銀杏葉提取物對(duì)豚鼠離體小腸平滑肌活動(dòng)的影響
作者：錢大青 張根葆 劉德蔚
單位：(皖南醫(yī)學(xué)院，蕪湖 241001)
關(guān)鍵詞：銀杏葉提取物；平滑��；乙酰膽堿
咸寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)00205 摘 要 目的：觀察銀杏葉提取物(EGb)對(duì)離體豚鼠回腸運(yùn)動(dòng)功能的影響。方法：制作豚鼠回腸離體腸段標(biāo)本，記錄用藥前后腸段的平滑肌縱肌收縮強(qiáng)度和靜息張力，換算為變化百為率進(jìn)行比較，t檢驗(yàn)處理。結(jié)果：較低濃度(0.3～10mg/L)的EGb可明顯抑制小腸平滑肌的自發(fā)收縮活動(dòng)，并顯著減弱乙酰膽堿和組胺對(duì)小腸平滑肌活動(dòng)的增強(qiáng)效應(yīng)。而在高濃度時(shí)(50mg/L)則增加平滑肌靜息張力(P<0.05)，且不受M膽堿能受體阻斷劑阿托品的影響。結(jié)論：EGb對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)具有較為復(fù)雜的調(diào)整作用。
中圖分類號(hào) R965 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A
文章編號(hào) 1008-0635(2000)02-0091-03
, http://www.www.srpcoatings.com
The Effects of Ginkgo Biloba Extracts on Activity of
Isolated Small Intestine Muscle from Guinea Pig
QIAN Daqing ZHANG Genbao LIU Dewei
(Wannan Medical College,Wuhu 241001)
ABSTRACT Objective To investigate the effects of Ginkgo biloba extracts (EGb) on intestinal myoeletric activity of guinea pigs in vitro.Methods The samples of isolated ileum segment from guinea pigs were prepared,then the contraction intensity and static tonisity of gut longitudinal muscles were measured pre-and postadministration of EGb.The data were converted into varience percentage to contrast and treated by T-text.Results It was found that EGb (0.3～10mg/L)significantly inhibited contraction of small intestine and decreased exterior Ach and His-induced constriction (P<0.01).However,the tension of spontaneus constriction of small intestine was significantly increased after administration of EGb at higher concentration(50mg/L) (P<0.05),and this effect cannot be inhibited by atropine (adrenaline-receptor inhibitor) and propranolol(β-receptor inhibitor).Conclusion EGb can complexly modulate intestinal movement.
, 百拇醫(yī)藥
KEY WORDS Ginkgo biloba extracts;Smooth muscle;Acetylcholine
銀杏科植物銀杏樹(Ginkgo biloba L)是我國(guó)特產(chǎn)植物，從其干燥葉中提取的活性物質(zhì)黃酮類和苦內(nèi)酯具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)[1，2]，已有研究表明銀杏葉提取物(Extracts of Ginkgo biloba,EGb)可降低血脂、改善心肌缺血[3]、促進(jìn)腦循環(huán)[4]、對(duì)抗腎上腺素所致的血管收縮、擬腎上腺素以及緩解支氣管平滑肌痙攣等效應(yīng)。但銀杏葉提取物對(duì)胃腸道平滑肌功能活動(dòng)的影響尚未見報(bào)道。本文觀察了不同濃度的EGb對(duì)離體豚鼠回腸平滑肌活動(dòng)的影響，以期探討其對(duì)消化道的調(diào)整作用及其可能的作用機(jī)制。
