茶多酚對(duì)矽塵處理大鼠肺膠原mRNA表達(dá)水平的影響
作者:何永華 趙伯陽(yáng) 王廣增
單位:何永華(湖南省勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病防治研究所勞動(dòng)衛(wèi)生科,長(zhǎng)沙 410007);趙伯陽(yáng) 王廣增(華北煤炭醫(yī)學(xué)院衛(wèi)生系)
關(guān)鍵詞:茶多酚;石英;矽肺;膠原mRNA
衛(wèi)生毒理學(xué)雜志000113
摘要 【目的】 從分子水平探討茶多酚(GTP)抑制矽肺纖維化的機(jī)制!痉椒ā 使用人Proα1(Ⅰ)、Proα1(Ⅲ)型膠原cDNA探針,采用Northern雜交技術(shù),觀察矽塵處理大鼠在飲用不同劑量茶多酚飲水后,肺膠原mRNA水平!窘Y(jié)果】 經(jīng)各劑量茶多酚處理染塵大鼠Proα1(Ⅰ)和Proα1(Ⅲ)表達(dá)水平均不同程度低于矽肺對(duì)照組大鼠,14 mg/ml GTP組下降最為明顯!窘Y(jié)論】 GTP可能抑制矽肺肺膠原基因表達(dá)。
, 百拇醫(yī)藥
The effect of green tea polyphenols on expression levels of pulmonary collagen mRNA in rats treated by silica
HE Yong-Hua,ZHAO Bo-Yang,WANG Guan-Zeng.
(Hunan lnstitute of Occupational Health,Changsha,410007,China.)
Abstract:【Objective】 To Study the inlibition effect of GTP on the molcular mechanism of fibrogenesis in silicosis.【Methods】 Human Proα1(Ⅰ) and Proα1(Ⅲ) cDNA probes and Northern Blot hybridization were employed to determine the lung collagen mRNA levels in silica-treated rats, given various doses of green tea polyphenols(GTP) in drinking water.【Results】 It showed that Proα1(Ⅰ) and Pro α1(Ⅲ) mRNA levels of silica-treated rats given various doses of GTP were lower,particularly at dose of 14 mg/ml GTP,than those of the silicosis rats.【Conclusion】 It was saggested that GTP may inhibit the gene expression of lung collagen in silicosis.
, 百拇醫(yī)藥
Key words:Green tea polyphenols;Silica;Silicosis;Collagen mRNA
矽肺的基本病理變化是肺組織膠原蛋白過(guò)度增生和積聚。在矽肺的發(fā)展過(guò)程中,Ⅰ、Ⅲ型膠原基因表達(dá)水平發(fā)生了明顯改變[1,2]。眾多研究表明抗氧化劑如漢防己甲素能清除自由基,抑制膠原基因表達(dá),對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性矽肺具有明顯的防治作用[3]。根據(jù)同樣原理,我們觀察了茶多酚(green tea polyphenols,GTP)對(duì)染塵大鼠肺組織Ⅰ、Ⅲ型膠原α1型前膠原多肽[Proα1(Ⅰ)、Proα1(Ⅲ)]mRNA表達(dá)的影響,探討GTP抑制矽肺纖維化的分子機(jī)制。
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康雄性Wistar大鼠,體重(200±20)g。由華北煤炭醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
, 百拇醫(yī)藥
