高效薄層光密度法測定檳榔四消丸中大黃素的含量
作者：劉謙光 張尊聽 庫爾班江 陳戰(zhàn)國
單位：劉謙光 張尊聽 陳戰(zhàn)國(陜西師范大學(xué)化學(xué)系 西安 710062)；庫爾班江(新疆伊犁師范學(xué)院化學(xué)系)
關(guān)鍵詞：
藥物分析雜志000128 檳榔四消丸為常用中成藥，由檳榔、大黃、牽牛子等6味中藥組成，具有消食導(dǎo)滯，行氣瀉水之功效，用于治療食積痰飲，消化不良，脘腹?jié)q滿，噯氣吞酸，大便秘結(jié)，為中國藥典所收載[1]。近年來有研究報(bào)道用檳榔四消丸治療麻痹性腸梗阻[2]療效顯著。關(guān)于該中成藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)藥典上僅有2項(xiàng)定性鑒別方法[1]，柏茗等[3]以甲醇為溶劑提取，酸水解總提物利用分光光度法測定了檳榔四消丸中總蒽醌化合物的含量以探討其質(zhì)量控制方法。本文利用高效薄層色譜掃描法對檳榔四消丸中的大黃素含量進(jìn)行了測定，操作方法簡便快速，可靠，重現(xiàn)性好，平均回收率為99.41%，RSD為0.89%，為該中成藥的質(zhì)量控制提供了定量依據(jù)。
, 百拇醫(yī)藥
1 儀器與材料
儀器：日本島津CS-9000型雙波長薄層掃描儀。
材料：大黃素對照品購自中國藥品生物制品檢定所。硅膠高效薄層板100 mm×100 mm(青島海洋化工廠分廠生產(chǎn))。檳榔四消丸(西安碑林中藥廠出品)，所用試劑均為分析純。
2 溶液制備
2.1 對照溶液配制 精密稱取大黃素對照品3.10 mg，置于10 mL容量瓶中，加氯仿-甲醇(1∶1)溶解并稀釋至刻度；精密吸取該溶液2.5 mL，置10 mL容量瓶中稀釋，制成0.077 5 mg.mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用。
2.2 樣品溶液制備 精密稱取研成細(xì)粉的檳榔四消丸3.0004 g，置于索氏提取器中，加氯仿-甲醇(1∶1)混合溶劑提取至提液無色，濃縮至約5 mL，移置10 mL容量瓶中，加混合溶劑稀釋至刻度，備用。
, 百拇醫(yī)藥
2.3 陰性對照液的制備 按藥典[1]處方配制缺大黃的檳榔四消丸，按“2.2”中提取法制成陰性對照溶液，備用。
3 薄層及掃描條件
3.1 展開條件 用甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)為展開劑，對樣品、大黃素對照品及陰性對照液進(jìn)行上行展開9 cm，在365 nm紫外燈下觀察大黃素的斑點(diǎn)位置，其Rf=0.58，展開結(jié)果見圖1。
圖1 薄層色譜圖
1.樣品 2.陰性對照液 3.對照品
3.2 掃描條件 鋸齒反射掃描，λS=440 nm，λR=530 nm，SX=3，靈敏度中。狹縫1.0 mm×1.0 mm。
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4 線性關(guān)系考察
精密吸取大黃素標(biāo)準(zhǔn)液(0.0775 mg.mL-1)1，2，3，4，5 μL，點(diǎn)于薄層板上，以展開系統(tǒng)展開，展距9 cm，取出，揮干溶劑。按掃描條件掃描，根據(jù)對照品濃度及吸收峰面積進(jìn)行線性回歸，回歸方程：
Y=575 20.48X+531.02,r=0.999 9
線性范圍為0.077 5～0.387 5 μg。
5 精密度
精密吸取大黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液1 μL，在同一塊薄層板點(diǎn)6點(diǎn)，展開、掃描、測定吸收峰面積，RSD為1.10%，n=6。
6 穩(wěn)定性
, http://www.www.srpcoatings.com 精密吸取大黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液4 μL，點(diǎn)于同一薄層板上，展開，取出揮干溶劑，每隔1 h掃描1次，結(jié)果表明：在5 h內(nèi)大黃素斑點(diǎn)吸收峰面積穩(wěn)定。
7 重現(xiàn)性
精密吸取大黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液1 μL，分別點(diǎn)于5塊薄層板上，展開，掃描，峰面積分別為5 485.065，5 198.580，5 291.394，5 176.980，5 427.826，
=5 315.696，測得異板精密度RSD為0.289%(n=5)。
8 加樣回收率測定
