14C-尿素呼氣試驗與PCR法對胃幽門螺桿菌感染診斷價值的比較
作者：白天旭 張昌秋 丁九立 陳秀萍 王旭光
單位：黑龍江省醫(yī)院放免中心，黑龍江 哈爾濱 150036
關鍵詞：
標記免疫分析與臨床000325 目前診斷胃幽門螺桿菌(HP)的方法很多，其中14C-尿素呼氣試驗(14C-UBT)及聚合酶鏈反應(PCR)對胃HP感染的診斷價值得到公認，報道較多，我們對部份患者同時進行上二項檢查，并對結果進行了比較，報告如下：
資料和方法
1 病人選擇
69例疑有HP感染的慢性胃炎，胃、十二指腸潰瘍的門診病人均未經(jīng)治療。其中男44例，女25例，年齡17-74歲，平均年齡32歲。
, 百拇醫(yī)藥
2 取材
所有病人均胃鏡下取胃竇及胃體粘膜4塊，間距3cm以上，分成兩組：其中每個病人任取一塊胃組織組成單點取材組，余下的組成多點取材組。
3 方法
(1) 14C-UBT試劑盒及液閃儀，購自深圳海得威公司。69例病人空腹狀態(tài)下收集呼氣于內含CO2收集劑的閃爍試劑瓶內，作為空白對照，然后服用內含0.75μCi的14C-尿素并緩慢翻身，25分鐘后，如前呼氣。在氧氣瓶內加入閃爍劑后置液閃儀測定放射性衰變計數(shù)。判斷標準為測定值減去對照值如大于100cpm為陽性。
(2)HP-PCR檢測試劑盒購自上海復華公司，嚴格按說明書進行操作。儀器為美國MD-100型擴增儀。
(3)取每塊胃粘膜標本置入加有1mL無菌PBS液1.5mL離心管內洗脫，5000r/min離心20分鐘，棄上清，加裂解液30mL,混勻，100℃水浴30分鐘離心后取上清。擴增溫度與時間為：94℃ 1分鐘后，94℃ 30秒，55℃ 40秒，72℃ 50秒，共35個循環(huán)，取擴增產物10μL進行2%瓊脂糖凝膠電泳，在紫外燈下觀察，460bp處出現(xiàn)特異性條帶者為陽性。多點取材陽性的判斷標準：如果有一塊胃組織經(jīng)PCR檢測為陽性，則病人為HP感染。
, 百拇醫(yī)藥
結 果
檢測結果見表：
表 69例病人用不同方法檢測HP的結果 檢測方法
陽性例數(shù)
陰性例數(shù)
陽性率(%)
14C-UBT
45
24
65.2
HP-PRC(單點取材)
44
, 百拇醫(yī)藥
25
63.8
HP-PRC(多點取材)
47
22
68.1
14C-UBT法與HP-PCR法(單點取材組)均為陽性者42例，均為陰性者22例。14C-UBT陽性而HP-PCR(單點取材組)陰性者3例，14C-UBT陰性而HP-PCR(單點取材組)陽性者2例，14C-UBT法與HP-PCR法(單點取材組)無顯著性差異(χ2＝0.33，P>0.05)。14C-UBT法與HP-PCR法(多點取材組)均為陽性者43例，均為陰性者20例；其中14C-UBT陽性而HP-PCR陰性(多點取材組)2例；14C-UBT陰性而HP-PCR(多點取材組)陽性4例。14C-UBT與HP-PCR(多點取材組)比較(χ2＝0.25，P>0.05)，兩者無顯著性差異。根據(jù)新的診斷標準準(1997)[1]，對69例患者14C-UBT法與HP-PCR法(單點取材組)二者對HP感染診斷的敏感性都為100%，特異性為88.9%(14C-UBT)、92.6%(HP-PCR單點取材組)。14C-UBT與HP-RCR法(多點取材組)對HP感染的診斷敏感性為100%,特異性92.3%(14C-UBT)、84.6%(HP-PCR多點取材組)。討 論
, 百拇醫(yī)藥
HP 是慢性活動胃炎的病原菌，消化性潰瘍及胃淋巴癌的重要致病因子，與胃癌密切相關[1]，已被WHO列入第一級致癌物質[2]。診斷HP感染的方法很多，其中HP-PCR和14C-UBT分別代表侵入性和非侵入性的較為準確的檢查方法。14C-UBT自1987年開展以來應用越來越廣泛，原理前提是HP是身體內唯一產生尿素酶的細菌，口服14C標記的尿素，若胃內存在一定數(shù)量的HP，其產生的尿素酶分解14C標記的尿素生成CO2和氨，14CO2可以從呼氣中排出，通過液閃儀測其數(shù)值，以判斷是否有HP感染。PCR法是近年發(fā)展起來的應用DNA半保留復制原理的高分子檢測技術，是非常敏感的檢測手段。