HLA-B27抗原與前葡萄膜炎的相關(guān)性及其臨床意義
作者:周紅顏 楊培增 黃祥坤 陳玲 鐘暉 金浩麗 籍莉 陸惠玲 陳盛強
單位:周紅顏 楊培增 黃祥坤 陳玲 鐘暉 金浩麗(510060廣州,中山醫(yī)科大學(xué)中山眼科中心);籍莉(廣州白云區(qū)人民醫(yī)院);陸惠玲(中山醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)物證教研室);陳盛強(廣州醫(yī)學(xué)院)
關(guān)鍵詞:前葡萄膜炎;免疫遺傳;HLA-B27抗原
眼科研究000302 摘要 目的探討HLA-B27抗原與前葡萄膜炎的相關(guān)性及可能的意義。方法用多聚酶鏈反應(yīng)(PCR)和微量淋巴細胞毒試驗對20例伴有關(guān)節(jié)強直性脊椎炎(AS)的急性前葡萄膜炎(AAU)、67例AAU、70例慢性前葡萄膜炎和708個健康人進行HLA-B27分型。結(jié)果AS伴有AAU和單純的AAU患者中HLA-B27陽性率分別為70%和49.25%,顯著高于對照組(2.97%,P<0.001),慢性前葡萄膜炎患者中HLA-B27的陽性率(4.28%)與對照組無顯著差別。結(jié)論AAU與HLA-B27有密切的相關(guān)性,在這些患者中進行HLA-B27分型對評價葡萄膜炎的病因和預(yù)后有一定的價值。
, 百拇醫(yī)藥
分類號 R773
The association of various forms of anterior uveitis with HLA-B27 antigen and its clinical implication
Zhou Hongyan,Yang Peizeng,Huang Xiangkun
(Zhongshan Ophthalmic Center,Sun Yat-sen University
of Medical Sciences,Guangzhou 510060)
Abstract Objective:To investigate the association of various forms of anterior uveitis with HLA-B27 antigen and its possible clinical implication.Methods:Polymerase chain reaction (PCR) or microcytotoxity assay was used for determinating HLA-B27 on 20 patients with ankylosing spondylitis(AS) and acute anterior uveitis(AAU),67 patients with AAU,70 patients with chronic anterior uveits including idiopathic anterior uveitis and Fuchs syndrome,and 708 healthy individuals.Results:Determination of HLA-B27 in 51 samples with both PCR and microcytotoxity assay revealed the same result,indicating that data from each method may be compared.A strong association between HLA-B27 and AS and AAU (70%),and with AAU (49.25%) was noted compared with the controls (2.97%, P<0.001).No positive association was found between HLA-B27 and chronic anterior uveitis.Conclusion:AAU,especially in company with AS,is strongly associated with HLA-B27 antigen.Determinating HLA-B27 is helpful in the investigation of the etiology,and evaluation of prognosis of AAU.
, 百拇醫(yī)藥
Key words anterior uveitis immunogenetics HLA-B27antigen
葡萄膜炎是一類常見的致盲眼病。近年來,免疫遺傳方面的研究已揭示出多種類型葡萄膜炎與特定的人類白細胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)相關(guān)[1],如HLA-B27與急性前葡萄膜炎(acute anterior uveitis,AAU)有密切的相關(guān)性[2-6],但有關(guān)HLA-B27與其它類型的前葡萄膜炎以及與關(guān)節(jié)強直性脊椎炎(ankylosing spondylysis,AS)相伴的葡萄膜炎之間的相關(guān)性國內(nèi)尚無大宗病例的研究報道,我們用多聚酶鏈反應(yīng)(Polymerase chain reaction,PCR)方法和傳統(tǒng)的微量淋巴細胞毒試驗探討了157例前葡萄膜炎與HLA-B27的相關(guān)性。
1 材料和方法