精密稱取已測知含量的樣品5份(0.25 g)，分別加入大黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液2.0 mL，按“2.2”中樣品制備同法處理并點(diǎn)樣、展開、掃描、測定，計(jì)算。結(jié)果大黃素的平均回收率為99.41%，RSD為0.89%，n=5。
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9 樣品含量測定
精密吸取樣品溶液1 μL，大黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液1 μL，分別點(diǎn)于同一薄層板上，按上述條件展開，檢視，進(jìn)行掃描測定，計(jì)算樣品中大黃素的含量，結(jié)果見表1。
表1 樣品中大黃素的含量(標(biāo)示量%，n=5) 批號
含量
RSD/%
981104
0.0733
1.1
981125
0.0721
1.0
, http://www.www.srpcoatings.com
981202
0.0712
0.8
981216
0.0704
1.0
10 討論
檳榔四消丸提物，經(jīng)高效硅膠薄層層析在展開劑甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)下，可使大黃素斑點(diǎn)與上下其它成分斑點(diǎn)的距離較遠(yuǎn)，清晰完整，無拖尾。
經(jīng)試驗(yàn)大黃素在甲醇-氯仿(1∶1)混合溶劑中的溶解度比甲醇或氯仿中溶解度大，故采用氯仿和甲醇混合溶劑進(jìn)行提取，提取時(shí)間短，效果好，并且測定結(jié)果為其中游離大黃素的含量。
, http://www.www.srpcoatings.com
本法測定檳榔四消丸中大黃素含量，操作簡便、快速，回收率高，采用高效預(yù)制薄層板板間誤差小，測定精密度高，結(jié)果準(zhǔn)確，可靠，可作為該中成藥的定量質(zhì)控依據(jù)。■
參考文獻(xiàn)：
[1]中國藥典.1995.一部：633
[2]馬風(fēng)友.檳榔四消丸治療麻痹性腸梗阻23例.中成藥，1991，13(3)：47
[3]柏茗，李欣榮，楊曉云等.檳榔四消丸質(zhì)量控制方法探討.中國藥學(xué)雜志，1995，30(1)：42
收稿日期：1999-04-27, http://www.www.srpcoatings.com
單位：劉謙光 張尊聽 陳戰(zhàn)國(陜西師范大學(xué)化學(xué)系 西安 710062)；庫爾班江(新疆伊犁師范學(xué)院化學(xué)系)
關(guān)鍵詞：
藥物分析雜志000128 檳榔四消丸為常用中成藥，由檳榔、大黃、牽牛子等6味中藥組成，具有消食導(dǎo)滯，行氣瀉水之功效，用于治療食積痰飲，消化不良，脘腹?jié)q滿，噯氣吞酸，大便秘結(jié)，為中國藥典所收載[1]。近年來有研究報(bào)道用檳榔四消丸治療麻痹性腸梗阻[2]療效顯著。關(guān)于該中成藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)藥典上僅有2項(xiàng)定性鑒別方法[1]，柏茗等[3]以甲醇為溶劑提取，酸水解總提物利用分光光度法測定了檳榔四消丸中總蒽醌化合物的含量以探討其質(zhì)量控制方法。本文利用高效薄層色譜掃描法對檳榔四消丸中的大黃素含量進(jìn)行了測定，操作方法簡便快速，可靠，重現(xiàn)性好，平均回收率為99.41%，RSD為0.89%，為該中成藥的質(zhì)量控制提供了定量依據(jù)。
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1 儀器與材料
儀器：日本島津CS-9000型雙波長薄層掃描儀。
材料：大黃素對照品購自中國藥品生物制品檢定所。硅膠高效薄層板100 mm×100 mm(青島海洋化工廠分廠生產(chǎn))。檳榔四消丸(西安碑林中藥廠出品)，所用試劑均為分析純。
2 溶液制備
2.1 對照溶液配制 精密稱取大黃素對照品3.10 mg，置于10 mL容量瓶中，加氯仿-甲醇(1∶1)溶解并稀釋至刻度；精密吸取該溶液2.5 mL，置10 mL容量瓶中稀釋，制成0.077 5 mg.mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用。
2.2 樣品溶液制備 精密稱取研成細(xì)粉的檳榔四消丸3.0004 g，置于索氏提取器中，加氯仿-甲醇(1∶1)混合溶劑提取至提液無色，濃縮至約5 mL，移置10 mL容量瓶中，加混合溶劑稀釋至刻度，備用。
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2.3 陰性對照液的制備 按藥典[1]處方配制缺大黃的檳榔四消丸，按“2.2”中提取法制成陰性對照溶液，備用。
3 薄層及掃描條件