1 材料和方法
健康豚鼠30只，250g～350g，本院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，雌雄兼用。實(shí)驗(yàn)前禁食12小時(shí)，自由飲水，擊昏后在距回盲部10cm處，取長(zhǎng)約2cm的回腸，在盛有Kreb′s液的平皿器中洗凈后，置于離體器官實(shí)驗(yàn)儀(CW-3型，張家港實(shí)驗(yàn)器材廠)的平滑肌浴槽中(容量50ml)恒溫(37±0.5℃)，持續(xù)通氣(95%O2和5%CO2)。平滑肌標(biāo)本一端固定，另一端連于張力換能器并引至計(jì)算機(jī)接口，標(biāo)本張力負(fù)荷1g，平滑肌收縮活動(dòng)信號(hào)經(jīng)實(shí)時(shí)處理和儲(chǔ)存后，由三通道生物信號(hào)處理系統(tǒng)(MS302，廣東藥學(xué)院)記錄縱肌收縮活動(dòng)，再由打印機(jī)打印輸出。
, http://www.www.srpcoatings.com
銀杏葉提取物(含黃酮24%，銀杏內(nèi)酯6%，美國(guó)U.C Medicine公司)；乙酰膽堿(Ach,北京化學(xué)試劑三廠)；阿托品(Atropin,上海醫(yī)藥公司)；磷酸組胺(Histaminiphosphas,His,中國(guó)藥品生物制品檢定所)。所用藥物由移液管給藥，容量0.1～0.2ml，文中藥物濃度為折換成的終末濃度；藥物作用后，以37℃Kreb′s液換洗至正常。
以給藥前5min的值為效應(yīng)值；分別記錄用藥前后小腸平滑肌縱肌收縮強(qiáng)度和靜息張力，并換算成變化百分率〔變化百分率=(效應(yīng)值—對(duì)照值)/對(duì)照值×100%〕；所測(cè)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(
±s)表示，并作配對(duì)t檢驗(yàn)判斷差異的顯著性。
2 結(jié) 果
2.1不同濃度EGb對(duì)小腸平滑肌活動(dòng)的影響
, 百拇醫(yī)藥
離體小腸平滑肌在實(shí)驗(yàn)條件下，自發(fā)活動(dòng)規(guī)則，收縮強(qiáng)度為1.35±0.42mV，靜息張力1.14±0.36g。對(duì)照組在營(yíng)養(yǎng)液中加入Kerb′s液0.1～0.2ml，平滑肌活動(dòng)無可測(cè)性變化。以微量移液管加入EGb(0.3mg/L～10mg/L)于平滑肌營(yíng)養(yǎng)液中，平滑肌收縮活動(dòng)明顯減弱并有劑量依賴性關(guān)系(P<0.05，表1)。另在6個(gè)平滑肌腸段標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)EGb較高濃度時(shí)(50mg/L)平滑肌張力顯著增加(P<0.05)，且不受阿托品(10μmol/L)的影響。
2.2 EGb對(duì)外源性Ach和His所致平滑肌攣縮的抑制作用
在平滑面浴槽中加入外源性Ach(1μmol/L)和His(2.3μmol/L)，均可引起平滑肌的強(qiáng)烈收縮，收縮強(qiáng)度和張力較用藥前顯著增加。若同時(shí)加入10mg/L劑量的EGb，則可明顯抑制Ach和His引起的這一增強(qiáng)過程，其抑制率分別為51.41±23.32%和43.64±17.88%(P<0.01，表2)。
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表1 EGb對(duì)小腸平滑肌自發(fā)活動(dòng)的影響(±s) 組 別
例數(shù)
(n)
縱肌收縮強(qiáng)度(mV)
平滑肌張力(g)
用藥前
用藥后
用藥前
用藥后
EGb 0.3mg/L
8
, http://www.www.srpcoatings.com
1.21±0.33
0.91±0.29*
1.12±0.21
1.20±0.35
EGb 1mg/L
8
1.34±0.41
0.78±0.43*
1.05±0.30
0.92±0.38
EGb 10mg/L
, 百拇醫(yī)藥
8
1.31±0.43
0.65±0.32**△
1.10±0.33
1.25±0.61
EGb 50mg/L
8
