川芎嗪對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用
作者:雷平 李應(yīng)續(xù) 雷亞寧 王秋桂 胡松林
單位:(咸寧醫(yī)學(xué)院神經(jīng)組化研究室,咸寧 437100)
關(guān)鍵詞:大鼠;缺血/再灌注;丙二醛;腺苷三磷酸類;川芎嗪
咸寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)000203 摘 要 目的:觀察大鼠海馬CA—1區(qū)缺血再灌注損傷后MDA值和ATPase活性的動(dòng)態(tài)變化及川芎嗪的保護(hù)作用。方法:Wistar大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈夾閉20min,造成不完全性腦缺血,松夾即為再灌注。大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)對(duì)照組(SOC)、缺血再灌注組(IR)和川芎嗪治療組(TMP)。結(jié)果:① IR組MDA值再灌注6h后恢復(fù)對(duì)照水平,川芎嗪能顯著降低異常增高的MDA值(P<0.01)。②IR組ATPase活性再灌注24h后恢復(fù)對(duì)照水平,川芎嗪能明顯改善酶活性(P<0.01),且能縮短酶活性恢復(fù)時(shí)程。結(jié)論:川芎嗪能減少大鼠脂質(zhì)過(guò)氧化,改善ATPase功能,減輕海馬結(jié)構(gòu)缺血再灌注損傷。
, 百拇醫(yī)藥
中圖分類號(hào) R965 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A
文章編號(hào) 1008-0635(2000)02-0084-04
Protective Effects of Tetramethylphrazim on Cerebral
Ischemia-Reperfusion Damages in Rats
LEI Ping LI Yingxu LEI Yaning et al
(Department of Neurobiology,Xianning Medical College,Xianning 437100)
ABSTRACT Objective To observe the dynamic changes of malondialehyde(MDA) content and ATPase activity in the hippocampus structure in rat suffering from ischemia-reperfusion damage,and to investigate the protective effects of tetramethylphrazim(TMP).Methods An cerebral ischemia model of Wistar rats was getten by clipping bilatral carotide,and reperfusion was performed when the clips were released.Rats were randomly divided into sham operated control group(SOC),ischemia-reperfusion group(IR) and TMP-treated group(TMP).Rusults ①M(fèi)DA content came back to the control level 6 hours after reperfusion in IR,and TMP can lower MDA content obviously(P<0.01);②ATPase activity came back to the control level 24 hours after reperfusion in IR.TMP can improve ATPase activity(P<0.01) and shorten the period of the activity coming back.Conclusion TMP can reduce lipid peroxidation,improve ATPase activity and decrease neuronal damage in the IR injury of hippocampal structure.
, 百拇醫(yī)藥
KEY WORDS Ischemia/Reperfusion;Rats;Malondialehyde;Adenosine triphosphatase;Tetramethylphrazim
缺血—再灌注損傷的急性期,缺血缺氧能引發(fā)一系列錯(cuò)綜復(fù)雜的損傷級(jí)聯(lián)反應(yīng),以自由基損害、胞內(nèi)鈣超載和興奮性毒性為中心環(huán)節(jié),導(dǎo)致了離子平衡失調(diào)和內(nèi)環(huán)境紊亂,而引起細(xì)胞死亡[1]。但有趣的是在輕度缺血再灌注損傷后數(shù)小時(shí)至24小時(shí)內(nèi),電解質(zhì)和一些代謝性物質(zhì)會(huì)恢復(fù)自穩(wěn)態(tài)(即處于正常值水平)[2]。本實(shí)驗(yàn)試圖觀察再灌注損傷中的重要物質(zhì)丙二醛和ATP酶活性的動(dòng)態(tài)變化及自穩(wěn)態(tài)恢復(fù)時(shí)間,以及川芎嗪的保護(hù)作用。