, http://www.www.srpcoatings.com 檢測對象為中山眼科中心葡萄膜炎專科門診的前葡萄膜炎患者,共157例,均為漢族,其中AAU67例,AS伴發(fā)的AAU20例,其它類型前葡萄膜炎70例,對照為廣東地區(qū)708個漢族健康人。
取受檢者血,加入抗凝劑,用酚抽提法提取DNA。所用HLA-B27序列特異引物為:(1)5′-CAGTCTGTGCCTTGGCGTTGC,(2)5′-GGCTACGTGGACGACACGCT,擴增產(chǎn)物為144bp;我們選擇人類生長激素基因特異性引物為內(nèi)對照,序列為:(1)5′-GCCTTCCCAACCCCCTTA,(2)5′-TCACGGATTTCTGTTGTGTTT,擴增產(chǎn)物為429bp。以上引物均由加拿大真達科技貿(mào)易有限公司提供。PCR反應(yīng)體系包括50~100ng基因DNA,多聚酶1U、B27特異性引物(0.5μmol)、200mdNTP和PCR緩沖液。實驗過程為:95℃預(yù)先變性5min,在基因擴增儀上進行30個周期的熱循環(huán),3個溫度條件分別是94℃30s、58℃40s、79℃60s。于2%瓊脂糖凝膠上進行電泳20min,電壓5V/cm,紫外燈下觀察結(jié)果。
, http://www.www.srpcoatings.com
2 結(jié)果
為了比較PCR和微量淋巴細胞毒試驗的一致性,我們對51例受檢者同時進行兩種試驗,發(fā)現(xiàn)二者檢查結(jié)果相同,所以我們將早期的微量淋巴細胞毒試驗結(jié)果和后期的PCR所測結(jié)果一并計算。
在不同類型的前葡萄膜炎中,HLA-B27陽性率有顯著差別,AS伴發(fā)的AAU患者陽性率最高,為70%,AAU患者的陽性率為49.25%,二者均顯著高于正常人群中此抗原的陽性率(2.97%,P<0.001),慢性前葡萄膜炎患者的陽性率(4.28%)與正常人群則無顯著性差別(表1)。
表1 不同類型前葡萄膜炎和正常人群的HLA-B27陽性率比較
Tab.1 The prevalence of HLA-B27 antigen in patients
with anterior uveitis and healthy individuals
, http://www.www.srpcoatings.com
n
Positive rate(%)
χ2
Relative risk
AS+AAU
20
70.0
190.98
71.33
AAU
67
49.25
, 百拇醫(yī)藥
202.47
31.05
Chronic anterior uveitis
70
4.28
0.46
1.66
Controls
708
2.97
3 討論
微量淋巴細胞毒性試驗是進行HLA-B27分型的傳統(tǒng)方法,此方法需要高質(zhì)量的抗血清,所用費用高,在一般醫(yī)院難于推廣,但以PCR方法檢測HLA-B27全部等位基因,方法較為簡便,所需樣品量少[7],且我們同時擴增人類生長激素基因作為內(nèi)對照,避免假陽性和假陰性結(jié)果。經(jīng)過對比兩種方法檢測的結(jié)果,我們發(fā)現(xiàn)二者相同,表明PCR方法可以取代傳統(tǒng)的血清學(xué)方法,兩種方法所測的結(jié)果具有可比性。
, 百拇醫(yī)藥
前葡萄膜炎是葡萄膜炎中最常見的類型,血清陰性的椎關(guān)節(jié)病變?nèi)鏏S、炎癥性腸道疾病是其常見的伴隨疾病,此類疾病與HLA-B27有明顯的相關(guān)性。我們的結(jié)果也證實了這一觀點,患者陽性率高于單純AAU患者陽性率,更高于人群中的陽性率。Linsen等[5]發(fā)現(xiàn)在AAU患者中約50%為HLA-B27陽性,在AS伴發(fā)的AAU患者中陽性率近100%。
HLA-B27與AAU和AS的密切相關(guān)性為我們確定AAU的病因和類型提供了幫助。在我們診治的20例AS患者中僅有2例在眼科就診時知道患有AS,根據(jù)HLA-B27陽性的結(jié)果,我們建議這些患者進行骶髂關(guān)節(jié)及腰椎X線檢查,最后明確了診斷。我們還對30例HLA-B27陰性的慢性前葡萄膜炎患者的骶髂關(guān)節(jié)拍片進行了分析,未發(fā)現(xiàn)AS存在?梢,對HLA-B27陰性的慢性前葡萄膜炎患者沒有必要進行骶髂關(guān)節(jié)X線檢查。
根據(jù)與HLA-B27的相關(guān)性把前葡萄膜炎分為兩大類,一類是HLA-B27陽性,另一類為HLA-B27陰性,我們發(fā)現(xiàn),前者主要表現(xiàn)為急性非肉芽腫性虹膜睫狀體炎,多為雙眼發(fā)病,但多先后發(fā)病,易于復(fù)發(fā),如在急性期處理得當則預(yù)后較好。后一類則多為慢性前葡萄膜炎,多為肉芽腫性炎癥,易發(fā)生虹膜后粘連、青光眼等并發(fā)癥,預(yù)后較差。因此對患者進行HLA-B27分型不但有助于臨床診斷、確定病因和伴隨的全身疾病,而且對指導(dǎo)治療和了解患者的預(yù)后也有一定的價值。
, http://www.www.srpcoatings.com
本文受國家杰出青年基金基金編號:39925034、教育部跨世紀人才培養(yǎng)計劃基金1999-2、廣東省自然科學(xué)基金980114和廣東省重點科技攻關(guān)項目基金資助。
參考文獻
1,楊培增,李紹珍.葡萄膜炎.北京:人民衛(wèi)生出版社,1998.245-280
