高效液相色譜法測定鹽酸維拉帕米及其片劑和注射劑的含量及有關(guān)物質(zhì)
作者：王衛(wèi)
單位：王衛(wèi)(天津市藥品檢驗所 天津 300070)
關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；鹽酸維拉帕米；有關(guān)物質(zhì)
藥物分析雜志000215 摘要 目的：建立一種用高效液相色譜法測定鹽酸維拉帕米及其片劑和注射劑的含量及有關(guān)物質(zhì)的方法。方法：以O(shè)DS為固定相。醋酸鹽緩沖溶液-甲醇-三乙胺(55∶45∶1)為流動相，檢測波長為278 nm。結(jié)果：鹽酸維拉帕米的濃度在0.05～1.0 mg.mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程：Y=1.08×103+3.013×105X，r=0.999 9。精密度試驗RSD=0.2%(n=10)，最低檢出限為0.1 μg.mL-1(S/N=3)。片劑、注射劑回收率(n=6)分別為99.5%(RSD=0.4%)；101.1%(RSD=0.2%)。有關(guān)物質(zhì)可檢出4個雜質(zhì)。結(jié)論：本方法簡單、快速、結(jié)果準確。
, 百拇醫(yī)藥
Assay and Tests for Related Substances of Verapamil Hydrochloride,Its Tablet and Injection by HPLC
Wang Wei
(Tianjin Institute of Drug Control,Tianjin 300070)
Abstract Objective：A HPLC method was established for the determination of verapamil hydrochloride,its tablet,injection and related compounds.Method:Verapamil hydrochloride was separated on an ODS column with the mobile phase of acetate buffer-methanol-triethylamine(55∶45∶1) and detected at 278 nm.Results:The standard curve was linear in the range of 0.05～1.0 mg.mL-1 and the correlation coefficient was 0.999 9.The precision of verapamil hydrochloride was good(RSD=0.2%，n=10)and the average recovery of the tablet was 99.5%(RSD=0.4%，n=6)and that of the injection was 101.1%(RSD=0.2%，n=6).Conclusion:The proposed method is simple,rapid,accurate and reliable.
, 百拇醫(yī)藥
Key words HPLC,verapamil hydrochloride,related compounds
鹽酸維拉帕米(異搏定，C27H38N2O4。HCl)為罌粟堿的衍生物。是鈣離子拮抗劑，并為抑制β-受體的冠狀動脈擴張劑。其原料、片劑和注射劑，在中國藥典1995年版、USPⅩ Ⅹ Ⅲ版、BP 1993版及日本藥局方第十三改正版中均有收載。含量測定方法有非水滴定法[1～4]、紫外分光光度法[1,2]及高效液相色譜法[4]；有關(guān)物質(zhì)檢查方法有薄層色譜法[1～3]及高效液相色譜法[4]。
中國藥典1995年版采用非水滴定法測定鹽酸維拉帕米的含量，紫外雙波長法測定其片劑的含量，紫外吸收系數(shù)法測定注射劑的含量，有關(guān)物質(zhì)檢查中是采用薄層色譜法控制1個雜質(zhì)。為了使測定方法統(tǒng)一及消除相關(guān)雜質(zhì)的干擾，作為2000年版藥典工作，我們對1995年版中國藥典中鹽酸維拉帕米及其片劑和注射劑的含量測定及有關(guān)物質(zhì)檢查進行了修訂�，F(xiàn)均采用高效液相色譜法測定，簡單、快速、結(jié)果準確。
, 百拇醫(yī)藥
1 儀器、藥品及試劑
日本島津LC-10A高效液相色譜儀，SPD-10AV紫外檢測器，CTO-10A柱溫箱，C-R7A數(shù)據(jù)處理機。鹽酸維拉帕米對照品由中國藥品生物制品檢定所提供(含量為99.9%)，其原料和制劑由有關(guān)藥廠提供，甲醇、冰醋酸和醋酸鈉均為分析純。
2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗
色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑 Irregular-H C18(4.6 mm×200 mm，10 μm)，柱溫40 ℃。醋酸鹽緩沖溶液的配制：精密稱取醋酸鈉1.36 g，加水適量，振搖使溶解，加冰醋酸33 mL，加水稀釋至1 000 mL，搖勻(pH=4.0，無需調(diào)節(jié))。以醋酸鹽緩沖溶液-甲醇-三乙胺(55∶45∶1)為流動相，流速：1.0 mL。min-1，檢測波長：278 nm，理論板數(shù)按鹽酸維拉帕米計算應(yīng)不低于2 000。
, 百拇醫(yī)藥
3 溶液的配制
3.1 對照品溶液 取鹽酸維拉帕米對照品適量，精密稱定，加流動相使溶解并定量稀釋成0.25 mg。mL-1的溶液。
3.2 原料供試品溶液 取鹽酸維拉帕米原料，照“3.1”項操作，即得。
3.3 片劑供試品溶液 取本品20片除去糖衣，精密稱定，研細，精密稱取適量(約相當于鹽酸維拉帕米125 mg)，置50 mL量瓶中，加流動相適量，振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。
3.4 注射劑供試品溶液 精密量取本品適量(約相當于鹽酸維拉帕米12.5 mg)，置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。
4 標準曲線的制備
, 百拇醫(yī)藥
4.1 含量測定標準曲線 取鹽酸維拉帕米對照品適量，精密稱定，加流動相使溶解并定量稀釋成1.25 mg。mL-1的溶液。分別精密量取1，2，5，8，10，20 mL置25 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以鹽酸維拉帕米的峰面積為縱坐標(Y)，濃度為橫坐標(X)，進行線性回歸。結(jié)果表明，鹽酸維拉帕米濃度在0.05～1.0 mg。mL-1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好�；貧w方程(n=6)：
Y＝1.08×103+3.013×105X r=0.999 9
鹽酸維拉帕米的檢出限為0.1 μg。mL-1(S/N=3)。
4.2 有關(guān)物質(zhì)檢查標準曲線 取鹽酸維拉帕米對照品適量，精密稱定，加流動相使溶解并定量稀釋成0.05 mg。mL-1的溶液，分別精密量取0.5，1，2，5，12.5 mL置25 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。按“4.1”項同法操作，結(jié)果表明，鹽酸維拉帕米濃度在0.001～0.05 mg。mL-1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好�；貧w方程(n=6)：
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Y=3.173×105X+60.6 r=0.999 9
自身對照溶液的濃度為12.5 μg。mL-1(1.0%。)
5 重現(xiàn)性和穩(wěn)定性試驗
取對照品溶液20 μL注入液相色譜儀，重復(fù)進樣10次，以色譜峰面積計算，RSD=0.2%。對照品溶液及供試品溶液在室溫保存24 h后測定，結(jié)果基本不變。
6 回收率試驗
6.1 片劑 分別稱取處方量輔料，精密加入鹽酸維拉帕米對照品適量(約125 mg)，混勻。照“3.3”項下制備溶液，分別精密量取此液及對照品溶液各20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，求得平均回收率為99.5%， RSD=0.4%(n=6)。輔料對測定均無干擾。
, 百拇醫(yī)藥
6.2 注射劑 分別取鹽酸維拉帕米適量，精密稱定，加按處方配制的注射用水使溶解，并稀釋制成0.25 mg。mL-1的溶液，照“6.1”項下方法測定，得平均回收率為101.1%，RSD=0.2%(n=6)，溶劑對測定無干擾。
7 鹽酸維拉帕米及其片劑和注射劑含量測定
分別精密量取各供試品溶液及對照品溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖(圖1-A)，按外標法以峰面積計算，即得。本法與中國藥典法測得結(jié)果見表1。
圖1 鹽酸維拉帕米含量測定(A)及有關(guān)物質(zhì)檢查(B)的色譜圖
1.雜質(zhì)1 2.雜質(zhì)2 3.雜質(zhì)3 4.雜質(zhì)4 5.鹽酸維拉帕米
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8 鹽酸維拉帕米及其片劑和注射劑有關(guān)物質(zhì)測定
