薄層掃描法測(cè)定玄冬沖劑中綠原酸的含量
作者：劉吉金
單位：劉吉金(深圳市藥品檢驗(yàn)所 518029)
關(guān)鍵詞：
藥物分析雜志000223 玄冬沖劑系由玄參、麥冬、金銀花等中藥制成的復(fù)方制劑，對(duì)咽喉炎、口腔炎有較好的療效。其主要原料為金銀花，為了有效地控制制劑的質(zhì)量，本文用薄層掃描法測(cè)定了金銀花中綠原酸的含量，結(jié)果較為滿(mǎn)意。
1 儀器、試劑和材料
CS-930型雙波長(zhǎng)薄層掃描儀(日本島津)；薄層板自動(dòng)涂布器PBQ-Ⅰ型(四川省中藥研究所)；微量定量毛細(xì)管(美國(guó)Drummond)；紫外線檢測(cè)器(瑞士CAMAG uv-cabinet Ⅱ)。
綠原酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所)；硅膠H(青島海洋化工廠)；所用試劑均為分析純。
, 百拇醫(yī)藥
玄冬沖劑由深圳市人民醫(yī)院制劑室提供。
2 方法與結(jié)果
2.1 薄層層析及掃描條件 取硅膠H-0.5 % 羧甲基纖維素鈉(1∶3)，用自動(dòng)涂布器濕法鋪板，厚0.4 mm，室溫干燥后，110 ℃活化1 h,置干燥器中備用；展開(kāi)劑：醋酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)的上層溶液；紫外光燈(365 nm)下定位；掃描條件：λS = 320 nm，λR = 370 nm，反射法鋸齒掃描,狹縫1.2 mm × 1.2 mm；靈敏度：中，線性化參數(shù)SX=3。
2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取綠原酸對(duì)照品，加甲醇制成0.545 mg。mL-1的溶液，即得。
2.3 供試品溶液的制備 精密稱(chēng)取本品5 g，加甲醇超聲提取30 min，濾過(guò)，濾器及濾渣用甲醇15 mL分次洗滌，合并濾液與洗液，水浴蒸干，殘?jiān)铀?0 mL微熱溶解，加枸櫞酸調(diào)pH=3，用醋酸乙酯提取3次，每次20 mL，合并醋酸乙酯液，用無(wú)水硫酸鈉脫水，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙�，定量轉(zhuǎn)移至2 mL 量瓶?jī)?nèi)，并稀釋至刻度，搖勻，即得。
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2.4 線性關(guān)系的考察 精密吸取綠原酸對(duì)照品溶液1，2，4，6，8 μL，分別點(diǎn)于同一薄層板上，按上述條件層析，掃描測(cè)定。結(jié)果，綠原酸點(diǎn)樣量(X)在0.545～4.36 μg 范圍內(nèi)與峰面積的積分值(Y)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：
Y=39 745.6 X - 2 276.4 r=0.998 3
2.5精密度試驗(yàn) 精密吸取綠原酸對(duì)照品溶液2 μL，5份，分別點(diǎn)于同一薄層板上，依法測(cè)定峰面積積分值。結(jié)果RSD=2.07 %(n=5)。
2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取層析后的薄層板立即進(jìn)行測(cè)定和室溫下放置不同時(shí)間進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果，斑點(diǎn)峰面積積分值在3 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD=1.67%(n=5)。
2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品(批號(hào)為980714)5份，按“樣品測(cè)定”項(xiàng)下的方法，測(cè)定樣品中綠原酸的含量，結(jié)果RSD=2.16%(n=5)。
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2.8 干擾試驗(yàn) 按處方量取除金銀花外的其余各藥味按相同工藝制成陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液的制備方法，制成陰性對(duì)照溶液。取供試品溶液、對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照品溶液，分別點(diǎn)于同一薄層板上，按上述條件展開(kāi)，置紫外光燈(365 nm)下檢視，陰性對(duì)照溶液在與對(duì)照品溶液相應(yīng)的位置上無(wú)相應(yīng)特征斑點(diǎn)顯示。薄層圖譜見(jiàn)圖1。