1 材料與方法
1.1動(dòng)物
成年健康Wistar大鼠88只,雌雄不拘,體重180~220g,由本校動(dòng)物室提供。
, 百拇醫(yī)藥
1.2 試劑
硫代巴比妥酸為上;瘜W(xué)試劑分裝廠產(chǎn)品;丙二醛(Malondiadehyde,MDA)純度97% ,德國(guó)產(chǎn);ATP為Sigma公司產(chǎn)品;哇巴因(Ovnbain)為E.Mork公司產(chǎn)品;標(biāo)準(zhǔn)蛋白為上海東風(fēng)試劑廠產(chǎn)品;鹽酸川芎嗪注射液,無(wú)錫市第七制藥廠生產(chǎn)。
1.3 實(shí)驗(yàn)方法
采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈夾閉法,造成簡(jiǎn)單的不完全大腦缺血模型,松夾即為再灌注。本實(shí)驗(yàn)采用10%水合氯醛(0.3g/kg)麻醉,切開頸部皮膚,分離暴露頸總動(dòng)脈,以動(dòng)脈夾夾閉20分鐘,造成缺血,再松開動(dòng)脈夾,造成再灌注。根據(jù)再灌注時(shí)程不同,在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)上處死動(dòng)物,取出雙側(cè)海馬結(jié)構(gòu),解剖顯微鏡下切取CA—1區(qū)。大鼠隨機(jī)分組為:①假手術(shù)對(duì)照組(SOC)8只,僅暴露雙側(cè)頸總動(dòng)脈20min而不夾閉,1h后處死動(dòng)物取材。②缺血—再灌注組(IR),共40只,分為再灌注1h、6h、12h、24h、48h,每小組8只,各組松夾10min后按1ml/100g腹腔注射生理鹽水,按時(shí)間點(diǎn)處死大鼠取材。③川芎嗪治療組(TMP),共40只,與各IR組相對(duì)應(yīng)。松夾10min后按20mg/100g給予川芎嗪(5%葡萄糖2ml稀釋)腹腔注射,按時(shí)間點(diǎn)取材。
, 百拇醫(yī)藥
1.4 觀察指標(biāo)
1.4.1 丙二醛(MDA)的測(cè)定
將切取的CA1區(qū)組織分析天平(上海天平儀器廠)稱重后,以1:10(W/V)比例加入生理鹽水,冰水浴中勻漿,勻漿置入試管,-20℃冰箱保存待測(cè)。具體方法參照Ohkawa[3]和Lowry[4]。
1.4.2 ATP酶(ATPase)的測(cè)定
4℃下在50倍體積的50mmol/L Tris鹽酸緩沖液(PH7.4)中勻漿,Bradford法測(cè)定蛋白含量[5],參照有關(guān)文獻(xiàn)方法測(cè)定ATPase活性[6,7],結(jié)果以μmol.pi/mg.pro.h表示。
, http://www.www.srpcoatings.com 1.5 數(shù)據(jù)處理
所有結(jié)果均以
±s表示,采用單因素方差分析處理,以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié) 果
2.1腦缺血再灌注損傷后海馬CA—1區(qū)MDA含量的變化見表1。
IR組再灌注1h后MDA值明顯升高(P<0.01),6h后恢復(fù)至對(duì)照組水平,以后不再出現(xiàn)明顯變化。TMP組與IR組比較,再灌注1h時(shí),能明顯降低MDA值(P<0.01),但仍明顯高于對(duì)照組水平(P<0.01),再灌注6h、12h、24h、48h各組MDA值與相應(yīng)IR組值和對(duì)照值比較差別無(wú)顯著性。
2.2 腦缺血再灌注損傷后海馬CA—1區(qū)Na+—K+—ATPase和Ca2+—ATPase活性的變化見表2和表3。
, http://www.www.srpcoatings.com
IR組再灌注1h、6h、12h的Na+—K+—ATPase和Ca2+—ATPase活性均明顯低于對(duì)照值(P<0.05),且隨再灌注時(shí)間延續(xù)而逐漸恢復(fù),至24h恢復(fù)接近對(duì)照組水平,以后無(wú)明顯變化。TMP組再灌注1h后與IR組比較,能明顯增強(qiáng)酶活性(P<0.01),但仍顯著低于對(duì)照組水平(P<0.01);再灌注6h,酶活性比相應(yīng)的IR組高(P<0.05),較對(duì)照組水平低(P<0.05);再灌注12h,酶活性比相應(yīng)IR組高(P<0.01),但已接近SOC組水平;再灌注24h、48h后與對(duì)應(yīng)IR組和SOC組無(wú)明顯差異。
表1 川芎嗪對(duì)海馬CA1區(qū)MDA的影響(
±s,n=8,mmol/ g.wet) 組 別
1h
, 百拇醫(yī)藥 6h
12h
24h
48h
SOC
82.61±12.98
IR
160.52±14.55*
80.11±13.99
80.44±13.01
79.16±12.25
80.30±13.41