8.1 鹽酸維拉帕米 取鹽酸維拉帕米，精密稱定，加流動相制成2.5 mg。mL-1的溶液，作為供試品溶液；量取適量，加流動相制成25.0 μg。mL-1的溶液，作為對照溶液。取對照溶液20 μL注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為滿量程的10%；再取供試品溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分保留時間的3倍。
8.2 片劑 取“3.3”項下的續(xù)濾液作為供試品溶液。照“8.1”項下的方法測定。
8.3 注射劑 取本品作為供試品溶液。照“8.1”項下的方法測定。供試品溶液色譜圖中第1個倒峰為溶劑峰(見圖3-B)。
8.4 測定結(jié)果 本法與中國藥典法測得結(jié)果見表1。我們對HPLC及藥典方法的含量測定結(jié)果進行了配對t檢驗，結(jié)果表明：t=1.9521-0.05/2=2.262 ，故2方法測定結(jié)果無顯著性差異。
, 百拇醫(yī)藥
表1 2種方法測定結(jié)果比較(%，n=2) 批號
產(chǎn)地
劑型
含量
有關(guān)物質(zhì)*
本法
藥典法
本法
藥典法
810804
天津
原料
100.1
, http://www.www.srpcoatings.com
99.3
0.21(4)
<0.5(1)
910401
天津
原料
100.3
99.5
0.05(1)
<0.5(1)
971001
天津
原料
, 百拇醫(yī)藥
100.5
99.6
<0.04(1)
<0.5(1)
980302
天津
原料
100.0
99.7
<0.04(1)
<0.5(1)
960503
天津
, http://www.www.srpcoatings.com
片劑
98.3
97.1
0.04(1)
<0.5(1)
961203
天津
片劑
97.1
95.8
0.04(3)
<0.5(1)
970201
, 百拇醫(yī)藥
上海
片劑
98.1
97.7
0.07(2)
<0.5(1)
980304
上海
片劑
100.5
98.9
0.05(1)
<0.5(1)
, 百拇醫(yī)藥
910802
上海
注射劑
100.5
99.2
0.04(1)
<0.5(1)
970201
上海
注射劑
101.1
102.2
0.05(1)
, http://www.www.srpcoatings.com
<0.5(1)
*括號內(nèi)為雜質(zhì)個數(shù)9 討論
9.1 波長的選擇 用流動相溶解樣品，在紫外200～400 nm之間測定吸收度。在278和234 nm波長處有最大吸收，為避免紫外末端吸收的影響，我們選擇278 nm作為測定波長。
9.2 流動相的選擇 USPⅩ Ⅹ Ⅲ版中鹽酸維拉帕米含量測定的流動相為醋酸鹽緩沖溶液-乙腈-正庚胺(55∶45∶0.5)。正庚胺很難買到，經(jīng)分析加入其目的是使色譜峰形得到改善，遂選用三乙胺代替。經(jīng)考察溶液pH對分離效果的影響(圖2)，調(diào)整三乙胺的比例，可以使4個雜質(zhì)峰與主峰得到良好分離，得到了滿意的結(jié)果(圖1-B)。使用甲醇代替乙腈降低了試驗成本。
圖2 不同pH的流動相對鹽酸維拉帕米
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及其有關(guān)雜質(zhì)保留時間的影響
1.雜質(zhì)1 2.雜質(zhì)2 3.雜質(zhì)3 4.雜質(zhì)4 5.鹽酸維拉帕米
9.3 有關(guān)物質(zhì)考察(破壞性試驗) 取鹽酸維拉帕米供試品溶液及鹽酸維拉帕米注射劑，暴露于日光下10 d后，依法測定，其有關(guān)物質(zhì)均有很大增加(圖3-A，B)，說明本方法可有效地檢出鹽酸維拉帕米的降解產(chǎn)物。
圖3 鹽酸維拉帕米原料的供試品溶液(A)及注射液(B)
暴露于日光下10 d的色譜圖
1.均為雜質(zhì) 2.鹽酸維拉帕米
9.4 有關(guān)物質(zhì)檢查 中國藥典為薄層色譜法，只控制1個雜質(zhì)的限量；本文采用HPLC自身對照法來控制相關(guān)雜質(zhì)的含量，其色譜條件與含量測定相同，在含量測定的同時，即可測得有關(guān)物質(zhì)的結(jié)果。所使用的色譜系統(tǒng)，可以保證鹽酸維拉帕米與4個相關(guān)雜質(zhì)得到良好的基線分離，測定結(jié)果也更加精確。
參考文獻
1，中國藥典.1995.二部：696
2，BP.1993.700，1146
3，JP.Ⅹ Ⅲ.1996.704
4，USP.Ⅹ Ⅹ Ⅲ.1995.1624
(本文于1999年2月25日收到), http://www.www.srpcoatings.com