圖1 玄冬沖劑薄層色譜圖
1.綠原酸對(duì)照品 2.供試品溶液 3.空白對(duì)照液
2.9 回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取已測(cè)知含量的樣品5 g，6份，分別精密加入綠原酸對(duì)照品溶液(1.536 mg。mL-1)各1 mL，依法提取測(cè)定，平均回收率為97.45%，RSD為2.30%(n=6)。
, http://www.www.srpcoatings.com 2.10 樣品測(cè)定 精密吸取供試品溶液2 μL，對(duì)照品溶液1 μL和3 μL，分別點(diǎn)于同一薄層板上，按上述條件層析，掃描測(cè)定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算，結(jié)果980714，981201，980728批號(hào)樣品中綠原酸含量分別為0.015 8%，0.018 7%，0.028 2%，n=3。
3 討論
樣品中綠原酸的提取實(shí)驗(yàn)曾比較了用甲醇超聲提取和加熱回流提取2種方法，結(jié)果無(wú)顯著差別，以選擇甲醇超聲提取較方便。另外，考慮到綠原酸為弱酸，為增加其在醋酸乙酯中的溶解度，還比較了用醋酸乙酯萃取前的水溶液加枸櫞酸調(diào)不同的pH與不調(diào)pH，結(jié)果以調(diào)pH=3，綠原酸含量最高。薄層層析條件的選擇曾試用硅膠G板，醋酸乙酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)的上層溶液、醋酸丁酯-甲酸-水(8.5∶5.5∶2.5)的上層溶液、醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶1∶1∶1)等多種展開(kāi)劑，所得色譜均不理想，或大部分斑點(diǎn)推至前沿，或斑點(diǎn)分離不好，有拖尾現(xiàn)象，經(jīng)篩選的擬定方法并于展開(kāi)前預(yù)飽和30 min，克服了上述缺點(diǎn)，展開(kāi)斑點(diǎn)較圓整，易于掃描。
該制劑中幾個(gè)批號(hào)樣品綠原酸含量有一定差異，作者認(rèn)為與金銀花原料的產(chǎn)地、采收季節(jié)有關(guān)。
參考文獻(xiàn)
1，中國(guó)藥典.1995.一部:189
2，王寶琴.中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1994.337，371,539，611
(本文于1999年6月4日收到), http://www.www.srpcoatings.com
單位：劉吉金(深圳市藥品檢驗(yàn)所 518029)
關(guān)鍵詞：
藥物分析雜志000223 玄冬沖劑系由玄參、麥冬、金銀花等中藥制成的復(fù)方制劑，對(duì)咽喉炎、口腔炎有較好的療效。其主要原料為金銀花，為了有效地控制制劑的質(zhì)量，本文用薄層掃描法測(cè)定了金銀花中綠原酸的含量，結(jié)果較為滿(mǎn)意。
1 儀器、試劑和材料
CS-930型雙波長(zhǎng)薄層掃描儀(日本島津)；薄層板自動(dòng)涂布器PBQ-Ⅰ型(四川省中藥研究所)；微量定量毛細(xì)管(美國(guó)Drummond)；紫外線檢測(cè)器(瑞士CAMAG uv-cabinet Ⅱ)。
綠原酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所)；硅膠H(青島海洋化工廠)；所用試劑均為分析純。
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玄冬沖劑由深圳市人民醫(yī)院制劑室提供。
2 方法與結(jié)果
2.1 薄層層析及掃描條件 取硅膠H-0.5 % 羧甲基纖維素鈉(1∶3)，用自動(dòng)涂布器濕法鋪板，厚0.4 mm，室溫干燥后，110 ℃活化1 h,置干燥器中備用；展開(kāi)劑：醋酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)的上層溶液；紫外光燈(365 nm)下定位；掃描條件：λS = 320 nm，λR = 370 nm，反射法鋸齒掃描,狹縫1.2 mm × 1.2 mm；靈敏度：中，線性化參數(shù)SX=3。
2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取綠原酸對(duì)照品，加甲醇制成0.545 mg。mL-1的溶液，即得。
2.3 供試品溶液的制備 精密稱(chēng)取本品5 g，加甲醇超聲提取30 min，濾過(guò)，濾器及濾渣用甲醇15 mL分次洗滌，合并濾液與洗液，水浴蒸干，殘?jiān)铀?0 mL微熱溶解，加枸櫞酸調(diào)pH=3，用醋酸乙酯提取3次，每次20 mL，合并醋酸乙酯液，用無(wú)水硫酸鈉脫水，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙�，定量轉(zhuǎn)移至2 mL 量瓶?jī)?nèi)，并稀釋至刻度，搖勻，即得。
