中藥玄參中哈巴俄苷和肉桂酸的高效液相色譜法測(cè)定
作者：蔡少青 謝麗華 王建華 劉洪宇 王璇 徐秉玖
單位：蔡少青 謝麗華 王建華 劉洪宇 王璇 徐秉玖(北京醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)研究室 北京 100083)
關(guān)鍵詞：玄參；哈巴俄苷；肉桂酸；高效液相色譜法
藥物分析雜志000320 摘要 目的：建立中藥玄參中哈巴俄苷和肉桂酸的高效液相含量測(cè)定方法，提出特征性有效成分哈巴俄苷的含量限度建議。方法：Ultrasphere 5 μm ODS 分析柱(250 mm ×4.6 mm)，流動(dòng)相為乙腈和1%醋酸水溶液，線性梯度洗脫(20∶80→50∶50)(20 min)，流速為1 mL.min-1，室溫，檢測(cè)波長為178 nm。結(jié)果：哈巴俄苷與肉桂酸回收率分別為97.13%和99.38%，RSD分別為0.80%和0.51%，全國20份商品飲片和8份不同產(chǎn)地完整藥材中哈巴俄苷含量為0.041%～0.068%。結(jié)論：本文方法快速、簡便、準(zhǔn)確，可用于玄參質(zhì)量控制。建議玄參中哈巴俄苷含量應(yīng)不低于0.05%。
, 百拇醫(yī)藥
HPLC Determination of arpagoside and Cinnamic Acid
in Radix Scrophulariae
Cai shaoqing，Xie Lihua，Wang Jianhua，Liu Hongyu，Wang Xuan，Xu Bingjiu
(Department of Pharmacognosy,School of Pharmaceutical Sciences,Beijing Medical University,Beijing,100083)
Abstract Objectives：To establish an accurate method for the determination of harpagoside and cinnamic acid in Radix Scrophulariae(Xuan-shen)and provide a proposition for the lowest content of the characteristic and active constituent (harpagoside).Methods:Gradient HPLC method was setup.The experimental conditions were as follows:Ultrasphere 5 μm ODS column(250 mm×4.6 mm),mobile phase:acetonitrile-water(ontaining 1.0% acetic acid)(20∶80→50∶50)(20 min),flow-rate 1 mL.min-1,room temperature,detection wavelength 278 nm.Results:The recoveries and RSD were 97.13%，0.8% for harpagoside and 99.38%,0.51% for cinnamic acid.28 samples of Xuan-shen(Radix Scro-phulariae)from different districts of China were quantitatively analysed and the contents of harpagoside and cinnamic acid in Xuan-shen were 0.041～0.244% and 0.012～0.068% respectively.Conclusion:The method was simple and accurate,and can be used for the quality control of Radix Scrophulariae.We propose that the content of harpagoside in the roots of Radix Scrophalariae must be no less than 0.05%.