1.2 儀器及試劑 3MK冷凍離心機(jī)(Sigma產(chǎn)品)、LKB2310電泳儀(Bromma產(chǎn)品)、Lambda 3B紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(Perkin-Elmer);硝酸纖維素(NC)膜(華美公司)、異硫氰酸胍、二乙基焦炭酸鈉、十二烷基肌苷酸鈉(Serva)、Prime-α-gene labelling system(Promega)、α-32P-dCTP(亞輝公司)、Proα1(Ⅰ) cDNA,Proα1(Ⅲ) cDNA(中國(guó)預(yù)防醫(yī)科院勞衛(wèi)所提供)。其插入片斷分別為4.6、4.5 kB,重組位點(diǎn)均為EcoR1;GTP購(gòu)于浙江農(nóng)業(yè)大學(xué),純度大于95%,不含咖啡堿。
1.3 制備大鼠矽肺模型及給藥 將大鼠隨機(jī)分為10組,各劑量組分別給予GTP濃度為14、7、2.8 mg/ml的飲水(約合0.50、0.25、0.10 g/kg體重),對(duì)照組給予單純飲水。3天適應(yīng)期后,各染塵組大鼠經(jīng)氣管內(nèi)灌注50 mg/ml石英懸液1 ml,空白對(duì)照組以生理鹽水代替石英塵。繼續(xù)按上述劑量給予GTP飲水或單純飲水,普通飼料喂養(yǎng)2至4個(gè)月。
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1.4 大鼠肺組織總RNA提取及轉(zhuǎn)膜 處死大鼠,取出肺組織速凍。用改良胍酚法提取肺組織總RNA[5],并取RNA樣品于紫外可見(jiàn)光光度計(jì)測(cè)定A230、A260、A280,計(jì)算RNA濃度及純度。取20 μg RNA樣品在含甲醛的瓊脂糖凝膠中電泳。電泳結(jié)束后于紫外燈下觀察RNA的完整性。將NC膜覆蓋在RNA樣品的瓊脂糖凝膠上,用毛細(xì)管洗脫法將RNA完全轉(zhuǎn)移到NC膜上[5],并干燥固定。
1.5 Northern雜交[6] 將結(jié)合RNA的NC膜編號(hào),封于雜交管,加入預(yù)雜交液,預(yù)雜交24 h。再將標(biāo)記好的cDNA探針加入雜交管中,42 ℃雜交24 h。取出膜,洗去非特異性結(jié)合的探針,置于暗盒中放射自顯影。顯影結(jié)果用圖像分析系統(tǒng)作灰度分析。
1.6 統(tǒng)計(jì)分析方法 用SAS軟件作方差分析。
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2 結(jié)果
2.1 RNA完整性及純度 電泳后,樣品18 S,28 S條帶清晰可見(jiàn),18 S與28 S條帶比例接近2∶1。A260/A280比值均在1.8以上。表明RNA提取后無(wú)蛋白質(zhì)或酚的污染。
2.2 Northern雜交結(jié)果(表1、表2)
表1 飲用GTP 2個(gè)月大鼠肺組織Ⅰ、Ⅲ型膠原α1前膠原多肽
mRNA的表達(dá)水平(密度值)(
±s) 組別
Proα1(Ⅰ)
Proα1(Ⅲ)
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空白對(duì)照組
8.8±1.4**
12.2±2.4*
矽塵對(duì)照組
16.7±2.3
18.1±3.7
GTP(mg/ml)
14
10.6±1.6**
14.2±2.4**
7
, http://www.www.srpcoatings.com
11.6±1.9**
15.7±2.4**
2.8
14.0±3.7
16.5±2.7
n=3;與矽塵對(duì)照組比較,*P<0.05,**P<0.01表2 飲用GPT 4個(gè)月大鼠肺組織Ⅰ、Ⅲ型膠原α1前膠原多肽
mRNA的表達(dá)水平(密度值)(
±s) 組別
Proα1(Ⅰ)
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Proα1(Ⅲ)
空白對(duì)照組
9.6±2.5**
12.4±2.2**
矽塵對(duì)照組
18.3±3.0
19.3±2.1
GTP(mg/ml)
14
12.6±2.2**
14.5±2.5**
, 百拇醫(yī)藥
7
13.8±2.7**
16.0±3.1*
2.8
16.8±3.0
17.6±2.7
n=3;與矽塵對(duì)照組比較,*P<0.05,**P<0.01 大鼠染塵后,Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)水平均明顯升高。其中2個(gè)月時(shí)矽塵對(duì)照組Proα(Ⅰ) mRNA比同期正常組增加1倍以上,4個(gè)月時(shí)矽塵對(duì)照組Proα1(Ⅰ) mRNA比同期正常組增加了將近1倍。GTP各組染塵大鼠的Proα1(Ⅰ) mRNA、Proα1(Ⅲ) mRNA水平有不同程度下降。14 mg/ml GTP、7 mg/ml GTP組與同期矽塵對(duì)照組相比,差異具有顯著性(P<0.01或P<0.05)。