1.28±0.37
0.69±0.41**
1.13±0.38
2.09±0.77*
, 百拇醫(yī)藥
與同用藥前比較*P<0.05，**P<0.01，與0.3mg/L組比效△P<0.05表2 EGb對(duì)Ach和His所致平滑肌攣縮的抑制作用(±s) 組 別
例 數(shù)
平滑肌收縮強(qiáng)度
平滑肌張力
對(duì)照組
12
1.32±0.41
1.08±0.32
Ach
6
, 百拇醫(yī)藥
2.03±0.88**
1.51±0.63**
Ach+EGb
8
1.50±0.69
1.23±0.71
His
8
2.18±0.59**
1.34±0.36*
His+EGb
, 百拇醫(yī)藥
8
1.61±0.73
1.03±0.42
與對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01
2 討 論
銀杏葉味苦，性平，有活血平喘止痛的功效。近年來，對(duì)其提取物藥理生理作用的研究已引起廣泛關(guān)注。研究表明，EGb主要含有黃酮甙和銀杏苦內(nèi)酯。黃酮甙主要作用在于捕捉游離基，銀杏苦內(nèi)酯則是一種特異性的血小板活化因子受體阻斷劑[1]，能發(fā)揮穩(wěn)定細(xì)胞膜、改善血液流動(dòng)特性、調(diào)整神經(jīng)系統(tǒng)遞質(zhì)的關(guān)系、緩解平滑肌痙攣等作用[5]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示EGb在低濃度時(shí)(0.3mg/L～10mg/L)對(duì)離體豚鼠回腸平滑肌收縮具有明顯的劑量依賴性抑制作用，且不影響平滑肌的張力。對(duì)于Ach和His所介導(dǎo)的平滑肌強(qiáng)直性收縮，EGb(10mg/L)均能明顯拮抗。提示EGb具有在一定程度上調(diào)整小腸平滑肌活動(dòng)功能性紊亂的作用，可有效地維持小腸的正常運(yùn)動(dòng)功能；而在高濃度(50mg/L)時(shí)，EGb尚可增加小腸平滑肌張力，該效應(yīng)不能被M膽堿能受體阻斷劑阿托品所阻斷，表明不同濃度的EGb對(duì)平滑肌具有不同的影響，且該效應(yīng)并非影響平滑肌上的膽堿能受體，更可能是通過改變或調(diào)整平滑肌細(xì)胞的某些離子通道或代謝過程。
, 百拇醫(yī)藥
小腸運(yùn)動(dòng)功能的影響因素和調(diào)節(jié)機(jī)制是一種很復(fù)雜的過程，涉及到神經(jīng)、內(nèi)分泌和小腸平滑肌細(xì)胞內(nèi)外離子轉(zhuǎn)運(yùn)與環(huán)境因素等多個(gè)環(huán)節(jié)。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以推測(cè)EGb不僅在一定程度上可緩解腸道平滑肌的痙攣，也可調(diào)整由于胃腸道平滑肌內(nèi)興奮性和抑制性神經(jīng)遞質(zhì)比例失調(diào)所致平滑肌功能的紊亂。雖然高濃度EGb對(duì)平滑肌活動(dòng)加強(qiáng)的直接效應(yīng)是否是其毒性反應(yīng)，以及EGb影響Ach和His的確切機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究，但EGb對(duì)多種機(jī)體功能失調(diào)的治療作用似乎主要受其所含銀杏內(nèi)酯與機(jī)體內(nèi)活性物質(zhì)相互作用的影響[4，6]。
參考文獻(xiàn)
1，劉玲玲，于心若.銀杏藥用價(jià)值.中草藥，1994；25：219
2，Wedizinische K,Kantonsspital L.Ginkgo myth and reality.Schweiz Rundsch Med Prax,1995；84：1
, 百拇醫(yī)藥
3，Pietri S,Maurelli E,Drien K，et al.Cardioprotective and anti-oxidant effects of the terpenoid constituents of ginkgo biloba extract.Mol Cell Cardiol,1997；29：733
4，Stucker O,Pons C,Duverger JP,et al.Effects of ginkgo biloba extract on arteriolar spasm in a rat cremaster muscle preparation.Imt J Microcire Clin Exp,1996；16：98