2,Pavesio CG.Clinical features of uveitis.In:Easty DL,Sparrow JM,eds.Oxford:Oxford Textbook of Ophthalmology,1999.518-520
3,張曉艷,胡天圣,汪秀明.急性前色素膜炎與HLA抗原相關(guān)的臨床研究.中華眼科雜志,1990,26∶2
4,高永慶,雷紅,王津津,等.HLA與急性前葡萄膜炎相關(guān)的研究.實用眼科雜志,1991,9∶461
, 百拇醫(yī)藥
5,Linssen A,Dekker-Saeys AJ,Dijkstra PF,et al.The use of HLA-B27 as a diagnostic and prognostic aid in acute anterior uveitis(AAU) in the Netherlands.Docum Ophthalmol,1986,64∶217
6,孫世珉,薛南平,劉煥業(yè),等.前色素膜炎患者HLA-B27及T-細胞亞群的檢測.中華眼科雜志,1990,26∶258
7,陳盛強,胡朝輝,燕啟江,等.用PCR方法檢測HLA-B27基因.上海醫(yī)學(xué)檢驗雜志,1998,13∶131
(收稿:2000-02-12 修回:2000-03-08), 百拇醫(yī)藥
單位:周紅顏 楊培增 黃祥坤 陳玲 鐘暉 金浩麗(510060廣州,中山醫(yī)科大學(xué)中山眼科中心);籍莉(廣州白云區(qū)人民醫(yī)院);陸惠玲(中山醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)物證教研室);陳盛強(廣州醫(yī)學(xué)院)
關(guān)鍵詞:前葡萄膜炎;免疫遺傳;HLA-B27抗原
眼科研究000302 摘要 目的探討HLA-B27抗原與前葡萄膜炎的相關(guān)性及可能的意義。方法用多聚酶鏈反應(yīng)(PCR)和微量淋巴細胞毒試驗對20例伴有關(guān)節(jié)強直性脊椎炎(AS)的急性前葡萄膜炎(AAU)、67例AAU、70例慢性前葡萄膜炎和708個健康人進行HLA-B27分型。結(jié)果AS伴有AAU和單純的AAU患者中HLA-B27陽性率分別為70%和49.25%,顯著高于對照組(2.97%,P<0.001),慢性前葡萄膜炎患者中HLA-B27的陽性率(4.28%)與對照組無顯著差別。結(jié)論AAU與HLA-B27有密切的相關(guān)性,在這些患者中進行HLA-B27分型對評價葡萄膜炎的病因和預(yù)后有一定的價值。
, 百拇醫(yī)藥
分類號 R773
The association of various forms of anterior uveitis with HLA-B27 antigen and its clinical implication
Zhou Hongyan,Yang Peizeng,Huang Xiangkun
(Zhongshan Ophthalmic Center,Sun Yat-sen University
of Medical Sciences,Guangzhou 510060)
Abstract Objective:To investigate the association of various forms of anterior uveitis with HLA-B27 antigen and its possible clinical implication.Methods:Polymerase chain reaction (PCR) or microcytotoxity assay was used for determinating HLA-B27 on 20 patients with ankylosing spondylitis(AS) and acute anterior uveitis(AAU),67 patients with AAU,70 patients with chronic anterior uveits including idiopathic anterior uveitis and Fuchs syndrome,and 708 healthy individuals.Results:Determination of HLA-B27 in 51 samples with both PCR and microcytotoxity assay revealed the same result,indicating that data from each method may be compared.A strong association between HLA-B27 and AS and AAU (70%),and with AAU (49.25%) was noted compared with the controls (2.97%, P<0.001).No positive association was found between HLA-B27 and chronic anterior uveitis.Conclusion:AAU,especially in company with AS,is strongly associated with HLA-B27 antigen.Determinating HLA-B27 is helpful in the investigation of the etiology,and evaluation of prognosis of AAU.