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3 討論
Makela等[1]首次發(fā)現(xiàn)大鼠實(shí)驗(yàn)性矽肺組織中Ⅰ型膠原基因表達(dá)水平升高以來(lái),矽肺研究取得了更深層次的進(jìn)展。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)大鼠自染塵7天起,肺組織Proα1(Ⅰ) 、Proα1(Ⅲ) mRNA含量即開(kāi)始增加,且Proα1(Ⅰ) mRNA的高峰在染塵后30 d。Proα1(Ⅲ) mRNA高峰在染塵后4~21 d,30 d后趨于平穩(wěn),并與矽肺組織中Ⅰ、Ⅲ型膠原變化規(guī)律同步,顯示膠原mRNA水平與膠原蛋白合成水平一致[2,7]。可以認(rèn)為矽肺病變組織中膠原纖維的積聚是由于石英粉塵引起的膠原基因表達(dá)增強(qiáng)所致。因此,尋找抑制石英粉塵致膠原mRNA表達(dá)的藥物,將使矽肺的防治更具方向性。
GTP是綠茶中提取的多酚類化合物,具有強(qiáng)大的清除自由基抗氧化性能,生物性能廣泛[8]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),較高劑量GTP組的染塵大鼠肺膠原的mRNA表達(dá)降低,按有效系數(shù)=(矽塵對(duì)照組-GTP某劑量組)/(矽塵對(duì)照組-空白對(duì)照組)計(jì)算,14 mg/ml GTP組Proα1(Ⅰ),Proα1(Ⅲ) mRNA在4個(gè)月時(shí),有效系數(shù)分別為68%和69%。
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有實(shí)驗(yàn)表明石英粉塵能促進(jìn)體外培養(yǎng)的人胚肺成纖維細(xì)胞膠原mRNA合成,銅藍(lán)蛋白和纖維粘連蛋白對(duì)膠原基因轉(zhuǎn)錄呈協(xié)同作用[9]。我們以前的實(shí)驗(yàn)表明GTP能降低染塵大鼠血清銅藍(lán)蛋白活性,這可能與GTP抑制膠原基因表達(dá)有關(guān);各期2.8 mg/ml GTP組染塵大鼠肺纖維化程度均比同期矽肺對(duì)照組低,然而本實(shí)驗(yàn)表明,2.8 mg/ml GTP組Proα1(Ⅰ)、Proα1(Ⅲ) mRNA卻沒(méi)有明顯改變。提示GTP抑制矽肺纖維化不完全是因?yàn)镚TP降低肺膠原基因表達(dá)所致,還有可能通過(guò)別的途徑來(lái)發(fā)揮作用,如通過(guò)清除超氧陰離子自由基,使羥自由基產(chǎn)量減少,羥脯氨酸、羥賴氨酸合成受阻,膠原纖維不能大量產(chǎn)生并積聚。
參考文獻(xiàn)
[1] Makela Jk,Vuorio E.Type α1 collagene messenger RNA levels in eperimental granulation tissue and silicosis.Med Biol,1986,64:15-26.
, 百拇醫(yī)藥
[2] 陳亞萍,李玉瑞.實(shí)驗(yàn)隆矽肺病變中Ⅰ型及Ⅲ型膠原基因表達(dá)的研究.衛(wèi)生研究,1993,22:1-4.
[3] 王NFDA1蘭,剛葆琪.塵肺防治藥物.見(jiàn):現(xiàn)代勞動(dòng)衛(wèi)生學(xué).北京:人民衛(wèi)生出版社,1994,92-98.
[4] 尤寶榮,劉秉慈,王海華,等.漢防己甲素對(duì)矽肺大鼠肺膠原代謝的作用.衛(wèi)生研究,1996,25:201-203.
[5] Chomozgnski P,Sacchi N.Single step method of RNA isolation by acid Guanicyanate-phenol-chloroform extraction. Anal Biochem,1987,162:156-159.
[6] Thomas PS.Hybridization of denatured RNA and small DNA fragments transferred to nitrocellulose.Pro Natl Acad,1980,77:5201-5222.
[7] 胡汛,余蘭,李玉瑞.矽肺大鼠肺組織Ⅰ型與Ⅲ型膠原含量及其比值變化的研究.衛(wèi)生研究,1989,18:6-8.
[8] 陳為均,萬(wàn)圣勤,等.茶多酚藥效研究概況.中草藥,1993,24:493-499.
[9] 劉秉慈,尤寶榮,劉玉瑛,等.酮藍(lán)蛋白及纖維粘連蛋白對(duì)石英粉塵促進(jìn)膠原轉(zhuǎn)錄的協(xié)同作用.生物化學(xué)雜志,1993,9:190-193.