, 百拇醫(yī)藥
Key words Radix crophalariae,Xuan-shen,harpagoside,cinnamic acid,HPLC
玄參為常用中藥，具有涼血滋陰、瀉火解毒之功效，用于熱病傷陰、津傷便秘、目赤、咽痛等癥[1]。中國藥典規(guī)定玄參為玄參科植物浙玄參Scrophularia ningpoensis Hemsl.的干燥根，但未見收載玄參的質(zhì)量控制方法。已知哈巴俄苷(harpagoside)為玄參中含量較高的特征性成分，文獻(xiàn)報(bào)道其具有抗慢性炎癥[2]、降壓[3]、鎮(zhèn)痛[4]、解痙[5]、抗乙肝病毒[6]以及免疫促進(jìn)作用[7]。我們藥理研究又發(fā)現(xiàn)其與滋陰功效密切相關(guān)的作用。故可以認(rèn)為哈巴俄苷是玄參的特征性有效成分。因此，為建立玄參的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，本文以哈巴俄苷及具有輕瀉作用的肉桂酸(cinnamic acid)[8]為指標(biāo)成分，研究建立玄參高效液相含量測(cè)定方法，并對(duì)全國20份玄參商品飲片和8份不同產(chǎn)地玄參完整藥材進(jìn)行測(cè)定，以制定含量限度。
, 百拇醫(yī)藥
1 儀器和試藥
儀器：高效液相色譜儀為美國Beckman公司產(chǎn)品，126泵，167可變紫外檢測(cè)器，System Gold操作軟件。
試劑：乙腈為色譜純(美國Fisher公司)；水為雙蒸水并經(jīng)0.45 μm水系濾膜過濾；醋酸為分析純，經(jīng)0.45 μm有機(jī)系濾膜過濾。
對(duì)照品：哈巴俄苷與肉桂酸均為自行提取精制，并經(jīng)UV、IR、FAB-MS、1HNMR、13CNMR鑒定結(jié)構(gòu)，高效液相法測(cè)定純度均大于98%。
藥材：20份玄參商品飲片(見表1)1997年7月～1998年8月購自全國15個(gè)省、市、自治區(qū)，經(jīng)薄層色譜法鑒別，與玄參對(duì)照藥材薄層色譜圖一致。8份玄參完整藥材采自主產(chǎn)地浙江的4個(gè)縣(磐安、仙居、縉云和東陽)、山東臨沂、河南鎮(zhèn)坪以及河北安國，采收后由藥農(nóng)或作者按傳統(tǒng)方法[1]加工而成，經(jīng)蔡少青教授鑒定來源為Scrophularia ningpoensis Hemsl.。
, 百拇醫(yī)藥
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件 色譜柱：Ultrasphere 5 μm ODS(250 mm×4.6 mm)(Beckman 公司)。流動(dòng)相：乙腈和1%醋酸水溶液線性梯度洗脫(20∶80→50∶50)(20 min)。流速：1 mL.min-1。檢測(cè)波長：278 nm。理論塔板數(shù)按哈巴俄苷峰計(jì)算不低于10 000。在本文條件下，對(duì)照品哈巴俄苷與肉桂酸的保留時(shí)間見圖1。
圖1 對(duì)照品哈巴俄苷與肉桂酸HPLC色譜圖
1.哈巴俄苷(13.56 min) 2.肉桂酸(17.14 min)
2.2 線性關(guān)系的考察 精密稱取哈巴俄苷和肉桂酸對(duì)照品，分別置100 mL量瓶中，以甲醇-水(30∶70)調(diào)制成104.2 μg.mL-1哈巴俄苷儲(chǔ)備液與199.2 μmL-1肉桂酸儲(chǔ)備液 ，再以甲醇-水(30∶70)稀釋調(diào)配成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)樣20 μL，測(cè)定峰面積的積分值，以峰面積為橫坐標(biāo)，溶液濃度(μg.mL-1為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，得到哈巴俄苷和肉桂酸回歸方程分別為：
, 百拇醫(yī)藥
Y=0.859 3X-0.610 6 r=0.999 9
Y=0.258 8X-0.209 6 r=0.999 8
哈巴俄苷在1.25～104.2 μg.mL-1、肉桂酸在0.80～49.8 μg.mL-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。
2.3 對(duì)照品穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取哈巴俄苷與肉桂酸對(duì)照品的甲醇-水(30∶70)混合溶液，于配制后的0，2，4，8，17，26，96 h測(cè)定，結(jié)果表明在4 d內(nèi)穩(wěn)定。