5，李明山.銀杏葉活性成分及藥理作用研究近況.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1997；16(1)：64
6，李光儀，劉明登，李滿芳.銀杏苦內(nèi)酯的藥理和臨床研究進(jìn)展.中草藥，1995；26(2)：100
收稿2000-03-10
, http://www.www.srpcoatings.com
單位：(皖南醫(yī)學(xué)院，蕪湖 241001)
關(guān)鍵詞：銀杏葉提取物；平滑��；乙酰膽堿
咸寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)00205 摘 要 目的：觀察銀杏葉提取物(EGb)對(duì)離體豚鼠回腸運(yùn)動(dòng)功能的影響。方法：制作豚鼠回腸離體腸段標(biāo)本，記錄用藥前后腸段的平滑肌縱肌收縮強(qiáng)度和靜息張力，換算為變化百為率進(jìn)行比較，t檢驗(yàn)處理。結(jié)果：較低濃度(0.3～10mg/L)的EGb可明顯抑制小腸平滑肌的自發(fā)收縮活動(dòng)，并顯著減弱乙酰膽堿和組胺對(duì)小腸平滑肌活動(dòng)的增強(qiáng)效應(yīng)。而在高濃度時(shí)(50mg/L)則增加平滑肌靜息張力(P<0.05)，且不受M膽堿能受體阻斷劑阿托品的影響。結(jié)論：EGb對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)具有較為復(fù)雜的調(diào)整作用。
中圖分類號(hào) R965 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A
文章編號(hào) 1008-0635(2000)02-0091-03
, http://www.www.srpcoatings.com
The Effects of Ginkgo Biloba Extracts on Activity of
Isolated Small Intestine Muscle from Guinea Pig
QIAN Daqing ZHANG Genbao LIU Dewei
(Wannan Medical College,Wuhu 241001)
ABSTRACT Objective To investigate the effects of Ginkgo biloba extracts (EGb) on intestinal myoeletric activity of guinea pigs in vitro.Methods The samples of isolated ileum segment from guinea pigs were prepared,then the contraction intensity and static tonisity of gut longitudinal muscles were measured pre-and postadministration of EGb.The data were converted into varience percentage to contrast and treated by T-text.Results It was found that EGb (0.3～10mg/L)significantly inhibited contraction of small intestine and decreased exterior Ach and His-induced constriction (P<0.01).However,the tension of spontaneus constriction of small intestine was significantly increased after administration of EGb at higher concentration(50mg/L) (P<0.05),and this effect cannot be inhibited by atropine (adrenaline-receptor inhibitor) and propranolol(β-receptor inhibitor).Conclusion EGb can complexly modulate intestinal movement.
, 百拇醫(yī)藥
KEY WORDS Ginkgo biloba extracts;Smooth muscle;Acetylcholine