, 百拇醫(yī)藥
TMP
108.14±11.42*△
76.52±12.19
77.34±13.27
76.72±11.93
76.87±12.11
與SOC組比較*P<0.01,與同時(shí)間點(diǎn)IR組比較△P<0.01表2 川芎嗪對(duì)海馬CA1區(qū)Na+—K+ATPase活性的影響(
±s,n=8,μmol.pi/mg.pro.h) 組 別
, 百拇醫(yī)藥
1h
6h
12h
24h
48h
SOC
0.528±0.015
IR
0.403±0.021*
0.458±0.033*
0.499±0.027*
0.534±0.021
, http://www.www.srpcoatings.com
0.529±0.029
TMP
0.459±0.029△*
0.497±0.031△*
0.537±0.018△
0.538±0.025
0.535±0.036
與SOC組比較*P<0.01,與同時(shí)間點(diǎn)IR組比較△P<0.01表3 川芎嗪對(duì)海馬CA1區(qū)Ca2+—ATPase的影響(
±s,n=8,μmol.pi/mg.pro.h) 組 別
, http://www.www.srpcoatings.com
1h
6h
12h
24h
48h
SOC
0.629±0.037
IR
0.418±0.059*
0.494±0.051*
0.583±0.034*
0.641±0.029
, 百拇醫(yī)藥
0.650±0.031
TMP
0.582±0.033△*
0.591±0.033△*
0.595±0.048
0.639±0.052
0.641±0.039
與SOC組比較*P<0.01,與同時(shí)點(diǎn)IR組比較△P<0.01
3 討 論
氧自由基對(duì)細(xì)胞的損傷作用主要是引起生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng),MDA作為氧自由基與生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的代謝產(chǎn)物,其含量的變化可間接地反映組織中氧自由基含量的變化和組織損傷的程度。
, 百拇醫(yī)藥
本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)腦缺血后大鼠海馬CA1區(qū)組織Na+—K+—ATPase、Ca2+—ATPase早期活性明顯降低。ATPase主要存在于神經(jīng)元膜上和線粒體內(nèi),通過(guò)水解ATP逆電化學(xué)梯度進(jìn)行離子轉(zhuǎn)運(yùn),是維持神經(jīng)元興奮傳導(dǎo),突觸體傳遞和離子內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的物質(zhì)基礎(chǔ)。腦缺血后海馬CA1區(qū)組織ATPase活性抑制可引起神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)的Na+、Ca2+聚積,K+流失,離子內(nèi)環(huán)境紊亂,從而導(dǎo)致神經(jīng)元損害[8,9]。近年來(lái),Ca2+在神經(jīng)元損害過(guò)程中的作用已日益受到重視,許多學(xué)者認(rèn)為細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載是缺血性神經(jīng)死亡的最后共同通路。細(xì)胞內(nèi)Ca2+聚積可激活磷脂酶A2,導(dǎo)致膜磷脂降解產(chǎn)生游離脂肪酸,繼而由花生四烯酸衍生為前列腺素和白三烯等活性物質(zhì)破壞細(xì)胞功能;Ca2+增高還可以使Ca2+—CaM復(fù)合物調(diào)節(jié)的蛋白激酶,腺苷酸環(huán)化酶等功能失調(diào),線粒體氧化磷酸化失偶聯(lián),能量生成減少,導(dǎo)致神經(jīng)元代謝紊亂[8,9]。用川芎嗪治療后,可以顯著改善ATPase的功能,從而減輕海馬結(jié)構(gòu)缺血再灌注損傷。
, 百拇醫(yī)藥
實(shí)驗(yàn)觀察到MDA值再灌注6h即恢復(fù)自穩(wěn)態(tài),以后不再顯著變化;ATPase活性再灌注24h恢復(fù)至對(duì)照水平,以后不再明顯變化,這些物質(zhì)為什么會(huì)出現(xiàn)自穩(wěn)態(tài)恢復(fù)現(xiàn)象,原因不甚明確,但有一點(diǎn)可以肯定,臨床上提到的治療缺血性腦損傷的“機(jī)會(huì)窗”與自穩(wěn)態(tài)恢復(fù)時(shí)程密切相關(guān)[10]。在缺血缺氧損傷時(shí),電解質(zhì)和一些代謝物質(zhì)濃度早期會(huì)異常紊亂,如果不用藥物干涉,讓其自然恢復(fù)穩(wěn)態(tài),在恢復(fù)過(guò)程中,可能已經(jīng)啟動(dòng)了繼發(fā)的損傷級(jí)聯(lián)反應(yīng), 興奮性毒性—梗死周圍去極化—炎癥—細(xì)胞凋亡[11]。即使紊亂的物質(zhì)恢復(fù)了穩(wěn)態(tài),損傷已不可避免地啟動(dòng)并發(fā)展下去。