高效液相色譜法測定巰嘌呤片含量
作者：趙永成
單位：趙永成(云南省昭通地區(qū)藥品檢驗所 昭通 657000)
關鍵詞：
藥物分析雜志000326 巰嘌呤片為常用的抗腫瘤藥物制劑，主要用于治療急性白血病，收載于美國、英國和中國藥典中，其含量測定方法均采用紫外分光光度法[1～3]，未見有高效液相色譜法的報道，本文介紹用高效液相色譜法測定巰嘌呤片的含量。
1 儀器與試藥
高效液相色譜儀：日本島津LC-10Avp液相色譜儀，SPD-10Avp紫外檢測器，Class-VP數(shù)據(jù)處理機，CTO-10Avp柱溫箱。
試藥：巰嘌呤、綠原酸對照品均由中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇、磷酸二氫鉀、磷酸均為分析純；甲酸為色譜純；巰嘌呤片由上海華聯(lián)制藥有限公司提供。
, 百拇醫(yī)藥
2 色譜條件
色譜柱：Shim-Pack CLC-ODS(6.0 mm×150 mm，5 μm)；流動相：甲醇-0.01 mol.L-1磷酸二氫鉀(用磷酸調整pH=3.9)(25∶75)；內標：綠原酸；紫外檢測波長328 nm；流速1 mL.min-1；柱溫40 ℃；進樣量10 μL。
3 溶液的制備
3.1 對照品溶液 精密稱取巰嘌呤對照品12.5 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇20 mL于50 ℃水浴上加熱溶解，放冷后，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。
3.2 內標溶液 精密稱取綠原酸對照品29.5 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。
, 百拇醫(yī)藥 4 線性范圍和校正因子的測定
精密量取對照品溶液0.25，0.5，1.0，2.0，3.0 mL分別置于10 mL量瓶中，各準確加入內標溶液1.0 mL，用含2.5%甲酸的甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，進樣10 μL，記錄峰面積，以對照品與內標物峰面積比值對進樣濃度作線性回歸，得回歸方程(n=5)為：
Y=2.074 5Z+0.005 144 r=0.999 9
結果表明，巰嘌呤濃度在6.3～75.6 μg.mL-1范圍內有良好的線性關系。經(jīng)測定，校正因子為0.406 9(n=6),RSD=0.17%。
5 樣品的測定
取本品10片，精密稱定研細，精密稱取適量(約相當于巰嘌呤50 mg)置100 mL量瓶中，加甲醇60 mL，于50 ℃水浴中加熱，并超聲5 min使巰嘌呤溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1.0 mL，置10 mL量瓶中，準確加入內標溶液1.0 mL，用含2.5%甲酸的甲醇溶液稀釋至刻度，得樣品溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，進樣10 μL，記錄色譜圖，見圖1。
, 百拇醫(yī)藥
圖1 對照品(A)、樣品與內標(B)色譜圖
1.巰嘌呤(4.0 min) 2.綠原酸(內標，5.3 min)
按內標法以峰面積計算含量，并與中國藥典的紫外分光光度法測定的結果作比較，結果基本一致，見表1。
6 加樣回收率的測定
取已知含量的片劑粉末適量(約1/10片)共3份，精密稱定，置25 mL量瓶中，各準確加入對照品5.04，7.56，10.08 mg，加甲醇15 mL，照“樣品測定”項下操作，每份測定2次，結果回收率在99.95～101.1之間，RSD小于0.82%。
表1 本法與紫外分光光度法測定結果比較
(標示量%，n=3) 批 號
, http://www.www.srpcoatings.com
本 法
紫外分光光度法
1
97.78 (0.42)
97.80
2
98.82 (0.35)
98.91
3
97.66 (0.48)
97.72
注：括號內為RSD值(%)7 穩(wěn)定性實驗
, 百拇醫(yī)藥
取樣品溶液分別于當時及24和48 h后進樣，結果巰嘌呤與內標的峰面積比值基本一致。
8 討論
8.1 由于巰嘌呤吸收強烈(E1%1 cm=1 165),，故選擇的檢測波長(328 nm)并不是巰嘌呤的最大吸收波長(325 nm)，而是綠原酸的吸收波長，以提高內標物的響應靈敏度和測定結果的準確性。
8.2 為改善內標物綠原酸的峰形和減少拖尾，經(jīng)多次試驗以加入含2.5%甲酸的甲醇溶液后得到比較滿意的效果，分離度由原來的2.7達到4.3，塔板數(shù)由原來的1 307增加到4 600，甲酸的加入增加了綠原酸的穩(wěn)定性。
參考文獻
1，中國藥典.1995.二部：997
2，USP.Ⅹ Ⅹ Ⅲ.960
3，BP.1993.Ⅱ：1001
(本文于1999年5月10日收到), http://www.www.srpcoatings.com