HP-PCR法可以檢測到0.1pg的HP-DNA，相當于100個細菌[3]。但從本實驗看，與14C-UBT相比無論是單點取材和多點取材，兩者的檢測結果無顯著性差異,表明14C-UBT方法比較可靠。HP-PCR檢測受到取材的一定影響，因為HP在胃內呈集落形式存在，分布不均勻。取材的過程又增加了污染的機會，增加病人痛苦，不適合兒童檢查。我們認為HP-PCR的假陰性主要來自于取材。PCR對技術人員，試劑及設備要求較高，過程比較繁瑣，極易造成污染。PCR具有強大的擴增能力及高度敏感性，極微量的污染可導致假陽性的結果。一次PCR檢查需要約6小時完成，而14C-UBT，非創(chuàng)傷，病人無痛苦，操作簡單，對技術人員要求低，一次檢查只需30分鐘完成，也適合于兒童。呼氣試驗最大的不足是有放射性，雖然14C的半衰期較長，但體內有效半衰期較短。采用85pBq劑量的試劑對人體造成的輻射約為胸透的1/7，鋇餐的1/1000，其危險性只相當于一個人一生中吸半支煙[4]，大可不必“談核色變”，因此14C-UBT還是安全的，與HP-PCR比較在臨床應用上更有推廣價值。
, 百拇醫(yī)藥
參考文獻：
[1] 關于幽門螺桿菌若干問題的意見[J].中華內科雜志，1997，36(7)：438.
[2] 張建中，陳晶晶.幽門螺桿菌對胎兒胃粘膜上皮細胞的粘附作用研究[J].中華微生物和免疫學雜志，1996，16(1)：15-18.
[3] Clayton C L. Sensitive detection of helicobacter pylori by using polymerase chain reaction[J]. J Clin Microbiol,1992,30:192.
[4] Feldman R A, Evans S J W. Accuracy of diagnostic methods used for epidemiological studies of helicobacter pylori[J]. Pharmacol Ther,1995,9(suppl.2):21-29.
收稿日期： 1999-09-15, 百拇醫(yī)藥
單位：黑龍江省醫(yī)院放免中心，黑龍江 哈爾濱 150036
關鍵詞：
標記免疫分析與臨床000325 目前診斷胃幽門螺桿菌(HP)的方法很多，其中14C-尿素呼氣試驗(14C-UBT)及聚合酶鏈反應(PCR)對胃HP感染的診斷價值得到公認，報道較多，我們對部份患者同時進行上二項檢查，并對結果進行了比較，報告如下：
資料和方法
1 病人選擇
69例疑有HP感染的慢性胃炎，胃、十二指腸潰瘍的門診病人均未經(jīng)治療。其中男44例，女25例，年齡17-74歲，平均年齡32歲。
, 百拇醫(yī)藥
2 取材
所有病人均胃鏡下取胃竇及胃體粘膜4塊，間距3cm以上，分成兩組：其中每個病人任取一塊胃組織組成單點取材組，余下的組成多點取材組。
3 方法
(1) 14C-UBT試劑盒及液閃儀，購自深圳海得威公司。69例病人空腹狀態(tài)下收集呼氣于內含CO2收集劑的閃爍試劑瓶內，作為空白對照，然后服用內含0.75μCi的14C-尿素并緩慢翻身，25分鐘后，如前呼氣。在氧氣瓶內加入閃爍劑后置液閃儀測定放射性衰變計數(shù)。判斷標準為測定值減去對照值如大于100cpm為陽性。
(2)HP-PCR檢測試劑盒購自上海復華公司，嚴格按說明書進行操作。儀器為美國MD-100型擴增儀。
(3)取每塊胃粘膜標本置入加有1mL無菌PBS液1.5mL離心管內洗脫，5000r/min離心20分鐘，棄上清，加裂解液30mL,混勻，100℃水浴30分鐘離心后取上清。擴增溫度與時間為：94℃ 1分鐘后，94℃ 30秒，55℃ 40秒，72℃ 50秒，共35個循環(huán)，取擴增產物10μL進行2%瓊脂糖凝膠電泳，在紫外燈下觀察，460bp處出現(xiàn)特異性條帶者為陽性。多點取材陽性的判斷標準：如果有一塊胃組織經(jīng)PCR檢測為陽性，則病人為HP感染。
, 百拇醫(yī)藥
結 果
檢測結果見表：
表 69例病人用不同方法檢測HP的結果 檢測方法
陽性例數(shù)
陰性例數(shù)
陽性率(%)
14C-UBT