2.4 提取條件的選擇 精密稱取玄參(主根)粉末(全部通過2號(hào)篩)10份，每份1.0 g，其中5份分別用水、甲醇-水(30∶70)、甲醇-水(50∶50)、甲醇-水(70∶30)、甲醇各50 mL超聲提取30 min；其余5份分別加上述溶劑各50 mL后，于100 ℃加熱回流提取30 min。10份樣品均在放冷后補(bǔ)充損失的溶劑至原重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液以微孔濾膜過濾，濾液作為供試品溶液。進(jìn)樣20 μL測(cè)定哈巴俄苷與肉桂酸的峰面積，發(fā)現(xiàn)甲醇-水(30∶70)提取率最高，回流提取略優(yōu)于超聲提取。由于超聲提取操作簡便易行，故提取方法確定為甲醇-水(30∶70)超聲提取30 min。
, 百拇醫(yī)藥
2.5 精密度試驗(yàn) 取同一份玄參供試品溶液20 μL重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積積分值，哈巴俄苷與肉桂酸的RSD分別為0.49%和0.47%。
2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批玄參藥材5份，平行進(jìn)行提取測(cè)定，求得哈巴俄苷與肉桂酸含量的RSD均為1.8%。
2.7 回收率測(cè)定 準(zhǔn)確稱取已測(cè)知含量的玄參樣品(完整藥材)6份，各0.5 g，分別加入對(duì)照品溶液10 mL(含哈巴俄苷1.510 mg，肉桂酸0.400 mg)，再分別加入甲醇-水(30∶70)40 mL。依法測(cè)定，測(cè)得哈巴俄苷與肉桂酸回收率分別為97.13%和99.38%，RSD分別為0.80%和0.51%(n=6)。
2.8 樣品測(cè)定 精密稱取玄參藥材粉末(全部通過2號(hào)篩)0.5 g，于具塞三角瓶中精密加入甲醇-水(30∶70)50 mL，稱重，浸泡1 h后超聲提取30 min，放冷，補(bǔ)足失重，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，進(jìn)樣20 μL，測(cè)得峰面積，代入回歸方程求得供試品溶液濃度，玄參高效液相色譜圖見圖2。同時(shí)按中國藥典一部附錄Ⅸ H項(xiàng)下水分測(cè)定法(烘干法)進(jìn)行水分測(cè)定。結(jié)果按藥材干燥品計(jì)算含量(表1、表2)。樣品測(cè)定時(shí)間為1999年2月～3月。由表1、表2可知，玄參飲片中哈巴俄苷及肉桂酸含量(%)分別為0.055～0.244和0.012～0.053。玄參完整藥材中哈巴俄苷及肉桂酸含量(%)分別為0.041～0.226，和0.023～0.068。
, 百拇醫(yī)藥
表1 不同地區(qū)的玄參商品飲片 實(shí)驗(yàn)編號(hào)
購入地
哈巴俄苷
肉桂酸
1
北京同仁堂藥店
0.115
0.031
2
北京花園路中西藥店
0.137
0.034
3
, 百拇醫(yī)藥
河北安國藥材市場(chǎng)
0.105
0.047
4
河南鄧州市中醫(yī)藥公司
0.100
0.041
5
浙江磐安市中藥材公司
0.207
0.042
6
浙江諸暨藥材公司
, 百拇醫(yī)藥
0.072
0.013
7
福建福州西門藥材公司
0.155
0.035
8
福建省中醫(yī)研究院
0.112
0.039
9
江蘇徐州市五洲大藥房
0.115
, http://www.www.srpcoatings.com
0.053
10
江蘇揚(yáng)中縣江州醫(yī)藥公司
0.067
0.018
11
新疆烏魯木齊凝德堂藥店
0.174
0.031
12
內(nèi)蒙古包頭鋼鐵稀土公司
0.070
, 百拇醫(yī)藥 0.025
13
遼寧大連市同仁堂門診部
0.127
0.038
14
山東萊蕪市醫(yī)藥公司
0.079
0.029
15
山西省藥材公司
0.244
0.030
, http://www.www.srpcoatings.com
16
湖北宜昌醫(yī)藥公司
0.143
0.053
17
四川樂山市人民醫(yī)院
0.087
0.029
18
四川南充市醫(yī)藥公司
0.055
0.012
19
, 百拇醫(yī)藥
云南昆明市藥材公司
0.079
0.019
20
貴州貴陽市同濟(jì)堂藥店
0.121
0.041
圖2 玄參(主根)HPLC色譜圖