(收稿日期:1998-10-28), 百拇醫(yī)藥
單位:何永華(湖南省勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病防治研究所勞動(dòng)衛(wèi)生科,長(zhǎng)沙 410007);趙伯陽(yáng) 王廣增(華北煤炭醫(yī)學(xué)院衛(wèi)生系)
關(guān)鍵詞:茶多酚;石英;矽肺;膠原mRNA
衛(wèi)生毒理學(xué)雜志000113
摘要 【目的】 從分子水平探討茶多酚(GTP)抑制矽肺纖維化的機(jī)制!痉椒ā 使用人Proα1(Ⅰ)、Proα1(Ⅲ)型膠原cDNA探針,采用Northern雜交技術(shù),觀察矽塵處理大鼠在飲用不同劑量茶多酚飲水后,肺膠原mRNA水平!窘Y(jié)果】 經(jīng)各劑量茶多酚處理染塵大鼠Proα1(Ⅰ)和Proα1(Ⅲ)表達(dá)水平均不同程度低于矽肺對(duì)照組大鼠,14 mg/ml GTP組下降最為明顯!窘Y(jié)論】 GTP可能抑制矽肺肺膠原基因表達(dá)。
, 百拇醫(yī)藥
The effect of green tea polyphenols on expression levels of pulmonary collagen mRNA in rats treated by silica
HE Yong-Hua,ZHAO Bo-Yang,WANG Guan-Zeng.
(Hunan lnstitute of Occupational Health,Changsha,410007,China.)
Abstract:【Objective】 To Study the inlibition effect of GTP on the molcular mechanism of fibrogenesis in silicosis.【Methods】 Human Proα1(Ⅰ) and Proα1(Ⅲ) cDNA probes and Northern Blot hybridization were employed to determine the lung collagen mRNA levels in silica-treated rats, given various doses of green tea polyphenols(GTP) in drinking water.【Results】 It showed that Proα1(Ⅰ) and Pro α1(Ⅲ) mRNA levels of silica-treated rats given various doses of GTP were lower,particularly at dose of 14 mg/ml GTP,than those of the silicosis rats.【Conclusion】 It was saggested that GTP may inhibit the gene expression of lung collagen in silicosis.
, 百拇醫(yī)藥
Key words:Green tea polyphenols;Silica;Silicosis;Collagen mRNA
矽肺的基本病理變化是肺組織膠原蛋白過(guò)度增生和積聚。在矽肺的發(fā)展過(guò)程中,Ⅰ、Ⅲ型膠原基因表達(dá)水平發(fā)生了明顯改變[1,2]。眾多研究表明抗氧化劑如漢防己甲素能清除自由基,抑制膠原基因表達(dá),對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性矽肺具有明顯的防治作用[3]。根據(jù)同樣原理,我們觀察了茶多酚(green tea polyphenols,GTP)對(duì)染塵大鼠肺組織Ⅰ、Ⅲ型膠原α1型前膠原多肽[Proα1(Ⅰ)、Proα1(Ⅲ)]mRNA表達(dá)的影響,探討GTP抑制矽肺纖維化的分子機(jī)制。
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康雄性Wistar大鼠,體重(200±20)g。由華北煤炭醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
, 百拇醫(yī)藥
1.2 儀器及試劑 3MK冷凍離心機(jī)(Sigma產(chǎn)品)、LKB2310電泳儀(Bromma產(chǎn)品)、Lambda 3B紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(Perkin-Elmer);硝酸纖維素(NC)膜(華美公司)、異硫氰酸胍、二乙基焦炭酸鈉、十二烷基肌苷酸鈉(Serva)、Prime-α-gene labelling system(Promega)、α-32P-dCTP(亞輝公司)、Proα1(Ⅰ) cDNA,Proα1(Ⅲ) cDNA(中國(guó)預(yù)防醫(yī)科院勞衛(wèi)所提供)。其插入片斷分別為4.6、4.5 kB,重組位點(diǎn)均為EcoR1;GTP購(gòu)于浙江農(nóng)業(yè)大學(xué),純度大于95%,不含咖啡堿。