神經(jīng)保護(hù)藥物如果能夠縮短紊亂物質(zhì)恢復(fù)自穩(wěn)態(tài)的時(shí)程,減少引發(fā)損傷級(jí)聯(lián)反應(yīng)的機(jī)會(huì),將會(huì)起到良好的神經(jīng)保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)所用川芎嗪給藥時(shí)間為再灌注10min,完全處在各物質(zhì)恢復(fù)自穩(wěn)態(tài)之前,即處于治療的最佳“機(jī)會(huì)窗”,可以清除氧自由基,減少缺血再灌注損傷時(shí)的脂質(zhì)過(guò)氧化,增強(qiáng)ATPase活性,拮抗Ca2+超載,更重要的是它縮短了紊亂物質(zhì)恢復(fù)自穩(wěn)態(tài)的時(shí)程,有較好的腦保護(hù)效果。
收稿2000-02-12
, 百拇醫(yī)藥
單位:(咸寧醫(yī)學(xué)院神經(jīng)組化研究室,咸寧 437100)
關(guān)鍵詞:大鼠;缺血/再灌注;丙二醛;腺苷三磷酸類;川芎嗪
咸寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)000203 摘 要 目的:觀察大鼠海馬CA—1區(qū)缺血再灌注損傷后MDA值和ATPase活性的動(dòng)態(tài)變化及川芎嗪的保護(hù)作用。方法:Wistar大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈夾閉20min,造成不完全性腦缺血,松夾即為再灌注。大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)對(duì)照組(SOC)、缺血再灌注組(IR)和川芎嗪治療組(TMP)。結(jié)果:① IR組MDA值再灌注6h后恢復(fù)對(duì)照水平,川芎嗪能顯著降低異常增高的MDA值(P<0.01)。②IR組ATPase活性再灌注24h后恢復(fù)對(duì)照水平,川芎嗪能明顯改善酶活性(P<0.01),且能縮短酶活性恢復(fù)時(shí)程。結(jié)論:川芎嗪能減少大鼠脂質(zhì)過(guò)氧化,改善ATPase功能,減輕海馬結(jié)構(gòu)缺血再灌注損傷。
, 百拇醫(yī)藥
中圖分類號(hào) R965 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A
文章編號(hào) 1008-0635(2000)02-0084-04
Protective Effects of Tetramethylphrazim on Cerebral
Ischemia-Reperfusion Damages in Rats
LEI Ping LI Yingxu LEI Yaning et al
(Department of Neurobiology,Xianning Medical College,Xianning 437100)
ABSTRACT Objective To observe the dynamic changes of malondialehyde(MDA) content and ATPase activity in the hippocampus structure in rat suffering from ischemia-reperfusion damage,and to investigate the protective effects of tetramethylphrazim(TMP).Methods An cerebral ischemia model of Wistar rats was getten by clipping bilatral carotide,and reperfusion was performed when the clips were released.Rats were randomly divided into sham operated control group(SOC),ischemia-reperfusion group(IR) and TMP-treated group(TMP).Rusults ①M(fèi)DA content came back to the control level 6 hours after reperfusion in IR,and TMP can lower MDA content obviously(P<0.01);②ATPase activity came back to the control level 24 hours after reperfusion in IR.TMP can improve ATPase activity(P<0.01) and shorten the period of the activity coming back.Conclusion TMP can reduce lipid peroxidation,improve ATPase activity and decrease neuronal damage in the IR injury of hippocampal structure.