1.哈巴俄苷(13.51 min) 2.肉桂酸(17.25 min)
表2 不同產(chǎn)地玄參完整藥材
, 百拇醫(yī)藥
含量測(cè)定結(jié)果(%，n=3) 實(shí)驗(yàn)編號(hào)
產(chǎn)地
采集時(shí)間
哈巴俄苷
肉桂酸
21
浙江磐安
1998年10月末
0.110
0.035
22
浙江仙居
1998年10月25日
, http://www.www.srpcoatings.com
0.163
0.031
23
浙江縉云
1998年11月初
0.218
0.049
24
浙江東陽1號(hào)
1998年10月末
0.041
0.026
25
, 百拇醫(yī)藥
浙江東陽2號(hào)
1998年10月末
0.048
0.046
26
河南鎮(zhèn)坪
1998年10月末
0.088
0.050
27
山東臨沂
1998年11月初
0.175
, http://www.www.srpcoatings.com
0.025
28
河北安國
1998年10月30日
0.226
0.068
3 討論
3.1 林哲輝[9]等曾報(bào)道玄參中哈巴俄苷等化合物的高效液相含量測(cè)定法，采用44 min線性梯度洗脫，用30%丙酮為提取溶劑，操作復(fù)雜。本文對(duì)該法進(jìn)行改進(jìn)后，使哈巴俄苷和肉桂酸保留時(shí)間縮短至18 min以內(nèi)，并取玄參粉末甲醇-水(30∶70)超聲提取30 min的續(xù)濾液直接進(jìn)樣分析，操作簡便，回收率和重現(xiàn)性良好。
3.2 玄參藥材樣品的哈巴俄苷及肉桂酸含量測(cè)定結(jié)果表明，完整藥材與商品飲片在含量方面無明顯區(qū)別；哈巴俄苷含量分別以河北安國采集品(0.226%)和山西省藥材公司商品飲片(0.244%)最高；肉桂酸含量分別以河北安國采集品(0.068%)和湖北宜昌及江蘇徐州商品飲片(0.053%)最高。但是浙江磐安和河北安國采集品與當(dāng)?shù)厮徤唐凤嬈泄投碥蘸坎町愝^大，可能因商品來源復(fù)雜，產(chǎn)地生長環(huán)境及加工條件的不同所致。
, 百拇醫(yī)藥
3.3 從28份玄參飲片和完整藥材中哈巴俄苷百分含量分布圖(圖3)可見24、25號(hào)浙江東陽樣品含量最低(0.05%以下)，按照樣品含量分布情況，我們建議玄參藥材中哈巴俄苷這一特征性有效成分的含量應(yīng)不低于0.05%。
圖3 20從玄參飲片和8份完整藥材
中哈巴俄苷百分含量分布圖
致謝: 在藥材樣品的收集與采集過程中得到當(dāng)?shù)赜嘘P(guān)人員熱心的幫助。
本文系國家九五攻關(guān)課題中藥質(zhì)量3標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范化研究玄參子專題的一部分
參考文獻(xiàn)
1，中國藥典.1995.一部：95
, 百拇醫(yī)藥
2，國家醫(yī)藥管理局中草藥情報(bào)中心站.植物藥有效成分手冊(cè).北京：人民衛(wèi)生出版社，1986.546
3，Circosta C,Occhiuto F,Ragusa S,et al. A drug used in traditional medicine:Harpagophytum procumbens DC.Ⅱ.Cardiovascular activity.J Ethnopharmacol,1984,11:259
4，Suh Nan-Joo,Shim Chang-Koo,Lee Min Hwa,et al.Pharmacokinetic study of an iridoid glucoside:Aucubin.Pharm Res,1991,8(8):1059
5，Occhiuto F,Circosta C,Ragusa S,et al.A drug used in traditional medicine:Harpagophytum procumbens DC.Ⅳ.Effects on some isolated muscle preparations.J Ethnopharmacol,1985,13:201
, 百拇醫(yī)藥
6，CA,1994,120:P208577x
7，Garg H S,Bhandari S P S,Tripathi S C,et al.Antihepatotoxic and immunostimulant Properties of iridoid glycosides of scrophularia koezii.Phytother Res,1994，8：224
