HPLC法測(cè)定刺五加制劑中異梣皮定的含量
作者：?jiǎn)谭?張清波 盧守奇 馮兆云
單位：?jiǎn)谭?張清波 盧守奇(黑龍江省藥品檢驗(yàn)所 哈爾濱 150001)；馮兆云(黑龍江澤揚(yáng)制藥有限公司 哈爾濱 150038)
關(guān)鍵詞：刺五加制劑；異梣皮定；高效液相色譜
藥物分析雜志000309 摘要 目的：建立測(cè)定刺五加制劑中異梣皮定的高效液相色譜法。方法：采用YMC-ODS(4.6 mm×150 mm)色譜柱，以乙腈-水-甲酸(15∶85∶1)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)345 nm，外標(biāo)法定量。結(jié)果：異梣皮定在0.05～0.4 μg.mL-1內(nèi)呈線性關(guān)系，片劑及浸膏的方法回收率分別為97.14%和99.32%(n=5)，RSD分別為1.8%和1.1%。結(jié)論：此法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。
Determination of Isofraxidin in Ciwujia Preparation by HPLC
, 百拇醫(yī)藥
Qiao Fei，Zhang Qingbo，Lu Shouqi
(Heilongjiang Institute for Drug Control,Ha′erbin 150001)
Feng Zhaoyun
(Heilong jiang Zeyang Pharmaceutical Limeted Company Harbin)
Abstract Objective：A HPLC method was developed for the determination of isofraxidin in Ciwujia preparation.Methods:Using an ODS column(4.6 mm×150 mm).The mobile phase consisted of acelonitrile-water-formic acid(85∶15∶1).The UV detection wavelength was 345 nm.The concentration of isofraxidin was quantified by external standard method.Results:Within 0.05～0.4 μg.mL-1,isofraxidin had a good li-nearity.The average recovery of Ciwujia tablet was 97.14% with RSD of 1.8% and the average recovery of Ciwujia extract was 99.32% with RSD of 1.1%.Conclusion:The method is simple,accurate and reproducible.
, 百拇醫(yī)藥
Key words Ciwujia preparation,isofraxidin,HPLC
刺五加浸膏及片劑系由刺五加Acanthopanax senticosus(Rupr.et Maxin.)Harms.單味藥材加工而成，具有益氣健脾，補(bǔ)腎安神等功效[1]，含有多種化學(xué)成分，如異梣皮定，丁香苷等。其中異梣皮定(isofraxidin)具有明顯的鎮(zhèn)靜作用。文獻(xiàn)報(bào)道其含量測(cè)定有薄層層析紫外法[2]。本文采用HPLC法測(cè)定刺五加片及浸膏中異梣皮定的含量，并對(duì)色譜條件進(jìn)行了考察，結(jié)果表明此法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。
1 儀器與試藥
SP2000高效液相色譜儀，SP2000紫外檢測(cè)器(美國(guó)光譜物理公司)。
對(duì)照品為沈陽(yáng)藥科大學(xué)天然藥物研究所提供的精制品，經(jīng)HPLC測(cè)定異梣皮定的含量99.7%。
, 百拇醫(yī)藥
刺五加浸膏(黑龍江省一面坡制藥廠，黑龍江尚志青云制藥廠)；刺五加片(黑龍江省一面坡制藥廠，黑龍江省南岔制藥廠)，每片相當(dāng)于刺五加浸膏0.15 g；甲醇等試劑均為分析純。
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件 色譜柱：YMC-ODS柱(150 mm×4.6 mm)；柱溫：室溫；流動(dòng)相：乙腈-水-甲酸(15∶85∶1)；流速1.0 mL.min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：345 nm，靈敏度：0.1 AUFS。對(duì)照品及樣品圖譜見(jiàn)圖1。