單位：王衛(wèi)(天津市藥品檢驗所 天津 300070)
關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；鹽酸維拉帕米；有關(guān)物質(zhì)
藥物分析雜志000215 摘要 目的：建立一種用高效液相色譜法測定鹽酸維拉帕米及其片劑和注射劑的含量及有關(guān)物質(zhì)的方法。方法：以O(shè)DS為固定相。醋酸鹽緩沖溶液-甲醇-三乙胺(55∶45∶1)為流動相，檢測波長為278 nm。結(jié)果：鹽酸維拉帕米的濃度在0.05～1.0 mg.mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程：Y=1.08×103+3.013×105X，r=0.999 9。精密度試驗RSD=0.2%(n=10)，最低檢出限為0.1 μg.mL-1(S/N=3)。片劑、注射劑回收率(n=6)分別為99.5%(RSD=0.4%)；101.1%(RSD=0.2%)。有關(guān)物質(zhì)可檢出4個雜質(zhì)。結(jié)論：本方法簡單、快速、結(jié)果準確。
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Assay and Tests for Related Substances of Verapamil Hydrochloride,Its Tablet and Injection by HPLC
Wang Wei
(Tianjin Institute of Drug Control,Tianjin 300070)
Abstract Objective：A HPLC method was established for the determination of verapamil hydrochloride,its tablet,injection and related compounds.Method:Verapamil hydrochloride was separated on an ODS column with the mobile phase of acetate buffer-methanol-triethylamine(55∶45∶1) and detected at 278 nm.Results:The standard curve was linear in the range of 0.05～1.0 mg.mL-1 and the correlation coefficient was 0.999 9.The precision of verapamil hydrochloride was good(RSD=0.2%，n=10)and the average recovery of the tablet was 99.5%(RSD=0.4%，n=6)and that of the injection was 101.1%(RSD=0.2%，n=6).Conclusion:The proposed method is simple,rapid,accurate and reliable.
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Key words HPLC,verapamil hydrochloride,related compounds
鹽酸維拉帕米(異搏定，C27H38N2O4。HCl)為罌粟堿的衍生物。是鈣離子拮抗劑，并為抑制β-受體的冠狀動脈擴張劑。其原料、片劑和注射劑，在中國藥典1995年版、USPⅩ Ⅹ Ⅲ版、BP 1993版及日本藥局方第十三改正版中均有收載。含量測定方法有非水滴定法[1～4]、紫外分光光度法[1,2]及高效液相色譜法[4]；有關(guān)物質(zhì)檢查方法有薄層色譜法[1～3]及高效液相色譜法[4]。
中國藥典1995年版采用非水滴定法測定鹽酸維拉帕米的含量，紫外雙波長法測定其片劑的含量，紫外吸收系數(shù)法測定注射劑的含量，有關(guān)物質(zhì)檢查中是采用薄層色譜法控制1個雜質(zhì)。為了使測定方法統(tǒng)一及消除相關(guān)雜質(zhì)的干擾，作為2000年版藥典工作，我們對1995年版中國藥典中鹽酸維拉帕米及其片劑和注射劑的含量測定及有關(guān)物質(zhì)檢查進行了修訂�，F(xiàn)均采用高效液相色譜法測定，簡單、快速、結(jié)果準確。
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1 儀器、藥品及試劑
日本島津LC-10A高效液相色譜儀，SPD-10AV紫外檢測器，CTO-10A柱溫箱，C-R7A數(shù)據(jù)處理機。鹽酸維拉帕米對照品由中國藥品生物制品檢定所提供(含量為99.9%)，其原料和制劑由有關(guān)藥廠提供，甲醇、冰醋酸和醋酸鈉均為分析純。
