乙肝病毒表面抗原基因在胡蘿卜中的克隆及表達(dá)
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北京市肝炎研究所;北京農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究中心 北京100054 趙秀英;張曉東;張霆;黃德莊;閻惠平;羅朝霞;
乙肝病毒表面抗原|基因槍|胡蘿卜|除草劑抗性
參見附件(55kb)。
北京市肝炎研究所;北京農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究中心 北京100054 趙秀英;張曉東;張霆;黃德莊;閻惠平;羅朝霞;楊鳳平
關(guān)鍵詞:乙肝病毒表面抗原;基因槍;胡蘿卜;除草劑抗性
摘要:構(gòu)建HBV表面抗原(HBsAg)植物表達(dá)載體并在胡蘿卜植株中表達(dá)。采用自行構(gòu)建adr亞型HBsAg基因克隆T adr,再次酶切獲得860bp含PreS2的HBsAg基因片段,將其插入到植物表達(dá)載體pBPC55,新質(zhì)粒命名為pBPC91adr。將其與含除草劑抗性基因及GUS蛋白基因的篩選質(zhì)粒pBPC93共同經(jīng)基因槍(PDS 1000/He)轉(zhuǎn)化胡蘿卜懸浮細(xì)胞,經(jīng)含除草劑(Biokaphos)的培養(yǎng)基篩選及植物激素誘導(dǎo)分化,獲得除草劑抗性胡蘿卜幼苗。結(jié)果為轉(zhuǎn)化后8周,自胡蘿卜細(xì)胞中分化出除草劑抗性胡蘿卜幼苗。提取新分化幼苗總DNA,特異性引物PCR擴(kuò)增后可見860bp擴(kuò)增帶;Southern Bkot證明有HBsAg基因整合,胡蘿卜蛋白萃取物的Western Bkot及ELISA檢測證實有HBsAg蛋白表達(dá)。利用基因槍轉(zhuǎn)化使質(zhì)粒pBPC91adr中HBsAg基因在胡蘿卜幼苗內(nèi)整合并表達(dá),提示以植物生產(chǎn)疫苗具有可行性。
北京市肝炎研究所;北京農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究中心 北京100054 趙秀英;張曉東;張霆;黃德莊;閻惠平;羅朝霞;楊鳳平
關(guān)鍵詞:乙肝病毒表面抗原;基因槍;胡蘿卜;除草劑抗性
摘要:構(gòu)建HBV表面抗原(HBsAg)植物表達(dá)載體并在胡蘿卜植株中表達(dá)。采用自行構(gòu)建adr亞型HBsAg基因克隆T adr,再次酶切獲得860bp含PreS2的HBsAg基因片段,將其插入到植物表達(dá)載體pBPC55,新質(zhì)粒命名為pBPC91adr。將其與含除草劑抗性基因及GUS蛋白基因的篩選質(zhì)粒pBPC93共同經(jīng)基因槍(PDS 1000/He)轉(zhuǎn)化胡蘿卜懸浮細(xì)胞,經(jīng)含除草劑(Biokaphos)的培養(yǎng)基篩選及植物激素誘導(dǎo)分化,獲得除草劑抗性胡蘿卜幼苗。結(jié)果為轉(zhuǎn)化后8周,自胡蘿卜細(xì)胞中分化出除草劑抗性胡蘿卜幼苗。提取新分化幼苗總DNA,特異性引物PCR擴(kuò)增后可見860bp擴(kuò)增帶;Southern Bkot證明有HBsAg基因整合,胡蘿卜蛋白萃取物的Western Bkot及ELISA檢測證實有HBsAg蛋白表達(dá)。利用基因槍轉(zhuǎn)化使質(zhì)粒pBPC91adr中HBsAg基因在胡蘿卜幼苗內(nèi)整合并表達(dá),提示以植物生產(chǎn)疫苗具有可行性。
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