單位：趙永成(云南省昭通地區(qū)藥品檢驗所 昭通 657000)
關鍵詞：
藥物分析雜志000326 巰嘌呤片為常用的抗腫瘤藥物制劑，主要用于治療急性白血病，收載于美國、英國和中國藥典中，其含量測定方法均采用紫外分光光度法[1～3]，未見有高效液相色譜法的報道，本文介紹用高效液相色譜法測定巰嘌呤片的含量。
1 儀器與試藥
高效液相色譜儀：日本島津LC-10Avp液相色譜儀，SPD-10Avp紫外檢測器，Class-VP數(shù)據(jù)處理機，CTO-10Avp柱溫箱。
試藥：巰嘌呤、綠原酸對照品均由中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇、磷酸二氫鉀、磷酸均為分析純；甲酸為色譜純；巰嘌呤片由上海華聯(lián)制藥有限公司提供。
, 百拇醫(yī)藥
2 色譜條件
色譜柱：Shim-Pack CLC-ODS(6.0 mm×150 mm，5 μm)；流動相：甲醇-0.01 mol.L-1磷酸二氫鉀(用磷酸調整pH=3.9)(25∶75)；內標：綠原酸；紫外檢測波長328 nm；流速1 mL.min-1；柱溫40 ℃；進樣量10 μL。
3 溶液的制備
3.1 對照品溶液 精密稱取巰嘌呤對照品12.5 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇20 mL于50 ℃水浴上加熱溶解，放冷后，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。
3.2 內標溶液 精密稱取綠原酸對照品29.5 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。
, 百拇醫(yī)藥 4 線性范圍和校正因子的測定
精密量取對照品溶液0.25，0.5，1.0，2.0，3.0 mL分別置于10 mL量瓶中，各準確加入內標溶液1.0 mL，用含2.5%甲酸的甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，進樣10 μL，記錄峰面積，以對照品與內標物峰面積比值對進樣濃度作線性回歸，得回歸方程(n=5)為：
Y=2.074 5Z+0.005 144 r=0.999 9
結果表明，巰嘌呤濃度在6.3～75.6 μg.mL-1范圍內有良好的線性關系。經(jīng)測定，校正因子為0.406 9(n=6),RSD=0.17%。
5 樣品的測定
取本品10片，精密稱定研細，精密稱取適量(約相當于巰嘌呤50 mg)置100 mL量瓶中，加甲醇60 mL，于50 ℃水浴中加熱，并超聲5 min使巰嘌呤溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1.0 mL，置10 mL量瓶中，準確加入內標溶液1.0 mL，用含2.5%甲酸的甲醇溶液稀釋至刻度，得樣品溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，進樣10 μL，記錄色譜圖，見圖1。
, 百拇醫(yī)藥
圖1 對照品(A)、樣品與內標(B)色譜圖
1.巰嘌呤(4.0 min) 2.綠原酸(內標，5.3 min)
按內標法以峰面積計算含量，并與中國藥典的紫外分光光度法測定的結果作比較，結果基本一致，見表1。
6 加樣回收率的測定
取已知含量的片劑粉末適量(約1/10片)共3份，精密稱定，置25 mL量瓶中，各準確加入對照品5.04，7.56，10.08 mg，加甲醇15 mL，照“樣品測定”項下操作，每份測定2次，結果回收率在99.95～101.1之間，RSD小于0.82%。
表1 本法與紫外分光光度法測定結果比較
(標示量%，n=3) 批 號
, http://www.www.srpcoatings.com
本 法
紫外分光光度法
1
97.78 (0.42)
97.80
2
98.82 (0.35)
98.91
3
97.66 (0.48)
97.72
注：括號內為RSD值(%)7 穩(wěn)定性實驗
, 百拇醫(yī)藥
取樣品溶液分別于當時及24和48 h后進樣，結果巰嘌呤與內標的峰面積比值基本一致。
8 討論
8.1 由于巰嘌呤吸收強烈(E1%1 cm=1 165),，故選擇的檢測波長(328 nm)并不是巰嘌呤的最大吸收波長(325 nm)，而是綠原酸的吸收波長，以提高內標物的響應靈敏度和測定結果的準確性。
8.2 為改善內標物綠原酸的峰形和減少拖尾，經(jīng)多次試驗以加入含2.5%甲酸的甲醇溶液后得到比較滿意的效果，分離度由原來的2.7達到4.3，塔板數(shù)由原來的1 307增加到4 600，甲酸的加入增加了綠原酸的穩(wěn)定性。
參考文獻
1，中國藥典.1995.二部：997
2，USP.Ⅹ Ⅹ Ⅲ.960
3，BP.1993.Ⅱ：1001
(本文于1999年5月10日收到), http://www.www.srpcoatings.com