, 百拇醫(yī)藥
Key words anterior uveitis immunogenetics HLA-B27antigen
葡萄膜炎是一類常見的致盲眼病。近年來,免疫遺傳方面的研究已揭示出多種類型葡萄膜炎與特定的人類白細胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)相關(guān)[1],如HLA-B27與急性前葡萄膜炎(acute anterior uveitis,AAU)有密切的相關(guān)性[2-6],但有關(guān)HLA-B27與其它類型的前葡萄膜炎以及與關(guān)節(jié)強直性脊椎炎(ankylosing spondylysis,AS)相伴的葡萄膜炎之間的相關(guān)性國內(nèi)尚無大宗病例的研究報道,我們用多聚酶鏈反應(yīng)(Polymerase chain reaction,PCR)方法和傳統(tǒng)的微量淋巴細胞毒試驗探討了157例前葡萄膜炎與HLA-B27的相關(guān)性。
1 材料和方法
, http://www.www.srpcoatings.com 檢測對象為中山眼科中心葡萄膜炎專科門診的前葡萄膜炎患者,共157例,均為漢族,其中AAU67例,AS伴發(fā)的AAU20例,其它類型前葡萄膜炎70例,對照為廣東地區(qū)708個漢族健康人。
取受檢者血,加入抗凝劑,用酚抽提法提取DNA。所用HLA-B27序列特異引物為:(1)5′-CAGTCTGTGCCTTGGCGTTGC,(2)5′-GGCTACGTGGACGACACGCT,擴增產(chǎn)物為144bp;我們選擇人類生長激素基因特異性引物為內(nèi)對照,序列為:(1)5′-GCCTTCCCAACCCCCTTA,(2)5′-TCACGGATTTCTGTTGTGTTT,擴增產(chǎn)物為429bp。以上引物均由加拿大真達科技貿(mào)易有限公司提供。PCR反應(yīng)體系包括50~100ng基因DNA,多聚酶1U、B27特異性引物(0.5μmol)、200mdNTP和PCR緩沖液。實驗過程為:95℃預(yù)先變性5min,在基因擴增儀上進行30個周期的熱循環(huán),3個溫度條件分別是94℃30s、58℃40s、79℃60s。于2%瓊脂糖凝膠上進行電泳20min,電壓5V/cm,紫外燈下觀察結(jié)果。
, http://www.www.srpcoatings.com
2 結(jié)果
為了比較PCR和微量淋巴細胞毒試驗的一致性,我們對51例受檢者同時進行兩種試驗,發(fā)現(xiàn)二者檢查結(jié)果相同,所以我們將早期的微量淋巴細胞毒試驗結(jié)果和后期的PCR所測結(jié)果一并計算。
在不同類型的前葡萄膜炎中,HLA-B27陽性率有顯著差別,AS伴發(fā)的AAU患者陽性率最高,為70%,AAU患者的陽性率為49.25%,二者均顯著高于正常人群中此抗原的陽性率(2.97%,P<0.001),慢性前葡萄膜炎患者的陽性率(4.28%)與正常人群則無顯著性差別(表1)。
表1 不同類型前葡萄膜炎和正常人群的HLA-B27陽性率比較
Tab.1 The prevalence of HLA-B27 antigen in patients
with anterior uveitis and healthy individuals
, http://www.www.srpcoatings.com
n
Positive rate(%)
χ2
Relative risk
AS+AAU
20
70.0
190.98
71.33
AAU
67
49.25
, 百拇醫(yī)藥
202.47
31.05
Chronic anterior uveitis
70
4.28
0.46
1.66
Controls
708
2.97
3 討論
