卡爾曼濾波光度法同時測定槐米中蘆丁和槲皮素
作者：王麗琴 黨高潮 顧瑩
單位：王麗琴 黨高潮(西北大學分析測試研究中心)；顧瑩(陜西省中醫(yī)藥研究院 西安 710013)
關鍵詞：
藥物分析雜志000125 蘆丁是槲皮素3位上的羥基與蕓香糖脫水形成的苷，二者均屬黃酮類化合物[1]。由于二者的吸收光譜嚴重重疊，它們的定量分析方法，均需分離后進行測定，繁瑣費時，誤差較大�？柭鼮V波對重疊的譜峰有較強的分辨功能[2～4]，本文采用卡爾曼濾波分光光度法不經(jīng)分離，對混合物(模擬樣品、槐米提取物和市售梗塞凈藥物)中的蘆丁和槲皮素進行同時測定。方法簡便快速，精密度和準確度亦令人滿意。
1 儀器與試劑
730型和751 G紫外可見分光光度計(上海第三分析儀器廠和上海分析儀器廠)，386微機。
, 百拇醫(yī)藥
蘆丁、槲皮素標準品(中國藥品生物制品檢定所)，甲醇、氫氧化鈉、醋酸鈉均為國產(chǎn)分析純，水為2次蒸餾水。
2 實驗方法
2.1 標準溶液配制 分別準確稱取2.0 mg左右的蘆丁、槲皮素，用甲醇溶解，分別移入25 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。分別吸取一定體積的標準溶液于25 mL容量瓶中，以甲醇-水(1∶4)稀釋至刻度，配制2個系列(每個系列3～5個)溶液。
2.2 吸光系數(shù)確定 取上述系列標準溶液，在230～300 nm范圍內，每間隔2 nm測其吸光度，數(shù)據(jù)進行線性回歸處理，求出各自的吸光系數(shù)。
2.3 樣品測定 模擬樣品：分別移取不同體積的蘆丁和槲皮素標準溶液于同一容量瓶中，以甲醇-水(1∶4)稀釋至刻度，在同樣的波長范圍測吸光度，上機濾波處理，求出其含量；對于實際樣品：只需準確稱取一定量樣品，甲醇溶解后，以上述相同的方法測定其蘆丁和槲皮素的含量。
, 百拇醫(yī)藥
3 結果與討論
3.1 溶劑的選擇 主要從樣品的溶解度和穩(wěn)定性考慮。選稀堿(醋酸鈉、氫氧化鈉)水溶液、甲醇、不同比例的甲醇-水進行試驗。結果表明，樣品不溶于醋酸鈉溶液；而稀氫氧化鈉溶液對待測物質的穩(wěn)定性影響較大，很短時間就使蘆丁、槲皮素2種溶液由亮黃色變?yōu)樽攸S色；蘆丁在1∶4的甲醇水溶液中穩(wěn)定性最好(放置4 h吸光度變化小于0.5%)，槲皮素在純甲醇中能較長時間存在(放置3 h吸光度變化亦小于0.5%)，且其在1∶4的甲醇-水溶劑中能穩(wěn)定1 h，符合測定要求。所以本文在配制標準溶液、測定樣品均取甲醇-水(1∶4)為溶劑。
3.2 吸收曲線 圖1是蘆丁、槲皮素及其混合溶液的吸收光譜。從圖1可知，蘆丁、槲皮素的λmax相差很小，用普通光度法無法進行同時測定；但它們混合溶液的吸光度符合加和性原則，可滿足卡爾曼濾波分光光度法同時測定多組分的條件。
, http://www.www.srpcoatings.com
圖1 吸收曲線
1. 槲皮素(3.84 μg.mL-1) 2. 蘆丁(16.0 μg.mL-1)
3. 混合溶液(濃度同上)
3.3 確定系數(shù)矩陣 根據(jù)吸收光譜，蘆丁、槲皮素在230～400 nm范圍，波形和加和性均較好，因而首先在該波段，間隔5 nm求系數(shù)矩陣，2物質的吸光度與濃度之間的線性關系還可以(相關系數(shù)在0.99左右)，但濾波后蘆丁的回收率偏低，只有90%。在300～370 nm，間隔2 nm，測得吸光度與濃度間線性關系不好，引起吸光系數(shù)變化異常。在230～300 nm，間隔2 nm測定，計算發(fā)現(xiàn)：蘆丁、槲皮素加和性良好，線性相關系數(shù)一般在0.999以上，樣品中2者的回收率亦達97%。其原因可能是該波段均位于2個待測物質的最大吸收峰附近，光度測量的靈敏度和準確度均較高所致。因此選該區(qū)間為測量范圍，吸光系數(shù)矩陣為H36×2。