8，國家醫(yī)藥管理局中草藥情報(bào)中心站.植物藥有效成分手冊(cè),北京：人民衛(wèi)生生出版社，1986.102
9，林哲輝，顧祐瑞，黃韻笙等.玄參藥材中高極性成分之分離及高效液相層析定量研究.藥物食品分析雜志.1996，4(2)：131
(本文于1999年11月29日收到), http://www.www.srpcoatings.com
單位：蔡少青 謝麗華 王建華 劉洪宇 王璇 徐秉玖(北京醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)研究室 北京 100083)
關(guān)鍵詞：玄參；哈巴俄苷；肉桂酸；高效液相色譜法
藥物分析雜志000320 摘要 目的：建立中藥玄參中哈巴俄苷和肉桂酸的高效液相含量測(cè)定方法，提出特征性有效成分哈巴俄苷的含量限度建議。方法：Ultrasphere 5 μm ODS 分析柱(250 mm ×4.6 mm)，流動(dòng)相為乙腈和1%醋酸水溶液，線性梯度洗脫(20∶80→50∶50)(20 min)，流速為1 mL.min-1，室溫，檢測(cè)波長為178 nm。結(jié)果：哈巴俄苷與肉桂酸回收率分別為97.13%和99.38%，RSD分別為0.80%和0.51%，全國20份商品飲片和8份不同產(chǎn)地完整藥材中哈巴俄苷含量為0.041%～0.068%。結(jié)論：本文方法快速、簡便、準(zhǔn)確，可用于玄參質(zhì)量控制。建議玄參中哈巴俄苷含量應(yīng)不低于0.05%。
, 百拇醫(yī)藥
HPLC Determination of arpagoside and Cinnamic Acid
in Radix Scrophulariae
Cai shaoqing，Xie Lihua，Wang Jianhua，Liu Hongyu，Wang Xuan，Xu Bingjiu
(Department of Pharmacognosy,School of Pharmaceutical Sciences,Beijing Medical University,Beijing,100083)
Abstract Objectives：To establish an accurate method for the determination of harpagoside and cinnamic acid in Radix Scrophulariae(Xuan-shen)and provide a proposition for the lowest content of the characteristic and active constituent (harpagoside).Methods:Gradient HPLC method was setup.The experimental conditions were as follows:Ultrasphere 5 μm ODS column(250 mm×4.6 mm),mobile phase:acetonitrile-water(ontaining 1.0% acetic acid)(20∶80→50∶50)(20 min),flow-rate 1 mL.min-1,room temperature,detection wavelength 278 nm.Results:The recoveries and RSD were 97.13%，0.8% for harpagoside and 99.38%,0.51% for cinnamic acid.28 samples of Xuan-shen(Radix Scro-phulariae)from different districts of China were quantitatively analysed and the contents of harpagoside and cinnamic acid in Xuan-shen were 0.041～0.244% and 0.012～0.068% respectively.Conclusion:The method was simple and accurate,and can be used for the quality control of Radix Scrophulariae.We propose that the content of harpagoside in the roots of Radix Scrophalariae must be no less than 0.05%.