45
24
65.2
HP-PRC(單點取材)
44
, 百拇醫(yī)藥
25
63.8
HP-PRC(多點取材)
47
22
68.1
14C-UBT法與HP-PCR法(單點取材組)均為陽性者42例，均為陰性者22例。14C-UBT陽性而HP-PCR(單點取材組)陰性者3例，14C-UBT陰性而HP-PCR(單點取材組)陽性者2例，14C-UBT法與HP-PCR法(單點取材組)無顯著性差異(χ2＝0.33，P>0.05)。14C-UBT法與HP-PCR法(多點取材組)均為陽性者43例，均為陰性者20例；其中14C-UBT陽性而HP-PCR陰性(多點取材組)2例；14C-UBT陰性而HP-PCR(多點取材組)陽性4例。14C-UBT與HP-PCR(多點取材組)比較(χ2＝0.25，P>0.05)，兩者無顯著性差異。根據(jù)新的診斷標準準(1997)[1]，對69例患者14C-UBT法與HP-PCR法(單點取材組)二者對HP感染診斷的敏感性都為100%，特異性為88.9%(14C-UBT)、92.6%(HP-PCR單點取材組)。14C-UBT與HP-RCR法(多點取材組)對HP感染的診斷敏感性為100%,特異性92.3%(14C-UBT)、84.6%(HP-PCR多點取材組)。討 論
, 百拇醫(yī)藥
HP 是慢性活動胃炎的病原菌，消化性潰瘍及胃淋巴癌的重要致病因子，與胃癌密切相關[1]，已被WHO列入第一級致癌物質[2]。診斷HP感染的方法很多，其中HP-PCR和14C-UBT分別代表侵入性和非侵入性的較為準確的檢查方法。14C-UBT自1987年開展以來應用越來越廣泛，原理前提是HP是身體內唯一產生尿素酶的細菌，口服14C標記的尿素，若胃內存在一定數(shù)量的HP，其產生的尿素酶分解14C標記的尿素生成CO2和氨，14CO2可以從呼氣中排出，通過液閃儀測其數(shù)值，以判斷是否有HP感染。PCR法是近年發(fā)展起來的應用DNA半保留復制原理的高分子檢測技術，是非常敏感的檢測手段。HP-PCR法可以檢測到0.1pg的HP-DNA，相當于100個細菌[3]。但從本實驗看，與14C-UBT相比無論是單點取材和多點取材，兩者的檢測結果無顯著性差異,表明14C-UBT方法比較可靠。HP-PCR檢測受到取材的一定影響，因為HP在胃內呈集落形式存在，分布不均勻。取材的過程又增加了污染的機會，增加病人痛苦，不適合兒童檢查。我們認為HP-PCR的假陰性主要來自于取材。PCR對技術人員，試劑及設備要求較高，過程比較繁瑣，極易造成污染。PCR具有強大的擴增能力及高度敏感性，極微量的污染可導致假陽性的結果。一次PCR檢查需要約6小時完成，而14C-UBT，非創(chuàng)傷，病人無痛苦，操作簡單，對技術人員要求低，一次檢查只需30分鐘完成，也適合于兒童。呼氣試驗最大的不足是有放射性，雖然14C的半衰期較長，但體內有效半衰期較短。采用85pBq劑量的試劑對人體造成的輻射約為胸透的1/7，鋇餐的1/1000，其危險性只相當于一個人一生中吸半支煙[4]，大可不必“談核色變”，因此14C-UBT還是安全的，與HP-PCR比較在臨床應用上更有推廣價值。
, 百拇醫(yī)藥
參考文獻：
[1] 關于幽門螺桿菌若干問題的意見[J].中華內科雜志，1997，36(7)：438.
[2] 張建中，陳晶晶.幽門螺桿菌對胎兒胃粘膜上皮細胞的粘附作用研究[J].中華微生物和免疫學雜志，1996，16(1)：15-18.
[3] Clayton C L. Sensitive detection of helicobacter pylori by using polymerase chain reaction[J]. J Clin Microbiol,1992,30:192.
[4] Feldman R A, Evans S J W. Accuracy of diagnostic methods used for epidemiological studies of helicobacter pylori[J]. Pharmacol Ther,1995,9(suppl.2):21-29.
收稿日期： 1999-09-15, 百拇醫(yī)藥