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2.4 線性關(guān)系的考察 精密吸取綠原酸對(duì)照品溶液1，2，4，6，8 μL，分別點(diǎn)于同一薄層板上，按上述條件層析，掃描測(cè)定。結(jié)果，綠原酸點(diǎn)樣量(X)在0.545～4.36 μg 范圍內(nèi)與峰面積的積分值(Y)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：
Y=39 745.6 X - 2 276.4 r=0.998 3
2.5精密度試驗(yàn) 精密吸取綠原酸對(duì)照品溶液2 μL，5份，分別點(diǎn)于同一薄層板上，依法測(cè)定峰面積積分值。結(jié)果RSD=2.07 %(n=5)。
2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取層析后的薄層板立即進(jìn)行測(cè)定和室溫下放置不同時(shí)間進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果，斑點(diǎn)峰面積積分值在3 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD=1.67%(n=5)。
2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品(批號(hào)為980714)5份，按“樣品測(cè)定”項(xiàng)下的方法，測(cè)定樣品中綠原酸的含量，結(jié)果RSD=2.16%(n=5)。
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2.8 干擾試驗(yàn) 按處方量取除金銀花外的其余各藥味按相同工藝制成陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液的制備方法，制成陰性對(duì)照溶液。取供試品溶液、對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照品溶液，分別點(diǎn)于同一薄層板上，按上述條件展開(kāi)，置紫外光燈(365 nm)下檢視，陰性對(duì)照溶液在與對(duì)照品溶液相應(yīng)的位置上無(wú)相應(yīng)特征斑點(diǎn)顯示。薄層圖譜見(jiàn)圖1。
圖1 玄冬沖劑薄層色譜圖
1.綠原酸對(duì)照品 2.供試品溶液 3.空白對(duì)照液
2.9 回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取已測(cè)知含量的樣品5 g，6份，分別精密加入綠原酸對(duì)照品溶液(1.536 mg。mL-1)各1 mL，依法提取測(cè)定，平均回收率為97.45%，RSD為2.30%(n=6)。
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3 討論
樣品中綠原酸的提取實(shí)驗(yàn)曾比較了用甲醇超聲提取和加熱回流提取2種方法，結(jié)果無(wú)顯著差別，以選擇甲醇超聲提取較方便。另外，考慮到綠原酸為弱酸，為增加其在醋酸乙酯中的溶解度，還比較了用醋酸乙酯萃取前的水溶液加枸櫞酸調(diào)不同的pH與不調(diào)pH，結(jié)果以調(diào)pH=3，綠原酸含量最高。薄層層析條件的選擇曾試用硅膠G板，醋酸乙酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)的上層溶液、醋酸丁酯-甲酸-水(8.5∶5.5∶2.5)的上層溶液、醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶1∶1∶1)等多種展開(kāi)劑，所得色譜均不理想，或大部分斑點(diǎn)推至前沿，或斑點(diǎn)分離不好，有拖尾現(xiàn)象，經(jīng)篩選的擬定方法并于展開(kāi)前預(yù)飽和30 min，克服了上述缺點(diǎn)，展開(kāi)斑點(diǎn)較圓整，易于掃描。
該制劑中幾個(gè)批號(hào)樣品綠原酸含量有一定差異，作者認(rèn)為與金銀花原料的產(chǎn)地、采收季節(jié)有關(guān)。
參考文獻(xiàn)
1，中國(guó)藥典.1995.一部:189
2，王寶琴.中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1994.337，371,539，611
(本文于1999年6月4日收到), http://www.www.srpcoatings.com