, 百拇醫(yī)藥
Key words Radix crophalariae,Xuan-shen,harpagoside,cinnamic acid,HPLC
玄參為常用中藥，具有涼血滋陰、瀉火解毒之功效，用于熱病傷陰、津傷便秘、目赤、咽痛等癥[1]。中國藥典規(guī)定玄參為玄參科植物浙玄參Scrophularia ningpoensis Hemsl.的干燥根，但未見收載玄參的質(zhì)量控制方法。已知哈巴俄苷(harpagoside)為玄參中含量較高的特征性成分，文獻(xiàn)報(bào)道其具有抗慢性炎癥[2]、降壓[3]、鎮(zhèn)痛[4]、解痙[5]、抗乙肝病毒[6]以及免疫促進(jìn)作用[7]。我們藥理研究又發(fā)現(xiàn)其與滋陰功效密切相關(guān)的作用。故可以認(rèn)為哈巴俄苷是玄參的特征性有效成分。因此，為建立玄參的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，本文以哈巴俄苷及具有輕瀉作用的肉桂酸(cinnamic acid)[8]為指標(biāo)成分，研究建立玄參高效液相含量測(cè)定方法，并對(duì)全國20份玄參商品飲片和8份不同產(chǎn)地玄參完整藥材進(jìn)行測(cè)定，以制定含量限度。
, 百拇醫(yī)藥
1 儀器和試藥
儀器：高效液相色譜儀為美國Beckman公司產(chǎn)品，126泵，167可變紫外檢測(cè)器，System Gold操作軟件。
試劑：乙腈為色譜純(美國Fisher公司)；水為雙蒸水并經(jīng)0.45 μm水系濾膜過濾；醋酸為分析純，經(jīng)0.45 μm有機(jī)系濾膜過濾。
對(duì)照品：哈巴俄苷與肉桂酸均為自行提取精制，并經(jīng)UV、IR、FAB-MS、1HNMR、13CNMR鑒定結(jié)構(gòu)，高效液相法測(cè)定純度均大于98%。
藥材：20份玄參商品飲片(見表1)1997年7月～1998年8月購自全國15個(gè)省、市、自治區(qū)，經(jīng)薄層色譜法鑒別，與玄參對(duì)照藥材薄層色譜圖一致。8份玄參完整藥材采自主產(chǎn)地浙江的4個(gè)縣(磐安、仙居、縉云和東陽)、山東臨沂、河南鎮(zhèn)坪以及河北安國，采收后由藥農(nóng)或作者按傳統(tǒng)方法[1]加工而成，經(jīng)蔡少青教授鑒定來源為Scrophularia ningpoensis Hemsl.。
, 百拇醫(yī)藥
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件 色譜柱：Ultrasphere 5 μm ODS(250 mm×4.6 mm)(Beckman 公司)。流動(dòng)相：乙腈和1%醋酸水溶液線性梯度洗脫(20∶80→50∶50)(20 min)。流速：1 mL.min-1。檢測(cè)波長：278 nm。理論塔板數(shù)按哈巴俄苷峰計(jì)算不低于10 000。在本文條件下，對(duì)照品哈巴俄苷與肉桂酸的保留時(shí)間見圖1。
圖1 對(duì)照品哈巴俄苷與肉桂酸HPLC色譜圖
1.哈巴俄苷(13.56 min) 2.肉桂酸(17.14 min)
2.2 線性關(guān)系的考察 精密稱取哈巴俄苷和肉桂酸對(duì)照品，分別置100 mL量瓶中，以甲醇-水(30∶70)調(diào)制成104.2 μg.mL-1哈巴俄苷儲(chǔ)備液與199.2 μmL-1肉桂酸儲(chǔ)備液 ，再以甲醇-水(30∶70)稀釋調(diào)配成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)樣20 μL，測(cè)定峰面積的積分值，以峰面積為橫坐標(biāo)，溶液濃度(μg.mL-1為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，得到哈巴俄苷和肉桂酸回歸方程分別為：
, 百拇醫(yī)藥
Y=0.859 3X-0.610 6 r=0.999 9
Y=0.258 8X-0.209 6 r=0.999 8
哈巴俄苷在1.25～104.2 μg.mL-1、肉桂酸在0.80～49.8 μg.mL-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。
2.3 對(duì)照品穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取哈巴俄苷與肉桂酸對(duì)照品的甲醇-水(30∶70)混合溶液，于配制后的0，2，4，8，17，26，96 h測(cè)定，結(jié)果表明在4 d內(nèi)穩(wěn)定。