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3.4 精密度和回收率實驗 取蘆丁、槲皮素濃度一定的模擬樣品分別測定5次，計算RSD分別為2.54%和1.54%。取已知含量的模擬樣品6個，加入蘆丁、槲皮素適量，測定其含量，結果方法的平均回收率分別為：蘆丁99.1%(n=6,RSD=1.58%)，槲皮素99.2%(n=6,RSD=1.98%)。
3.5 樣品測定 槐米提取物中主要含有蘆丁，但也有部分蘆丁水解失去蕓香糖生成的槲皮素。采用本文提出的方法與藥典方法[5]測定了待測物質的含量，結果列于表1。與藥典方法相比，卡爾曼濾波分光光度法(KFUV)簡便快速，克服了乙醚、甲醇2次回流提取的冗長繁瑣操作，方法的準確度和精密度也較高。
表1 槐米提取物中蘆丁和槲皮素的測定(n=3) 組 分
含量±RSD/%
本 法
, 百拇醫(yī)藥
藥典法
蘆 丁
82.32±0.45
81.98±1.9
槲皮素
9.59±1.2
■
參考文獻：
[1]南京藥學院.藥物化學.北京：人民衛(wèi)生出版社，1978.529
[2]Poulisse H N J.Multicomponent-analysis computations based on Kalman filtering.Anal Chim Acta,1979,112:361
[3]李志良，劉一鳴，俞汝勤.卡爾曼濾波分光光度法用于復方雷瑣涂劑中苯酚與間苯二酚的測定.高等學�；瘜W學報，1989，10：575
[4]蔣萬銀，李國峰，李志明等.卡爾曼濾波分光光度法測定復方雙氯滅痛注射液的含量.中國藥學雜志，1994，29：159
[5]中國藥典.1995.一部：311
收稿日期：1999-03-09, http://www.www.srpcoatings.com
單位：王麗琴 黨高潮(西北大學分析測試研究中心)；顧瑩(陜西省中醫(yī)藥研究院 西安 710013)
關鍵詞：
藥物分析雜志000125 蘆丁是槲皮素3位上的羥基與蕓香糖脫水形成的苷，二者均屬黃酮類化合物[1]。由于二者的吸收光譜嚴重重疊，它們的定量分析方法，均需分離后進行測定，繁瑣費時，誤差較大�？柭鼮V波對重疊的譜峰有較強的分辨功能[2～4]，本文采用卡爾曼濾波分光光度法不經(jīng)分離，對混合物(模擬樣品、槐米提取物和市售梗塞凈藥物)中的蘆丁和槲皮素進行同時測定。方法簡便快速，精密度和準確度亦令人滿意。
1 儀器與試劑
730型和751 G紫外可見分光光度計(上海第三分析儀器廠和上海分析儀器廠)，386微機。
, 百拇醫(yī)藥
蘆丁、槲皮素標準品(中國藥品生物制品檢定所)，甲醇、氫氧化鈉、醋酸鈉均為國產(chǎn)分析純，水為2次蒸餾水。
2 實驗方法
2.1 標準溶液配制 分別準確稱取2.0 mg左右的蘆丁、槲皮素，用甲醇溶解，分別移入25 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。分別吸取一定體積的標準溶液于25 mL容量瓶中，以甲醇-水(1∶4)稀釋至刻度，配制2個系列(每個系列3～5個)溶液。
2.2 吸光系數(shù)確定 取上述系列標準溶液，在230～300 nm范圍內，每間隔2 nm測其吸光度，數(shù)據(jù)進行線性回歸處理，求出各自的吸光系數(shù)。
2.3 樣品測定 模擬樣品：分別移取不同體積的蘆丁和槲皮素標準溶液于同一容量瓶中，以甲醇-水(1∶4)稀釋至刻度，在同樣的波長范圍測吸光度，上機濾波處理，求出其含量；對于實際樣品：只需準確稱取一定量樣品，甲醇溶解后，以上述相同的方法測定其蘆丁和槲皮素的含量。
, 百拇醫(yī)藥