微量淋巴細胞毒性試驗是進行HLA-B27分型的傳統(tǒng)方法,此方法需要高質(zhì)量的抗血清,所用費用高,在一般醫(yī)院難于推廣,但以PCR方法檢測HLA-B27全部等位基因,方法較為簡便,所需樣品量少[7],且我們同時擴增人類生長激素基因作為內(nèi)對照,避免假陽性和假陰性結(jié)果。經(jīng)過對比兩種方法檢測的結(jié)果,我們發(fā)現(xiàn)二者相同,表明PCR方法可以取代傳統(tǒng)的血清學(xué)方法,兩種方法所測的結(jié)果具有可比性。
, 百拇醫(yī)藥
前葡萄膜炎是葡萄膜炎中最常見的類型,血清陰性的椎關(guān)節(jié)病變?nèi)鏏S、炎癥性腸道疾病是其常見的伴隨疾病,此類疾病與HLA-B27有明顯的相關(guān)性。我們的結(jié)果也證實了這一觀點,患者陽性率高于單純AAU患者陽性率,更高于人群中的陽性率。Linsen等[5]發(fā)現(xiàn)在AAU患者中約50%為HLA-B27陽性,在AS伴發(fā)的AAU患者中陽性率近100%。
HLA-B27與AAU和AS的密切相關(guān)性為我們確定AAU的病因和類型提供了幫助。在我們診治的20例AS患者中僅有2例在眼科就診時知道患有AS,根據(jù)HLA-B27陽性的結(jié)果,我們建議這些患者進行骶髂關(guān)節(jié)及腰椎X線檢查,最后明確了診斷。我們還對30例HLA-B27陰性的慢性前葡萄膜炎患者的骶髂關(guān)節(jié)拍片進行了分析,未發(fā)現(xiàn)AS存在?梢,對HLA-B27陰性的慢性前葡萄膜炎患者沒有必要進行骶髂關(guān)節(jié)X線檢查。
根據(jù)與HLA-B27的相關(guān)性把前葡萄膜炎分為兩大類,一類是HLA-B27陽性,另一類為HLA-B27陰性,我們發(fā)現(xiàn),前者主要表現(xiàn)為急性非肉芽腫性虹膜睫狀體炎,多為雙眼發(fā)病,但多先后發(fā)病,易于復(fù)發(fā),如在急性期處理得當則預(yù)后較好。后一類則多為慢性前葡萄膜炎,多為肉芽腫性炎癥,易發(fā)生虹膜后粘連、青光眼等并發(fā)癥,預(yù)后較差。因此對患者進行HLA-B27分型不但有助于臨床診斷、確定病因和伴隨的全身疾病,而且對指導(dǎo)治療和了解患者的預(yù)后也有一定的價值。
, http://www.www.srpcoatings.com
本文受國家杰出青年基金基金編號:39925034、教育部跨世紀人才培養(yǎng)計劃基金1999-2、廣東省自然科學(xué)基金980114和廣東省重點科技攻關(guān)項目基金資助。
參考文獻
1,楊培增,李紹珍.葡萄膜炎.北京:人民衛(wèi)生出版社,1998.245-280
2,Pavesio CG.Clinical features of uveitis.In:Easty DL,Sparrow JM,eds.Oxford:Oxford Textbook of Ophthalmology,1999.518-520
3,張曉艷,胡天圣,汪秀明.急性前色素膜炎與HLA抗原相關(guān)的臨床研究.中華眼科雜志,1990,26∶2
4,高永慶,雷紅,王津津,等.HLA與急性前葡萄膜炎相關(guān)的研究.實用眼科雜志,1991,9∶461
, 百拇醫(yī)藥
5,Linssen A,Dekker-Saeys AJ,Dijkstra PF,et al.The use of HLA-B27 as a diagnostic and prognostic aid in acute anterior uveitis(AAU) in the Netherlands.Docum Ophthalmol,1986,64∶217
6,孫世珉,薛南平,劉煥業(yè),等.前色素膜炎患者HLA-B27及T-細胞亞群的檢測.中華眼科雜志,1990,26∶258
7,陳盛強,胡朝輝,燕啟江,等.用PCR方法檢測HLA-B27基因.上海醫(yī)學(xué)檢驗雜志,1998,13∶131
(收稿:2000-02-12 修回:2000-03-08), 百拇醫(yī)藥