2.4 提取條件的選擇 精密稱取玄參(主根)粉末(全部通過2號(hào)篩)10份，每份1.0 g，其中5份分別用水、甲醇-水(30∶70)、甲醇-水(50∶50)、甲醇-水(70∶30)、甲醇各50 mL超聲提取30 min；其余5份分別加上述溶劑各50 mL后，于100 ℃加熱回流提取30 min。10份樣品均在放冷后補(bǔ)充損失的溶劑至原重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液以微孔濾膜過濾，濾液作為供試品溶液。進(jìn)樣20 μL測(cè)定哈巴俄苷與肉桂酸的峰面積，發(fā)現(xiàn)甲醇-水(30∶70)提取率最高，回流提取略優(yōu)于超聲提取。由于超聲提取操作簡便易行，故提取方法確定為甲醇-水(30∶70)超聲提取30 min。
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2.5 精密度試驗(yàn) 取同一份玄參供試品溶液20 μL重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積積分值，哈巴俄苷與肉桂酸的RSD分別為0.49%和0.47%。
2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批玄參藥材5份，平行進(jìn)行提取測(cè)定，求得哈巴俄苷與肉桂酸含量的RSD均為1.8%。
2.7 回收率測(cè)定 準(zhǔn)確稱取已測(cè)知含量的玄參樣品(完整藥材)6份，各0.5 g，分別加入對(duì)照品溶液10 mL(含哈巴俄苷1.510 mg，肉桂酸0.400 mg)，再分別加入甲醇-水(30∶70)40 mL。依法測(cè)定，測(cè)得哈巴俄苷與肉桂酸回收率分別為97.13%和99.38%，RSD分別為0.80%和0.51%(n=6)。
2.8 樣品測(cè)定 精密稱取玄參藥材粉末(全部通過2號(hào)篩)0.5 g，于具塞三角瓶中精密加入甲醇-水(30∶70)50 mL，稱重，浸泡1 h后超聲提取30 min，放冷，補(bǔ)足失重，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，進(jìn)樣20 μL，測(cè)得峰面積，代入回歸方程求得供試品溶液濃度，玄參高效液相色譜圖見圖2。同時(shí)按中國藥典一部附錄Ⅸ H項(xiàng)下水分測(cè)定法(烘干法)進(jìn)行水分測(cè)定。結(jié)果按藥材干燥品計(jì)算含量(表1、表2)。樣品測(cè)定時(shí)間為1999年2月～3月。由表1、表2可知，玄參飲片中哈巴俄苷及肉桂酸含量(%)分別為0.055～0.244和0.012～0.053。玄參完整藥材中哈巴俄苷及肉桂酸含量(%)分別為0.041～0.226，和0.023～0.068。
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表1 不同地區(qū)的玄參商品飲片 實(shí)驗(yàn)編號(hào)
購入地
哈巴俄苷
肉桂酸
1
北京同仁堂藥店
0.115
0.031
2
北京花園路中西藥店
0.137
0.034
3
, 百拇醫(yī)藥
河北安國藥材市場(chǎng)
0.105
0.047
4
河南鄧州市中醫(yī)藥公司
0.100
0.041
5
浙江磐安市中藥材公司
0.207
0.042
6
浙江諸暨藥材公司
, 百拇醫(yī)藥
0.072
0.013
7
福建福州西門藥材公司
0.155
0.035
8
福建省中醫(yī)研究院
0.112
0.039
9
江蘇徐州市五洲大藥房
0.115
, http://www.www.srpcoatings.com
0.053
10
江蘇揚(yáng)中縣江州醫(yī)藥公司
0.067
0.018
11
新疆烏魯木齊凝德堂藥店
0.174
0.031
12
內(nèi)蒙古包頭鋼鐵稀土公司
0.070
, 百拇醫(yī)藥 0.025
13
遼寧大連市同仁堂門診部
0.127
0.038
14
山東萊蕪市醫(yī)藥公司
0.079
0.029
15
山西省藥材公司
0.244
0.030
, http://www.www.srpcoatings.com
16
湖北宜昌醫(yī)藥公司
0.143
0.053
17
四川樂山市人民醫(yī)院
0.087
0.029
18
四川南充市醫(yī)藥公司
0.055
0.012
19
, 百拇醫(yī)藥
云南昆明市藥材公司
0.079
0.019
20
貴州貴陽市同濟(jì)堂藥店
0.121
0.041
圖2 玄參(主根)HPLC色譜圖
1.哈巴俄苷(13.51 min) 2.肉桂酸(17.25 min)
表2 不同產(chǎn)地玄參完整藥材
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含量測(cè)定結(jié)果(%，n=3) 實(shí)驗(yàn)編號(hào)
產(chǎn)地
采集時(shí)間