2.2 線性關(guān)系考察 精密稱(chēng)取異梣皮定對(duì)照品，加甲醇制成0.02 mg.mL-1的溶液，按上述色譜條件分別進(jìn)樣2，6，10，14，18 μL，測(cè)定。以對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：
, 百拇醫(yī)藥
Y=2.277×106X+1.145×104 r=0.999 1
線性范圍為0.05～0.4 μg。
2.3 精密度試驗(yàn) 取上述0.02 mg.mL-1對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次10 μL，結(jié)果峰面積的RSD為1.0%。
圖1 異梣皮定色譜圖
A.異NFDA1皮定對(duì)照品 B.刺五加浸膏 C.刺五加片
1.異梣皮定
2.4 重現(xiàn)性試驗(yàn) 分別取同一批號(hào)刺五加浸膏及片劑各5份，照“2.6”項(xiàng)下方法操作，測(cè)定峰面積并計(jì)算含量，結(jié)果RSD分別為3.3%和2.7%(n=5)。
, http://www.www.srpcoatings.com
2.5 回收率測(cè)定 取已測(cè)知含量的刺五加浸膏0.2 g，刺五加片劑0.4 g，各5份，分別精密加入對(duì)照品0.117 5 mg，照“2.6”項(xiàng)下方法操作，測(cè)得片劑平均回收率為97.14%，RSD為1.8%，浸膏平均回收率為99.32%，RSD為1.1%(n=5)。
2.6 樣品測(cè)定 刺五加片供試品溶液：取本品20片，除去糖衣，精密稱(chēng)定，平均片重為0.224 4g，研細(xì)，取2 g精密稱(chēng)定，置索氏提取器中，加氯仿適量，加熱回流4 h，將提取液回收氯仿至干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 mL量瓶?jī)?nèi)，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。刺五加浸膏供試品溶液：取本品0.3 g，精密稱(chēng)定，加20%乙醇20 mL使溶解，置分液漏斗中，用氯仿提取3次，每次15 mL，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 mL量瓶?jī)?nèi)，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。分別精密吸取0.02 mg.mL-1對(duì)照品溶液與上述供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定。5批片劑的每片含量分別為0.027，0.024，0.020，0.012，0.017 mg(n=2)；浸膏含量分別為0.099%，0.074%，0.066%，0.068%，0.072%(n=2)。
, 百拇醫(yī)藥
3 討論
3.1 刺五加生藥測(cè)定方法與結(jié)果 取刺五加粗粉5 g，精密稱(chēng)定，置索氏提取器中，加氯仿適量，加熱回流提取至提取液無(wú)色，回收氯仿至干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。分別精密吸取0.02 mg.mL-1異梣皮定對(duì)照品溶液及上述供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，色譜條件同正文，測(cè)定，結(jié)果含異梣皮定以干燥品計(jì)為0.004%～0.006%。
3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)選擇 取異梣皮定對(duì)照品溶液，進(jìn)行紫外掃描，其最大吸收波長(zhǎng)為345 nm，因此確定其檢測(cè)波長(zhǎng)為345 nm。
3.3 流動(dòng)相選擇 進(jìn)行色譜系統(tǒng)選擇時(shí)，分別用甲醇-水、乙腈-水、乙腈-水-甲酸系統(tǒng)對(duì)樣品進(jìn)行分離，結(jié)果以乙腈-水-甲酸系統(tǒng)(85∶15∶1)的分離效果為佳。
, 百拇醫(yī)藥 3.4 供試品溶液的制備方法的考察 分別對(duì)刺五加浸膏進(jìn)行了氯仿索氏回流提取、氯仿超聲、氯仿萃取的處理方法，但提取均不完全，將浸膏先溶解，再萃取，效果較理想；對(duì)刺五加片，分別用甲醇和氯仿進(jìn)行索氏回流提取試驗(yàn)，結(jié)果氯仿提取的雜質(zhì)少，分離效果好，通過(guò)對(duì)回流時(shí)間的考察發(fā)現(xiàn)4 h已能基本提取完全。
參考文獻(xiàn)
1，中國(guó)藥典.1995.一部：520
2，許正斌，佟婉筠，楊光.刺五加各部位有效成分的含量測(cè)定.中草藥，1984，15(5)：32