銀杏科植物銀杏樹(Ginkgo biloba L)是我國(guó)特產(chǎn)植物，從其干燥葉中提取的活性物質(zhì)黃酮類和苦內(nèi)酯具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)[1，2]，已有研究表明銀杏葉提取物(Extracts of Ginkgo biloba,EGb)可降低血脂、改善心肌缺血[3]、促進(jìn)腦循環(huán)[4]、對(duì)抗腎上腺素所致的血管收縮、擬腎上腺素以及緩解支氣管平滑肌痙攣等效應(yīng)。但銀杏葉提取物對(duì)胃腸道平滑肌功能活動(dòng)的影響尚未見報(bào)道。本文觀察了不同濃度的EGb對(duì)離體豚鼠回腸平滑肌活動(dòng)的影響，以期探討其對(duì)消化道的調(diào)整作用及其可能的作用機(jī)制。
1 材料和方法
健康豚鼠30只，250g～350g，本院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，雌雄兼用。實(shí)驗(yàn)前禁食12小時(shí)，自由飲水，擊昏后在距回盲部10cm處，取長(zhǎng)約2cm的回腸，在盛有Kreb′s液的平皿器中洗凈后，置于離體器官實(shí)驗(yàn)儀(CW-3型，張家港實(shí)驗(yàn)器材廠)的平滑肌浴槽中(容量50ml)恒溫(37±0.5℃)，持續(xù)通氣(95%O2和5%CO2)。平滑肌標(biāo)本一端固定，另一端連于張力換能器并引至計(jì)算機(jī)接口，標(biāo)本張力負(fù)荷1g，平滑肌收縮活動(dòng)信號(hào)經(jīng)實(shí)時(shí)處理和儲(chǔ)存后，由三通道生物信號(hào)處理系統(tǒng)(MS302，廣東藥學(xué)院)記錄縱肌收縮活動(dòng)，再由打印機(jī)打印輸出。
, http://www.www.srpcoatings.com
銀杏葉提取物(含黃酮24%，銀杏內(nèi)酯6%，美國(guó)U.C Medicine公司)；乙酰膽堿(Ach,北京化學(xué)試劑三廠)；阿托品(Atropin,上海醫(yī)藥公司)；磷酸組胺(Histaminiphosphas,His,中國(guó)藥品生物制品檢定所)。所用藥物由移液管給藥，容量0.1～0.2ml，文中藥物濃度為折換成的終末濃度；藥物作用后，以37℃Kreb′s液換洗至正常。
以給藥前5min的值為效應(yīng)值；分別記錄用藥前后小腸平滑肌縱肌收縮強(qiáng)度和靜息張力，并換算成變化百分率〔變化百分率=(效應(yīng)值—對(duì)照值)/對(duì)照值×100%〕；所測(cè)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(
±s)表示，并作配對(duì)t檢驗(yàn)判斷差異的顯著性。2 結(jié) 果
2.1不同濃度EGb對(duì)小腸平滑肌活動(dòng)的影響
, 百拇醫(yī)藥
離體小腸平滑肌在實(shí)驗(yàn)條件下，自發(fā)活動(dòng)規(guī)則，收縮強(qiáng)度為1.35±0.42mV，靜息張力1.14±0.36g。對(duì)照組在營(yíng)養(yǎng)液中加入Kerb′s液0.1～0.2ml，平滑肌活動(dòng)無可測(cè)性變化。以微量移液管加入EGb(0.3mg/L～10mg/L)于平滑肌營(yíng)養(yǎng)液中，平滑肌收縮活動(dòng)明顯減弱并有劑量依賴性關(guān)系(P<0.05，表1)。另在6個(gè)平滑肌腸段標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)EGb較高濃度時(shí)(50mg/L)平滑肌張力顯著增加(P<0.05)，且不受阿托品(10μmol/L)的影響。
2.2 EGb對(duì)外源性Ach和His所致平滑肌攣縮的抑制作用
在平滑面浴槽中加入外源性Ach(1μmol/L)和His(2.3μmol/L)，均可引起平滑肌的強(qiáng)烈收縮，收縮強(qiáng)度和張力較用藥前顯著增加。若同時(shí)加入10mg/L劑量的EGb，則可明顯抑制Ach和His引起的這一增強(qiáng)過程，其抑制率分別為51.41±23.32%和43.64±17.88%(P<0.01，表2)。
, http://www.www.srpcoatings.com
表1 EGb對(duì)小腸平滑肌自發(fā)活動(dòng)的影響(
±s) 組 別例數(shù)
(n)
縱肌收縮強(qiáng)度(mV)
平滑肌張力(g)
用藥前
用藥后
用藥前
用藥后
EGb 0.3mg/L
8
, http://www.www.srpcoatings.com
1.21±0.33
0.91±0.29*
1.12±0.21
1.20±0.35
EGb 1mg/L
8
1.34±0.41
0.78±0.43*
1.05±0.30
0.92±0.38