, 百拇醫(yī)藥
KEY WORDS Ischemia/Reperfusion;Rats;Malondialehyde;Adenosine triphosphatase;Tetramethylphrazim
缺血—再灌注損傷的急性期,缺血缺氧能引發(fā)一系列錯(cuò)綜復(fù)雜的損傷級(jí)聯(lián)反應(yīng),以自由基損害、胞內(nèi)鈣超載和興奮性毒性為中心環(huán)節(jié),導(dǎo)致了離子平衡失調(diào)和內(nèi)環(huán)境紊亂,而引起細(xì)胞死亡[1]。但有趣的是在輕度缺血再灌注損傷后數(shù)小時(shí)至24小時(shí)內(nèi),電解質(zhì)和一些代謝性物質(zhì)會(huì)恢復(fù)自穩(wěn)態(tài)(即處于正常值水平)[2]。本實(shí)驗(yàn)試圖觀察再灌注損傷中的重要物質(zhì)丙二醛和ATP酶活性的動(dòng)態(tài)變化及自穩(wěn)態(tài)恢復(fù)時(shí)間,以及川芎嗪的保護(hù)作用。
1 材料與方法
1.1動(dòng)物
成年健康Wistar大鼠88只,雌雄不拘,體重180~220g,由本校動(dòng)物室提供。
, 百拇醫(yī)藥
1.2 試劑
硫代巴比妥酸為上;瘜W(xué)試劑分裝廠產(chǎn)品;丙二醛(Malondiadehyde,MDA)純度97% ,德國(guó)產(chǎn);ATP為Sigma公司產(chǎn)品;哇巴因(Ovnbain)為E.Mork公司產(chǎn)品;標(biāo)準(zhǔn)蛋白為上海東風(fēng)試劑廠產(chǎn)品;鹽酸川芎嗪注射液,無(wú)錫市第七制藥廠生產(chǎn)。
1.3 實(shí)驗(yàn)方法
采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈夾閉法,造成簡(jiǎn)單的不完全大腦缺血模型,松夾即為再灌注。本實(shí)驗(yàn)采用10%水合氯醛(0.3g/kg)麻醉,切開頸部皮膚,分離暴露頸總動(dòng)脈,以動(dòng)脈夾夾閉20分鐘,造成缺血,再松開動(dòng)脈夾,造成再灌注。根據(jù)再灌注時(shí)程不同,在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)上處死動(dòng)物,取出雙側(cè)海馬結(jié)構(gòu),解剖顯微鏡下切取CA—1區(qū)。大鼠隨機(jī)分組為:①假手術(shù)對(duì)照組(SOC)8只,僅暴露雙側(cè)頸總動(dòng)脈20min而不夾閉,1h后處死動(dòng)物取材。②缺血—再灌注組(IR),共40只,分為再灌注1h、6h、12h、24h、48h,每小組8只,各組松夾10min后按1ml/100g腹腔注射生理鹽水,按時(shí)間點(diǎn)處死大鼠取材。③川芎嗪治療組(TMP),共40只,與各IR組相對(duì)應(yīng)。松夾10min后按20mg/100g給予川芎嗪(5%葡萄糖2ml稀釋)腹腔注射,按時(shí)間點(diǎn)取材。
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1.4 觀察指標(biāo)
1.4.1 丙二醛(MDA)的測(cè)定
將切取的CA1區(qū)組織分析天平(上海天平儀器廠)稱重后,以1:10(W/V)比例加入生理鹽水,冰水浴中勻漿,勻漿置入試管,-20℃冰箱保存待測(cè)。具體方法參照Ohkawa[3]和Lowry[4]。
1.4.2 ATP酶(ATPase)的測(cè)定
4℃下在50倍體積的50mmol/L Tris鹽酸緩沖液(PH7.4)中勻漿,Bradford法測(cè)定蛋白含量[5],參照有關(guān)文獻(xiàn)方法測(cè)定ATPase活性[6,7],結(jié)果以μmol.pi/mg.pro.h表示。
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所有結(jié)果均以