(本文于1999年3月26日收到), 百拇醫(yī)藥
單位：?jiǎn)谭?張清波 盧守奇(黑龍江省藥品檢驗(yàn)所 哈爾濱 150001)；馮兆云(黑龍江澤揚(yáng)制藥有限公司 哈爾濱 150038)
關(guān)鍵詞：刺五加制劑；異梣皮定；高效液相色譜
藥物分析雜志000309 摘要 目的：建立測(cè)定刺五加制劑中異梣皮定的高效液相色譜法。方法：采用YMC-ODS(4.6 mm×150 mm)色譜柱，以乙腈-水-甲酸(15∶85∶1)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)345 nm，外標(biāo)法定量。結(jié)果：異梣皮定在0.05～0.4 μg.mL-1內(nèi)呈線性關(guān)系，片劑及浸膏的方法回收率分別為97.14%和99.32%(n=5)，RSD分別為1.8%和1.1%。結(jié)論：此法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。
Determination of Isofraxidin in Ciwujia Preparation by HPLC
, 百拇醫(yī)藥
Qiao Fei，Zhang Qingbo，Lu Shouqi
(Heilongjiang Institute for Drug Control,Ha′erbin 150001)
Feng Zhaoyun
(Heilong jiang Zeyang Pharmaceutical Limeted Company Harbin)
Abstract Objective：A HPLC method was developed for the determination of isofraxidin in Ciwujia preparation.Methods:Using an ODS column(4.6 mm×150 mm).The mobile phase consisted of acelonitrile-water-formic acid(85∶15∶1).The UV detection wavelength was 345 nm.The concentration of isofraxidin was quantified by external standard method.Results:Within 0.05～0.4 μg.mL-1,isofraxidin had a good li-nearity.The average recovery of Ciwujia tablet was 97.14% with RSD of 1.8% and the average recovery of Ciwujia extract was 99.32% with RSD of 1.1%.Conclusion:The method is simple,accurate and reproducible.
, 百拇醫(yī)藥
Key words Ciwujia preparation,isofraxidin,HPLC
刺五加浸膏及片劑系由刺五加Acanthopanax senticosus(Rupr.et Maxin.)Harms.單味藥材加工而成，具有益氣健脾，補(bǔ)腎安神等功效[1]，含有多種化學(xué)成分，如異梣皮定，丁香苷等。其中異梣皮定(isofraxidin)具有明顯的鎮(zhèn)靜作用。文獻(xiàn)報(bào)道其含量測(cè)定有薄層層析紫外法[2]。本文采用HPLC法測(cè)定刺五加片及浸膏中異梣皮定的含量，并對(duì)色譜條件進(jìn)行了考察，結(jié)果表明此法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。
1 儀器與試藥
SP2000高效液相色譜儀，SP2000紫外檢測(cè)器(美國(guó)光譜物理公司)。
對(duì)照品為沈陽(yáng)藥科大學(xué)天然藥物研究所提供的精制品，經(jīng)HPLC測(cè)定異梣皮定的含量99.7%。
, 百拇醫(yī)藥
刺五加浸膏(黑龍江省一面坡制藥廠，黑龍江尚志青云制藥廠)；刺五加片(黑龍江省一面坡制藥廠，黑龍江省南岔制藥廠)，每片相當(dāng)于刺五加浸膏0.15 g；甲醇等試劑均為分析純。
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件 色譜柱：YMC-ODS柱(150 mm×4.6 mm)；柱溫：室溫；流動(dòng)相：乙腈-水-甲酸(15∶85∶1)；流速1.0 mL.min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：345 nm，靈敏度：0.1 AUFS。對(duì)照品及樣品圖譜見(jiàn)圖1。
