2155*
82.19~ 111.75
lnCmax
2.8714*
2.2048*
87.44~ 121.26
*P<0.05, T0.05(8)=1.860
3.臨床觀察
試驗(yàn)期間同時(shí)觀察血壓及脈率變化，結(jié)果表明，健康人服用卡維地洛20 mg后，約0.5 h血壓開始下降，2～4 h血壓下降達(dá)最大值，收縮壓及舒張壓最大下降幅度分別為14.3± 9.7/11.8± 8.6 mmHg，12～24 h血壓基本回復(fù)至用藥前水平。卡維地洛口服對(duì)脈率的影響不大。
, 百拇醫(yī)藥
試驗(yàn)過程中，10名受試者未出現(xiàn)任何藥物不良反應(yīng)。
討論
本文采用HPLC-熒光法測(cè)定卡維地洛血漿濃度，選擇甲醇-磷酸二氫鉀系統(tǒng)為流動(dòng)相，能達(dá)到良好的分離效果，血漿中內(nèi)源性雜質(zhì)對(duì)卡維地洛及內(nèi)標(biāo)均無干擾，且分析周期短，靈敏度高。我們?cè)囉谜和楹投燃淄樽鳛樘崛∪軇�，但正己烷提取物雜質(zhì)太多，干擾測(cè)定；二氯甲烷提取物乳化現(xiàn)象嚴(yán)重，不易分離。采用血樣經(jīng)乙醚提取，再以硫酸反提，該法提取物即無雜質(zhì)干擾，也易于分離。血漿中加入pH 8.0的緩沖液，可提高提取效率并減少雜質(zhì)干擾。
研究表明，口服卡維地洛片的體內(nèi)動(dòng)力學(xué)過程符合血管外給藥二房室模型�？诜笪蛰^為迅速，平均1.15 h血藥濃度達(dá)峰值，與文獻(xiàn)報(bào)道接近[ 5，6] ，其末端相消除半衰期約7.5 h，與文獻(xiàn)[ 6，7] 值6.4~ 7.9 h基本一致，而與另外報(bào)告[ 5] 的1.8 h差距較大，其原因可能與擬合房室數(shù)不同或末端相取點(diǎn)及參數(shù)計(jì)算方法不同等有關(guān)[ 1] 。此外，研究發(fā)現(xiàn)，兩種片劑的經(jīng)時(shí)血藥濃度和藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)在不同受試者間存在較大差異，此現(xiàn)象符合多數(shù)b 受體阻滯劑的藥代動(dòng)力學(xué)特征，可能與該類藥物有較高的“首過效應(yīng)”有關(guān)。故建議臨床使用本制劑時(shí)，應(yīng)根據(jù)病人的具體情況調(diào)整給藥劑量，以保證用藥的有效性與安全性。
, 百拇醫(yī)藥
卡維地洛國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口片的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)無顯著差異，表明兩種制劑在人體內(nèi)的動(dòng)力學(xué)過程及吸收、分布、消除性質(zhì)相似。國(guó)產(chǎn)片與進(jìn)口片比較的相對(duì)生物利用度為98.5± 24.6%，經(jīng)生物等效性統(tǒng)計(jì)分析，兩種制劑為生物等效制劑。試驗(yàn)期間，同時(shí)觀察了健康受試者血壓、脈率變化，未發(fā)生任何藥物不良反應(yīng)，本項(xiàng)研究結(jié)果為國(guó)產(chǎn)卡維地洛片劑的臨床應(yīng)用提供了必要的依據(jù)。
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1999-12-05
2000-03-17, http://www.www.srpcoatings.com