2 結(jié) 果
2.1腦缺血再灌注損傷后海馬CA—1區(qū)MDA含量的變化見表1。
IR組再灌注1h后MDA值明顯升高(P<0.01),6h后恢復(fù)至對(duì)照組水平,以后不再出現(xiàn)明顯變化。TMP組與IR組比較,再灌注1h時(shí),能明顯降低MDA值(P<0.01),但仍明顯高于對(duì)照組水平(P<0.01),再灌注6h、12h、24h、48h各組MDA值與相應(yīng)IR組值和對(duì)照值比較差別無(wú)顯著性。
2.2 腦缺血再灌注損傷后海馬CA—1區(qū)Na+—K+—ATPase和Ca2+—ATPase活性的變化見表2和表3。
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IR組再灌注1h、6h、12h的Na+—K+—ATPase和Ca2+—ATPase活性均明顯低于對(duì)照值(P<0.05),且隨再灌注時(shí)間延續(xù)而逐漸恢復(fù),至24h恢復(fù)接近對(duì)照組水平,以后無(wú)明顯變化。TMP組再灌注1h后與IR組比較,能明顯增強(qiáng)酶活性(P<0.01),但仍顯著低于對(duì)照組水平(P<0.01);再灌注6h,酶活性比相應(yīng)的IR組高(P<0.05),較對(duì)照組水平低(P<0.05);再灌注12h,酶活性比相應(yīng)IR組高(P<0.01),但已接近SOC組水平;再灌注24h、48h后與對(duì)應(yīng)IR組和SOC組無(wú)明顯差異。
表1 川芎嗪對(duì)海馬CA1區(qū)MDA的影響(
1h
, 百拇醫(yī)藥 6h
12h
24h
48h
SOC
82.61±12.98
IR
160.52±14.55*
80.11±13.99
80.44±13.01
79.16±12.25
80.30±13.41
, 百拇醫(yī)藥
TMP
108.14±11.42*△
76.52±12.19
77.34±13.27
76.72±11.93
76.87±12.11
與SOC組比較*P<0.01,與同時(shí)間點(diǎn)IR組比較△P<0.01表2 川芎嗪對(duì)海馬CA1區(qū)Na+—K+ATPase活性的影響(
, 百拇醫(yī)藥
1h
6h
12h
24h
48h
SOC
0.528±0.015
IR
0.403±0.021*
0.458±0.033*
0.499±0.027*
0.534±0.021
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0.529±0.029
TMP
0.459±0.029△*
0.497±0.031△*
0.537±0.018△
0.538±0.025
0.535±0.036
與SOC組比較*P<0.01,與同時(shí)間點(diǎn)IR組比較△P<0.01表3 川芎嗪對(duì)海馬CA1區(qū)Ca2+—ATPase的影響(
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1h
6h
12h
24h
48h
SOC
0.629±0.037
IR
0.418±0.059*
0.494±0.051*
0.583±0.034*
0.641±0.029
, 百拇醫(yī)藥
0.650±0.031
TMP
0.582±0.033△*
0.591±0.033△*
0.595±0.048
0.639±0.052
0.641±0.039
與SOC組比較*P<0.01,與同時(shí)點(diǎn)IR組比較△P<0.01
3 討 論
氧自由基對(duì)細(xì)胞的損傷作用主要是引起生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng),MDA作為氧自由基與生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的代謝產(chǎn)物,其含量的變化可間接地反映組織中氧自由基含量的變化和組織損傷的程度。