2.2 線性關(guān)系考察 精密稱(chēng)取異梣皮定對(duì)照品，加甲醇制成0.02 mg.mL-1的溶液，按上述色譜條件分別進(jìn)樣2，6，10，14，18 μL，測(cè)定。以對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：
, 百拇醫(yī)藥
Y=2.277×106X+1.145×104 r=0.999 1
線性范圍為0.05～0.4 μg。
2.3 精密度試驗(yàn) 取上述0.02 mg.mL-1對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次10 μL，結(jié)果峰面積的RSD為1.0%。
圖1 異梣皮定色譜圖
A.異NFDA1皮定對(duì)照品 B.刺五加浸膏 C.刺五加片
1.異梣皮定
2.4 重現(xiàn)性試驗(yàn) 分別取同一批號(hào)刺五加浸膏及片劑各5份，照“2.6”項(xiàng)下方法操作，測(cè)定峰面積并計(jì)算含量，結(jié)果RSD分別為3.3%和2.7%(n=5)。
, http://www.www.srpcoatings.com
2.5 回收率測(cè)定 取已測(cè)知含量的刺五加浸膏0.2 g，刺五加片劑0.4 g，各5份，分別精密加入對(duì)照品0.117 5 mg，照“2.6”項(xiàng)下方法操作，測(cè)得片劑平均回收率為97.14%，RSD為1.8%，浸膏平均回收率為99.32%，RSD為1.1%(n=5)。
2.6 樣品測(cè)定 刺五加片供試品溶液：取本品20片，除去糖衣，精密稱(chēng)定，平均片重為0.224 4g，研細(xì)，取2 g精密稱(chēng)定，置索氏提取器中，加氯仿適量，加熱回流4 h，將提取液回收氯仿至干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 mL量瓶?jī)?nèi)，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。刺五加浸膏供試品溶液：取本品0.3 g，精密稱(chēng)定，加20%乙醇20 mL使溶解，置分液漏斗中，用氯仿提取3次，每次15 mL，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 mL量瓶?jī)?nèi)，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。分別精密吸取0.02 mg.mL-1對(duì)照品溶液與上述供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定。5批片劑的每片含量分別為0.027，0.024，0.020，0.012，0.017 mg(n=2)；浸膏含量分別為0.099%，0.074%，0.066%，0.068%，0.072%(n=2)。
, 百拇醫(yī)藥
3 討論
3.1 刺五加生藥測(cè)定方法與結(jié)果 取刺五加粗粉5 g，精密稱(chēng)定，置索氏提取器中，加氯仿適量，加熱回流提取至提取液無(wú)色，回收氯仿至干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。分別精密吸取0.02 mg.mL-1異梣皮定對(duì)照品溶液及上述供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，色譜條件同正文，測(cè)定，結(jié)果含異梣皮定以干燥品計(jì)為0.004%～0.006%。
3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)選擇 取異梣皮定對(duì)照品溶液，進(jìn)行紫外掃描，其最大吸收波長(zhǎng)為345 nm，因此確定其檢測(cè)波長(zhǎng)為345 nm。
3.3 流動(dòng)相選擇 進(jìn)行色譜系統(tǒng)選擇時(shí)，分別用甲醇-水、乙腈-水、乙腈-水-甲酸系統(tǒng)對(duì)樣品進(jìn)行分離，結(jié)果以乙腈-水-甲酸系統(tǒng)(85∶15∶1)的分離效果為佳。
, 百拇醫(yī)藥 3.4 供試品溶液的制備方法的考察 分別對(duì)刺五加浸膏進(jìn)行了氯仿索氏回流提取、氯仿超聲、氯仿萃取的處理方法，但提取均不完全，將浸膏先溶解，再萃取，效果較理想；對(duì)刺五加片，分別用甲醇和氯仿進(jìn)行索氏回流提取試驗(yàn)，結(jié)果氯仿提取的雜質(zhì)少，分離效果好，通過(guò)對(duì)回流時(shí)間的考察發(fā)現(xiàn)4 h已能基本提取完全。
參考文獻(xiàn)
1，中國(guó)藥典.1995.一部：520
2，許正斌，佟婉筠，楊光.刺五加各部位有效成分的含量測(cè)定.中草藥，1984，15(5)：32
(本文于1999年3月26日收到), 百拇醫(yī)藥