2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗
色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑 Irregular-H C18(4.6 mm×200 mm，10 μm)，柱溫40 ℃。醋酸鹽緩沖溶液的配制：精密稱取醋酸鈉1.36 g，加水適量，振搖使溶解，加冰醋酸33 mL，加水稀釋至1 000 mL，搖勻(pH=4.0，無需調(diào)節(jié))。以醋酸鹽緩沖溶液-甲醇-三乙胺(55∶45∶1)為流動相，流速：1.0 mL。min-1，檢測波長：278 nm，理論板數(shù)按鹽酸維拉帕米計算應(yīng)不低于2 000。
, 百拇醫(yī)藥
3 溶液的配制
3.1 對照品溶液 取鹽酸維拉帕米對照品適量，精密稱定，加流動相使溶解并定量稀釋成0.25 mg。mL-1的溶液。
3.2 原料供試品溶液 取鹽酸維拉帕米原料，照“3.1”項操作，即得。
3.3 片劑供試品溶液 取本品20片除去糖衣，精密稱定，研細，精密稱取適量(約相當于鹽酸維拉帕米125 mg)，置50 mL量瓶中，加流動相適量，振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。
3.4 注射劑供試品溶液 精密量取本品適量(約相當于鹽酸維拉帕米12.5 mg)，置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。
4 標準曲線的制備
, 百拇醫(yī)藥
4.1 含量測定標準曲線 取鹽酸維拉帕米對照品適量，精密稱定，加流動相使溶解并定量稀釋成1.25 mg。mL-1的溶液。分別精密量取1，2，5，8，10，20 mL置25 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以鹽酸維拉帕米的峰面積為縱坐標(Y)，濃度為橫坐標(X)，進行線性回歸。結(jié)果表明，鹽酸維拉帕米濃度在0.05～1.0 mg。mL-1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好�；貧w方程(n=6)：
Y＝1.08×103+3.013×105X r=0.999 9
鹽酸維拉帕米的檢出限為0.1 μg。mL-1(S/N=3)。
4.2 有關(guān)物質(zhì)檢查標準曲線 取鹽酸維拉帕米對照品適量，精密稱定，加流動相使溶解并定量稀釋成0.05 mg。mL-1的溶液，分別精密量取0.5，1，2，5，12.5 mL置25 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。按“4.1”項同法操作，結(jié)果表明，鹽酸維拉帕米濃度在0.001～0.05 mg。mL-1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好�；貧w方程(n=6)：
, 百拇醫(yī)藥
Y=3.173×105X+60.6 r=0.999 9
自身對照溶液的濃度為12.5 μg。mL-1(1.0%。)
5 重現(xiàn)性和穩(wěn)定性試驗
取對照品溶液20 μL注入液相色譜儀，重復(fù)進樣10次，以色譜峰面積計算，RSD=0.2%。對照品溶液及供試品溶液在室溫保存24 h后測定，結(jié)果基本不變。
6 回收率試驗
6.1 片劑 分別稱取處方量輔料，精密加入鹽酸維拉帕米對照品適量(約125 mg)，混勻。照“3.3”項下制備溶液，分別精密量取此液及對照品溶液各20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，求得平均回收率為99.5%， RSD=0.4%(n=6)。輔料對測定均無干擾。
, 百拇醫(yī)藥
6.2 注射劑 分別取鹽酸維拉帕米適量，精密稱定，加按處方配制的注射用水使溶解，并稀釋制成0.25 mg。mL-1的溶液，照“6.1”項下方法測定，得平均回收率為101.1%，RSD=0.2%(n=6)，溶劑對測定無干擾。
7 鹽酸維拉帕米及其片劑和注射劑含量測定
分別精密量取各供試品溶液及對照品溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖(圖1-A)，按外標法以峰面積計算，即得。本法與中國藥典法測得結(jié)果見表1。
圖1 鹽酸維拉帕米含量測定(A)及有關(guān)物質(zhì)檢查(B)的色譜圖
1.雜質(zhì)1 2.雜質(zhì)2 3.雜質(zhì)3 4.雜質(zhì)4 5.鹽酸維拉帕米