1.3 制備大鼠矽肺模型及給藥 將大鼠隨機(jī)分為10組,各劑量組分別給予GTP濃度為14、7、2.8 mg/ml的飲水(約合0.50、0.25、0.10 g/kg體重),對(duì)照組給予單純飲水。3天適應(yīng)期后,各染塵組大鼠經(jīng)氣管內(nèi)灌注50 mg/ml石英懸液1 ml,空白對(duì)照組以生理鹽水代替石英塵。繼續(xù)按上述劑量給予GTP飲水或單純飲水,普通飼料喂養(yǎng)2至4個(gè)月。
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1.4 大鼠肺組織總RNA提取及轉(zhuǎn)膜 處死大鼠,取出肺組織速凍。用改良胍酚法提取肺組織總RNA[5],并取RNA樣品于紫外可見(jiàn)光光度計(jì)測(cè)定A230、A260、A280,計(jì)算RNA濃度及純度。取20 μg RNA樣品在含甲醛的瓊脂糖凝膠中電泳。電泳結(jié)束后于紫外燈下觀察RNA的完整性。將NC膜覆蓋在RNA樣品的瓊脂糖凝膠上,用毛細(xì)管洗脫法將RNA完全轉(zhuǎn)移到NC膜上[5],并干燥固定。
1.5 Northern雜交[6] 將結(jié)合RNA的NC膜編號(hào),封于雜交管,加入預(yù)雜交液,預(yù)雜交24 h。再將標(biāo)記好的cDNA探針加入雜交管中,42 ℃雜交24 h。取出膜,洗去非特異性結(jié)合的探針,置于暗盒中放射自顯影。顯影結(jié)果用圖像分析系統(tǒng)作灰度分析。
1.6 統(tǒng)計(jì)分析方法 用SAS軟件作方差分析。
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2 結(jié)果
2.1 RNA完整性及純度 電泳后,樣品18 S,28 S條帶清晰可見(jiàn),18 S與28 S條帶比例接近2∶1。A260/A280比值均在1.8以上。表明RNA提取后無(wú)蛋白質(zhì)或酚的污染。
2.2 Northern雜交結(jié)果(表1、表2)
表1 飲用GTP 2個(gè)月大鼠肺組織Ⅰ、Ⅲ型膠原α1前膠原多肽
mRNA的表達(dá)水平(密度值)(
Proα1(Ⅰ)
Proα1(Ⅲ)
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空白對(duì)照組
8.8±1.4**
12.2±2.4*
矽塵對(duì)照組
16.7±2.3
18.1±3.7
GTP(mg/ml)
14
10.6±1.6**
14.2±2.4**
7
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11.6±1.9**
15.7±2.4**
2.8
14.0±3.7
16.5±2.7
n=3;與矽塵對(duì)照組比較,*P<0.05,**P<0.01表2 飲用GPT 4個(gè)月大鼠肺組織Ⅰ、Ⅲ型膠原α1前膠原多肽
mRNA的表達(dá)水平(密度值)(
Proα1(Ⅰ)
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Proα1(Ⅲ)
空白對(duì)照組
9.6±2.5**
12.4±2.2**
矽塵對(duì)照組
18.3±3.0
19.3±2.1
GTP(mg/ml)
14
12.6±2.2**
14.5±2.5**
, 百拇醫(yī)藥
7
13.8±2.7**
16.0±3.1*
2.8
16.8±3.0
17.6±2.7
n=3;與矽塵對(duì)照組比較,*P<0.05,**P<0.01 大鼠染塵后,Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)水平均明顯升高。其中2個(gè)月時(shí)矽塵對(duì)照組Proα(Ⅰ) mRNA比同期正常組增加1倍以上,4個(gè)月時(shí)矽塵對(duì)照組Proα1(Ⅰ) mRNA比同期正常組增加了將近1倍。GTP各組染塵大鼠的Proα1(Ⅰ) mRNA、Proα1(Ⅲ) mRNA水平有不同程度下降。14 mg/ml GTP、7 mg/ml GTP組與同期矽塵對(duì)照組相比,差異具有顯著性(P<0.01或P<0.05)。
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3 討論