3 結果與討論
3.1 溶劑的選擇 主要從樣品的溶解度和穩(wěn)定性考慮。選稀堿(醋酸鈉、氫氧化鈉)水溶液、甲醇、不同比例的甲醇-水進行試驗。結果表明，樣品不溶于醋酸鈉溶液；而稀氫氧化鈉溶液對待測物質的穩(wěn)定性影響較大，很短時間就使蘆丁、槲皮素2種溶液由亮黃色變?yōu)樽攸S色；蘆丁在1∶4的甲醇水溶液中穩(wěn)定性最好(放置4 h吸光度變化小于0.5%)，槲皮素在純甲醇中能較長時間存在(放置3 h吸光度變化亦小于0.5%)，且其在1∶4的甲醇-水溶劑中能穩(wěn)定1 h，符合測定要求。所以本文在配制標準溶液、測定樣品均取甲醇-水(1∶4)為溶劑。
3.2 吸收曲線 圖1是蘆丁、槲皮素及其混合溶液的吸收光譜。從圖1可知，蘆丁、槲皮素的λmax相差很小，用普通光度法無法進行同時測定；但它們混合溶液的吸光度符合加和性原則，可滿足卡爾曼濾波分光光度法同時測定多組分的條件。
, http://www.www.srpcoatings.com
圖1 吸收曲線
1. 槲皮素(3.84 μg.mL-1) 2. 蘆丁(16.0 μg.mL-1)
3. 混合溶液(濃度同上)
3.3 確定系數(shù)矩陣 根據(jù)吸收光譜，蘆丁、槲皮素在230～400 nm范圍，波形和加和性均較好，因而首先在該波段，間隔5 nm求系數(shù)矩陣，2物質的吸光度與濃度之間的線性關系還可以(相關系數(shù)在0.99左右)，但濾波后蘆丁的回收率偏低，只有90%。在300～370 nm，間隔2 nm，測得吸光度與濃度間線性關系不好，引起吸光系數(shù)變化異常。在230～300 nm，間隔2 nm測定，計算發(fā)現(xiàn)：蘆丁、槲皮素加和性良好，線性相關系數(shù)一般在0.999以上，樣品中2者的回收率亦達97%。其原因可能是該波段均位于2個待測物質的最大吸收峰附近，光度測量的靈敏度和準確度均較高所致。因此選該區(qū)間為測量范圍，吸光系數(shù)矩陣為H36×2。
, http://www.www.srpcoatings.com
3.4 精密度和回收率實驗 取蘆丁、槲皮素濃度一定的模擬樣品分別測定5次，計算RSD分別為2.54%和1.54%。取已知含量的模擬樣品6個，加入蘆丁、槲皮素適量，測定其含量，結果方法的平均回收率分別為：蘆丁99.1%(n=6,RSD=1.58%)，槲皮素99.2%(n=6,RSD=1.98%)。
3.5 樣品測定 槐米提取物中主要含有蘆丁，但也有部分蘆丁水解失去蕓香糖生成的槲皮素。采用本文提出的方法與藥典方法[5]測定了待測物質的含量，結果列于表1。與藥典方法相比，卡爾曼濾波分光光度法(KFUV)簡便快速，克服了乙醚、甲醇2次回流提取的冗長繁瑣操作，方法的準確度和精密度也較高。
表1 槐米提取物中蘆丁和槲皮素的測定(n=3) 組 分
含量±RSD/%
本 法
, 百拇醫(yī)藥
藥典法
蘆 丁
82.32±0.45
81.98±1.9
槲皮素
9.59±1.2
■
參考文獻：
[1]南京藥學院.藥物化學.北京：人民衛(wèi)生出版社，1978.529
[2]Poulisse H N J.Multicomponent-analysis computations based on Kalman filtering.Anal Chim Acta,1979,112:361
[3]李志良，劉一鳴，俞汝勤.卡爾曼濾波分光光度法用于復方雷瑣涂劑中苯酚與間苯二酚的測定.高等學�；瘜W學報，1989，10：575
[4]蔣萬銀，李國峰，李志明等.卡爾曼濾波分光光度法測定復方雙氯滅痛注射液的含量.中國藥學雜志，1994，29：159
[5]中國藥典.1995.一部：311
收稿日期：1999-03-09, http://www.www.srpcoatings.com