3.1 展開條件 用甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)為展開劑，對樣品、大黃素對照品及陰性對照液進(jìn)行上行展開9 cm，在365 nm紫外燈下觀察大黃素的斑點(diǎn)位置，其Rf=0.58，展開結(jié)果見圖1。
圖1 薄層色譜圖
1.樣品 2.陰性對照液 3.對照品
3.2 掃描條件 鋸齒反射掃描，λS=440 nm，λR=530 nm，SX=3，靈敏度中。狹縫1.0 mm×1.0 mm。
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4 線性關(guān)系考察
精密吸取大黃素標(biāo)準(zhǔn)液(0.0775 mg.mL-1)1，2，3，4，5 μL，點(diǎn)于薄層板上，以展開系統(tǒng)展開，展距9 cm，取出，揮干溶劑。按掃描條件掃描，根據(jù)對照品濃度及吸收峰面積進(jìn)行線性回歸，回歸方程：
Y=575 20.48X+531.02,r=0.999 9
線性范圍為0.077 5～0.387 5 μg。
5 精密度
精密吸取大黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液1 μL，在同一塊薄層板點(diǎn)6點(diǎn)，展開、掃描、測定吸收峰面積，RSD為1.10%，n=6。
6 穩(wěn)定性
, http://www.www.srpcoatings.com 精密吸取大黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液4 μL，點(diǎn)于同一薄層板上，展開，取出揮干溶劑，每隔1 h掃描1次，結(jié)果表明：在5 h內(nèi)大黃素斑點(diǎn)吸收峰面積穩(wěn)定。
7 重現(xiàn)性
精密吸取大黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液1 μL，分別點(diǎn)于5塊薄層板上，展開，掃描，峰面積分別為5 485.065，5 198.580，5 291.394，5 176.980，5 427.826，
=5 315.696，測得異板精密度RSD為0.289%(n=5)。8 加樣回收率測定
精密稱取已測知含量的樣品5份(0.25 g)，分別加入大黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液2.0 mL，按“2.2”中樣品制備同法處理并點(diǎn)樣、展開、掃描、測定，計(jì)算。結(jié)果大黃素的平均回收率為99.41%，RSD為0.89%，n=5。
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9 樣品含量測定
精密吸取樣品溶液1 μL，大黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液1 μL，分別點(diǎn)于同一薄層板上，按上述條件展開，檢視，進(jìn)行掃描測定，計(jì)算樣品中大黃素的含量，結(jié)果見表1。
表1 樣品中大黃素的含量(標(biāo)示量%，n=5) 批號
含量
RSD/%
981104
0.0733
1.1
981125
0.0721
1.0
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981202
0.0712
0.8
981216
0.0704
1.0
10 討論
檳榔四消丸提物，經(jīng)高效硅膠薄層層析在展開劑甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)下，可使大黃素斑點(diǎn)與上下其它成分斑點(diǎn)的距離較遠(yuǎn)，清晰完整，無拖尾。
經(jīng)試驗(yàn)大黃素在甲醇-氯仿(1∶1)混合溶劑中的溶解度比甲醇或氯仿中溶解度大，故采用氯仿和甲醇混合溶劑進(jìn)行提取，提取時(shí)間短，效果好，并且測定結(jié)果為其中游離大黃素的含量。
, http://www.www.srpcoatings.com
本法測定檳榔四消丸中大黃素含量，操作簡便、快速，回收率高，采用高效預(yù)制薄層板板間誤差小，測定精密度高，結(jié)果準(zhǔn)確，可靠，可作為該中成藥的定量質(zhì)控依據(jù)。■
參考文獻(xiàn)：
[1]中國藥典.1995.一部：633
[2]馬風(fēng)友.檳榔四消丸治療麻痹性腸梗阻23例.中成藥，1991，13(3)：47
[3]柏茗，李欣榮，楊曉云等.檳榔四消丸質(zhì)量控制方法探討.中國藥學(xué)雜志，1995，30(1)：42
收稿日期：1999-04-27, http://www.www.srpcoatings.com