Makela等[1]首次發(fā)現(xiàn)大鼠實(shí)驗(yàn)性矽肺組織中Ⅰ型膠原基因表達(dá)水平升高以來(lái),矽肺研究取得了更深層次的進(jìn)展。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)大鼠自染塵7天起,肺組織Proα1(Ⅰ) 、Proα1(Ⅲ) mRNA含量即開(kāi)始增加,且Proα1(Ⅰ) mRNA的高峰在染塵后30 d。Proα1(Ⅲ) mRNA高峰在染塵后4~21 d,30 d后趨于平穩(wěn),并與矽肺組織中Ⅰ、Ⅲ型膠原變化規(guī)律同步,顯示膠原mRNA水平與膠原蛋白合成水平一致[2,7]。可以認(rèn)為矽肺病變組織中膠原纖維的積聚是由于石英粉塵引起的膠原基因表達(dá)增強(qiáng)所致。因此,尋找抑制石英粉塵致膠原mRNA表達(dá)的藥物,將使矽肺的防治更具方向性。
GTP是綠茶中提取的多酚類化合物,具有強(qiáng)大的清除自由基抗氧化性能,生物性能廣泛[8]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),較高劑量GTP組的染塵大鼠肺膠原的mRNA表達(dá)降低,按有效系數(shù)=(矽塵對(duì)照組-GTP某劑量組)/(矽塵對(duì)照組-空白對(duì)照組)計(jì)算,14 mg/ml GTP組Proα1(Ⅰ),Proα1(Ⅲ) mRNA在4個(gè)月時(shí),有效系數(shù)分別為68%和69%。
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有實(shí)驗(yàn)表明石英粉塵能促進(jìn)體外培養(yǎng)的人胚肺成纖維細(xì)胞膠原mRNA合成,銅藍(lán)蛋白和纖維粘連蛋白對(duì)膠原基因轉(zhuǎn)錄呈協(xié)同作用[9]。我們以前的實(shí)驗(yàn)表明GTP能降低染塵大鼠血清銅藍(lán)蛋白活性,這可能與GTP抑制膠原基因表達(dá)有關(guān);各期2.8 mg/ml GTP組染塵大鼠肺纖維化程度均比同期矽肺對(duì)照組低,然而本實(shí)驗(yàn)表明,2.8 mg/ml GTP組Proα1(Ⅰ)、Proα1(Ⅲ) mRNA卻沒(méi)有明顯改變。提示GTP抑制矽肺纖維化不完全是因?yàn)镚TP降低肺膠原基因表達(dá)所致,還有可能通過(guò)別的途徑來(lái)發(fā)揮作用,如通過(guò)清除超氧陰離子自由基,使羥自由基產(chǎn)量減少,羥脯氨酸、羥賴氨酸合成受阻,膠原纖維不能大量產(chǎn)生并積聚。
參考文獻(xiàn)
[1] Makela Jk,Vuorio E.Type α1 collagene messenger RNA levels in eperimental granulation tissue and silicosis.Med Biol,1986,64:15-26.
, 百拇醫(yī)藥
[2] 陳亞萍,李玉瑞.實(shí)驗(yàn)隆矽肺病變中Ⅰ型及Ⅲ型膠原基因表達(dá)的研究.衛(wèi)生研究,1993,22:1-4.
[3] 王NFDA1蘭,剛葆琪.塵肺防治藥物.見(jiàn):現(xiàn)代勞動(dòng)衛(wèi)生學(xué).北京:人民衛(wèi)生出版社,1994,92-98.
[4] 尤寶榮,劉秉慈,王海華,等.漢防己甲素對(duì)矽肺大鼠肺膠原代謝的作用.衛(wèi)生研究,1996,25:201-203.
[5] Chomozgnski P,Sacchi N.Single step method of RNA isolation by acid Guanicyanate-phenol-chloroform extraction. Anal Biochem,1987,162:156-159.
[6] Thomas PS.Hybridization of denatured RNA and small DNA fragments transferred to nitrocellulose.Pro Natl Acad,1980,77:5201-5222.
[7] 胡汛,余蘭,李玉瑞.矽肺大鼠肺組織Ⅰ型與Ⅲ型膠原含量及其比值變化的研究.衛(wèi)生研究,1989,18:6-8.
[8] 陳為均,萬(wàn)圣勤,等.茶多酚藥效研究概況.中草藥,1993,24:493-499.
[9] 劉秉慈,尤寶榮,劉玉瑛,等.酮藍(lán)蛋白及纖維粘連蛋白對(duì)石英粉塵促進(jìn)膠原轉(zhuǎn)錄的協(xié)同作用.生物化學(xué)雜志,1993,9:190-193.
(收稿日期:1998-10-28), 百拇醫(yī)藥