, 百拇醫(yī)藥
本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)腦缺血后大鼠海馬CA1區(qū)組織Na+—K+—ATPase、Ca2+—ATPase早期活性明顯降低。ATPase主要存在于神經(jīng)元膜上和線粒體內(nèi),通過(guò)水解ATP逆電化學(xué)梯度進(jìn)行離子轉(zhuǎn)運(yùn),是維持神經(jīng)元興奮傳導(dǎo),突觸體傳遞和離子內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的物質(zhì)基礎(chǔ)。腦缺血后海馬CA1區(qū)組織ATPase活性抑制可引起神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)的Na+、Ca2+聚積,K+流失,離子內(nèi)環(huán)境紊亂,從而導(dǎo)致神經(jīng)元損害[8,9]。近年來(lái),Ca2+在神經(jīng)元損害過(guò)程中的作用已日益受到重視,許多學(xué)者認(rèn)為細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載是缺血性神經(jīng)死亡的最后共同通路。細(xì)胞內(nèi)Ca2+聚積可激活磷脂酶A2,導(dǎo)致膜磷脂降解產(chǎn)生游離脂肪酸,繼而由花生四烯酸衍生為前列腺素和白三烯等活性物質(zhì)破壞細(xì)胞功能;Ca2+增高還可以使Ca2+—CaM復(fù)合物調(diào)節(jié)的蛋白激酶,腺苷酸環(huán)化酶等功能失調(diào),線粒體氧化磷酸化失偶聯(lián),能量生成減少,導(dǎo)致神經(jīng)元代謝紊亂[8,9]。用川芎嗪治療后,可以顯著改善ATPase的功能,從而減輕海馬結(jié)構(gòu)缺血再灌注損傷。
, 百拇醫(yī)藥
實(shí)驗(yàn)觀察到MDA值再灌注6h即恢復(fù)自穩(wěn)態(tài),以后不再顯著變化;ATPase活性再灌注24h恢復(fù)至對(duì)照水平,以后不再明顯變化,這些物質(zhì)為什么會(huì)出現(xiàn)自穩(wěn)態(tài)恢復(fù)現(xiàn)象,原因不甚明確,但有一點(diǎn)可以肯定,臨床上提到的治療缺血性腦損傷的“機(jī)會(huì)窗”與自穩(wěn)態(tài)恢復(fù)時(shí)程密切相關(guān)[10]。在缺血缺氧損傷時(shí),電解質(zhì)和一些代謝物質(zhì)濃度早期會(huì)異常紊亂,如果不用藥物干涉,讓其自然恢復(fù)穩(wěn)態(tài),在恢復(fù)過(guò)程中,可能已經(jīng)啟動(dòng)了繼發(fā)的損傷級(jí)聯(lián)反應(yīng), 興奮性毒性—梗死周圍去極化—炎癥—細(xì)胞凋亡[11]。即使紊亂的物質(zhì)恢復(fù)了穩(wěn)態(tài),損傷已不可避免地啟動(dòng)并發(fā)展下去。神經(jīng)保護(hù)藥物如果能夠縮短紊亂物質(zhì)恢復(fù)自穩(wěn)態(tài)的時(shí)程,減少引發(fā)損傷級(jí)聯(lián)反應(yīng)的機(jī)會(huì),將會(huì)起到良好的神經(jīng)保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)所用川芎嗪給藥時(shí)間為再灌注10min,完全處在各物質(zhì)恢復(fù)自穩(wěn)態(tài)之前,即處于治療的最佳“機(jī)會(huì)窗”,可以清除氧自由基,減少缺血再灌注損傷時(shí)的脂質(zhì)過(guò)氧化,增強(qiáng)ATPase活性,拮抗Ca2+超載,更重要的是它縮短了紊亂物質(zhì)恢復(fù)自穩(wěn)態(tài)的時(shí)程,有較好的腦保護(hù)效果。
收稿2000-02-12
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