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8 鹽酸維拉帕米及其片劑和注射劑有關(guān)物質(zhì)測定
8.1 鹽酸維拉帕米 取鹽酸維拉帕米，精密稱定，加流動相制成2.5 mg。mL-1的溶液，作為供試品溶液；量取適量，加流動相制成25.0 μg。mL-1的溶液，作為對照溶液。取對照溶液20 μL注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為滿量程的10%；再取供試品溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分保留時間的3倍。
8.2 片劑 取“3.3”項下的續(xù)濾液作為供試品溶液。照“8.1”項下的方法測定。
8.3 注射劑 取本品作為供試品溶液。照“8.1”項下的方法測定。供試品溶液色譜圖中第1個倒峰為溶劑峰(見圖3-B)。
8.4 測定結(jié)果 本法與中國藥典法測得結(jié)果見表1。我們對HPLC及藥典方法的含量測定結(jié)果進行了配對t檢驗，結(jié)果表明：t=1.952
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表1 2種方法測定結(jié)果比較(%，n=2) 批號
產(chǎn)地
劑型
含量
有關(guān)物質(zhì)*
本法
藥典法
本法
藥典法
810804
天津
原料
100.1
, http://www.www.srpcoatings.com
99.3
0.21(4)
<0.5(1)
910401
天津
原料
100.3
99.5
0.05(1)
<0.5(1)
971001
天津
原料
, 百拇醫(yī)藥
100.5
99.6
<0.04(1)
<0.5(1)
980302
天津
原料
100.0
99.7
<0.04(1)
<0.5(1)
960503
天津
, http://www.www.srpcoatings.com
片劑
98.3
97.1
0.04(1)
<0.5(1)
961203
天津
片劑
97.1
95.8
0.04(3)
<0.5(1)
970201
, 百拇醫(yī)藥
上海
片劑
98.1
97.7
0.07(2)
<0.5(1)
980304
上海
片劑
100.5
98.9
0.05(1)
<0.5(1)
, 百拇醫(yī)藥
910802
上海
注射劑
100.5
99.2
0.04(1)
<0.5(1)
970201
上海
注射劑
101.1
102.2
0.05(1)
, http://www.www.srpcoatings.com
<0.5(1)
*括號內(nèi)為雜質(zhì)個數(shù)9 討論
9.1 波長的選擇 用流動相溶解樣品，在紫外200～400 nm之間測定吸收度。在278和234 nm波長處有最大吸收，為避免紫外末端吸收的影響，我們選擇278 nm作為測定波長。
9.2 流動相的選擇 USPⅩ Ⅹ Ⅲ版中鹽酸維拉帕米含量測定的流動相為醋酸鹽緩沖溶液-乙腈-正庚胺(55∶45∶0.5)。正庚胺很難買到，經(jīng)分析加入其目的是使色譜峰形得到改善，遂選用三乙胺代替。經(jīng)考察溶液pH對分離效果的影響(圖2)，調(diào)整三乙胺的比例，可以使4個雜質(zhì)峰與主峰得到良好分離，得到了滿意的結(jié)果(圖1-B)。使用甲醇代替乙腈降低了試驗成本。
圖2 不同pH的流動相對鹽酸維拉帕米
, 百拇醫(yī)藥
及其有關(guān)雜質(zhì)保留時間的影響
1.雜質(zhì)1 2.雜質(zhì)2 3.雜質(zhì)3 4.雜質(zhì)4 5.鹽酸維拉帕米
9.3 有關(guān)物質(zhì)考察(破壞性試驗) 取鹽酸維拉帕米供試品溶液及鹽酸維拉帕米注射劑，暴露于日光下10 d后，依法測定，其有關(guān)物質(zhì)均有很大增加(圖3-A，B)，說明本方法可有效地檢出鹽酸維拉帕米的降解產(chǎn)物。
圖3 鹽酸維拉帕米原料的供試品溶液(A)及注射液(B)
暴露于日光下10 d的色譜圖
1.均為雜質(zhì) 2.鹽酸維拉帕米
9.4 有關(guān)物質(zhì)檢查 中國藥典為薄層色譜法，只控制1個雜質(zhì)的限量；本文采用HPLC自身對照法來控制相關(guān)雜質(zhì)的含量，其色譜條件與含量測定相同，在含量測定的同時，即可測得有關(guān)物質(zhì)的結(jié)果。所使用的色譜系統(tǒng)，可以保證鹽酸維拉帕米與4個相關(guān)雜質(zhì)得到良好的基線分離，測定結(jié)果也更加精確。
參考文獻
1，中國藥典.1995.二部：696
2，BP.1993.700，1146
3，JP.Ⅹ Ⅲ.1996.704
4，USP.Ⅹ Ⅹ Ⅲ.1995.1624
(本文于1999年2月25日收到), http://www.www.srpcoatings.com