EGb 10mg/L
, 百拇醫(yī)藥
8
1.31±0.43
0.65±0.32**△
1.10±0.33
1.25±0.61
EGb 50mg/L
8
1.28±0.37
0.69±0.41**
1.13±0.38
2.09±0.77*
, 百拇醫(yī)藥
與同用藥前比較*P<0.05，**P<0.01，與0.3mg/L組比效△P<0.05表2 EGb對(duì)Ach和His所致平滑肌攣縮的抑制作用(
±s) 組 別例 數(shù)
平滑肌收縮強(qiáng)度
平滑肌張力
對(duì)照組
12
1.32±0.41
1.08±0.32
Ach
6
, 百拇醫(yī)藥
2.03±0.88**
1.51±0.63**
Ach+EGb
8
1.50±0.69
1.23±0.71
His
8
2.18±0.59**
1.34±0.36*
His+EGb
, 百拇醫(yī)藥
8
1.61±0.73
1.03±0.42
與對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01
2 討 論
銀杏葉味苦，性平，有活血平喘止痛的功效。近年來，對(duì)其提取物藥理生理作用的研究已引起廣泛關(guān)注。研究表明，EGb主要含有黃酮甙和銀杏苦內(nèi)酯。黃酮甙主要作用在于捕捉游離基，銀杏苦內(nèi)酯則是一種特異性的血小板活化因子受體阻斷劑[1]，能發(fā)揮穩(wěn)定細(xì)胞膜、改善血液流動(dòng)特性、調(diào)整神經(jīng)系統(tǒng)遞質(zhì)的關(guān)系、緩解平滑肌痙攣等作用[5]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示EGb在低濃度時(shí)(0.3mg/L～10mg/L)對(duì)離體豚鼠回腸平滑肌收縮具有明顯的劑量依賴性抑制作用，且不影響平滑肌的張力。對(duì)于Ach和His所介導(dǎo)的平滑肌強(qiáng)直性收縮，EGb(10mg/L)均能明顯拮抗。提示EGb具有在一定程度上調(diào)整小腸平滑肌活動(dòng)功能性紊亂的作用，可有效地維持小腸的正常運(yùn)動(dòng)功能；而在高濃度(50mg/L)時(shí)，EGb尚可增加小腸平滑肌張力，該效應(yīng)不能被M膽堿能受體阻斷劑阿托品所阻斷，表明不同濃度的EGb對(duì)平滑肌具有不同的影響，且該效應(yīng)并非影響平滑肌上的膽堿能受體，更可能是通過改變或調(diào)整平滑肌細(xì)胞的某些離子通道或代謝過程。
, 百拇醫(yī)藥
小腸運(yùn)動(dòng)功能的影響因素和調(diào)節(jié)機(jī)制是一種很復(fù)雜的過程，涉及到神經(jīng)、內(nèi)分泌和小腸平滑肌細(xì)胞內(nèi)外離子轉(zhuǎn)運(yùn)與環(huán)境因素等多個(gè)環(huán)節(jié)。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以推測(cè)EGb不僅在一定程度上可緩解腸道平滑肌的痙攣，也可調(diào)整由于胃腸道平滑肌內(nèi)興奮性和抑制性神經(jīng)遞質(zhì)比例失調(diào)所致平滑肌功能的紊亂。雖然高濃度EGb對(duì)平滑肌活動(dòng)加強(qiáng)的直接效應(yīng)是否是其毒性反應(yīng)，以及EGb影響Ach和His的確切機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究，但EGb對(duì)多種機(jī)體功能失調(diào)的治療作用似乎主要受其所含銀杏內(nèi)酯與機(jī)體內(nèi)活性物質(zhì)相互作用的影響[4，6]。
參考文獻(xiàn)
1，劉玲玲，于心若.銀杏藥用價(jià)值.中草藥，1994；25：219
2，Wedizinische K,Kantonsspital L.Ginkgo myth and reality.Schweiz Rundsch Med Prax,1995；84：1
, 百拇醫(yī)藥
3，Pietri S,Maurelli E,Drien K，et al.Cardioprotective and anti-oxidant effects of the terpenoid constituents of ginkgo biloba extract.Mol Cell Cardiol,1997；29：733
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收稿2000-03-10
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