哈巴俄苷
肉桂酸
21
浙江磐安
1998年10月末
0.110
0.035
22
浙江仙居
1998年10月25日
, http://www.www.srpcoatings.com
0.163
0.031
23
浙江縉云
1998年11月初
0.218
0.049
24
浙江東陽1號(hào)
1998年10月末
0.041
0.026
25
, 百拇醫(yī)藥
浙江東陽2號(hào)
1998年10月末
0.048
0.046
26
河南鎮(zhèn)坪
1998年10月末
0.088
0.050
27
山東臨沂
1998年11月初
0.175
, http://www.www.srpcoatings.com
0.025
28
河北安國
1998年10月30日
0.226
0.068
3 討論
3.1 林哲輝[9]等曾報(bào)道玄參中哈巴俄苷等化合物的高效液相含量測(cè)定法，采用44 min線性梯度洗脫，用30%丙酮為提取溶劑，操作復(fù)雜。本文對(duì)該法進(jìn)行改進(jìn)后，使哈巴俄苷和肉桂酸保留時(shí)間縮短至18 min以內(nèi)，并取玄參粉末甲醇-水(30∶70)超聲提取30 min的續(xù)濾液直接進(jìn)樣分析，操作簡便，回收率和重現(xiàn)性良好。
3.2 玄參藥材樣品的哈巴俄苷及肉桂酸含量測(cè)定結(jié)果表明，完整藥材與商品飲片在含量方面無明顯區(qū)別；哈巴俄苷含量分別以河北安國采集品(0.226%)和山西省藥材公司商品飲片(0.244%)最高；肉桂酸含量分別以河北安國采集品(0.068%)和湖北宜昌及江蘇徐州商品飲片(0.053%)最高。但是浙江磐安和河北安國采集品與當(dāng)?shù)厮徤唐凤嬈泄投碥蘸坎町愝^大，可能因商品來源復(fù)雜，產(chǎn)地生長環(huán)境及加工條件的不同所致。
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3.3 從28份玄參飲片和完整藥材中哈巴俄苷百分含量分布圖(圖3)可見24、25號(hào)浙江東陽樣品含量最低(0.05%以下)，按照樣品含量分布情況，我們建議玄參藥材中哈巴俄苷這一特征性有效成分的含量應(yīng)不低于0.05%。
圖3 20從玄參飲片和8份完整藥材
中哈巴俄苷百分含量分布圖
致謝: 在藥材樣品的收集與采集過程中得到當(dāng)?shù)赜嘘P(guān)人員熱心的幫助。
本文系國家九五攻關(guān)課題中藥質(zhì)量3標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范化研究玄參子專題的一部分
參考文獻(xiàn)
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2，國家醫(yī)藥管理局中草藥情報(bào)中心站.植物藥有效成分手冊(cè).北京：人民衛(wèi)生出版社，1986.546
3，Circosta C,Occhiuto F,Ragusa S,et al. A drug used in traditional medicine:Harpagophytum procumbens DC.Ⅱ.Cardiovascular activity.J Ethnopharmacol,1984,11:259
4，Suh Nan-Joo,Shim Chang-Koo,Lee Min Hwa,et al.Pharmacokinetic study of an iridoid glucoside:Aucubin.Pharm Res,1991,8(8):1059
5，Occhiuto F,Circosta C,Ragusa S,et al.A drug used in traditional medicine:Harpagophytum procumbens DC.Ⅳ.Effects on some isolated muscle preparations.J Ethnopharmacol,1985,13:201
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7，Garg H S,Bhandari S P S,Tripathi S C,et al.Antihepatotoxic and immunostimulant Properties of iridoid glycosides of scrophularia koezii.Phytother Res,1994，8：224
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9，林哲輝，顧祐瑞，黃韻笙等.玄參藥材中高極性成分之分離及高效液相層析定量研究.藥物食品分析雜志.1996，4(2)：131
(本文于1999年11月29日收到), http://www.www.srpcoatings.com